Способ определения спонтанной деформабельности эритроцитов на препарате Советский патент 1991 года по МПК G01N33/48 A61B10/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к физико-хтлическим исследованиям крови, и может быть использовано для изучения пластичности и стабильности мембраны эритроцитов при патологии.

Способ осуществляется следующим образом.

Кровь в количестве 1-2 мкл, взятую из пальца, переносят в одну из лунок планшета для иммунологических исследований, которую предварительно заполняют 0,18-0,2 мл физиологической среды: 0,15 М раствор хлорида натрия на 0,1 М фосфатном буфере рН 7,4. Перемешивают смесь пластиковым наконечником микропипетки или осторожно пипетируют. Затем закрывают планшет крышкой и оставляют в таком виде при комнатной температуре 21±2°С. Эритроциты при этом спонтанно изменяют свою форму без воздействия внешней силы.

Спустя 1 ч для остановки процесса в лунку вносят 0,02 мл 25% фиксатора - глю- таральдегида, перемешивают содержимое

и через 3-5 мин на предметном стекле готовят препарат раздавленной капли, который затем микроскопируют.

Учет результатов спонтанно протекающей деформации эритроцитов проводят путем подсчета не менее 200 клеток, встречающихся в поле зрения. При этом дифференцируют следующие клетки: дискоциты - клетки нормальной формы с двояковогнутой поверхностью, эхиноциты - с зубчатой или шиповидной поверхностью и все остальные клетки, обозначенные как другие формы Основную часть других форм клеток обычно составляют стомациты и книзоциты Результаты выражают в процентах.

С целью упрощения условий спонтанно протекающей деформации клеток, инкубацию их проводили при комнатной температуре при которой оптимально необходимое время экспозиции составило 1 ч или 60-65 мин. После добавления в лунку фиксатора приготовление препарата раздавленной капли для микроскопии объекта вовсе не обязательно

(Л

С

о

О 00

о

VS

00

проводить немедленно. Форма клеток остается стабильной в течение 3-4 сут наблюде- ния и меняется лишь при высыхании содержимого лунки. Это очень удобно как при серийных исследованиях в эксперимен- те, так и в повседневной работе клинической лаборатории.

П р и м е р 1. Пробу крови (1 мкл) здорового человека переносят в лунку 96-луноч- ного планшета, смешивают с помещенной в нее физиологической средой (0,2 мл), накрывают крышкой и оставляют стоять на столе при обычных условиях. Спустя 60 мин в лунку добавляют 0,02 мл 25% глюторальдегида и через 3-5 мин готовят препарат раздав- ленной капли для микросколии. Дифференцированный подсчет клеток показал: суммарное количество эхиноцитов 46,5%, всех других форм 8,5%, дискоцитов 45%, что расценено как хорошее состояние пла- стичности эритроцитов при достаточной стабильности их наружной мембраны.

П р и м е р 2. Пробу крови (1 мкл) больного хронической пневмонией переносили в физиологическую среду, инкубировали и фиксировали по такой же методике. Подсчет клеток обнаружил 32,5% эхиноцитов, 24% других форм и 43,5% дискоцитов.что расценено как снижение пластичности эритроци- тов при достаточной стабильности их наружной мембраны.

ПримерЗ. Пробу кровм (1 мкл) больного острой пневмонией переносили в физиологическую среду, инкубировали и фиксировали по описанной методике. Под- счет клеток выяэил 90,5% зхиноцитов.9,5% дискоцитов и полное отсутствие других форм клеток, что расценено как повышение пластичности эритроцитов при нестабильном состоянии их наружной мембраны.

При обследовании установлено, что наибольшее число шиповидно-деформи- рованных эритроцитов (эхиноцитов) об- разовывалось у больных острой неспецифической пневмонией 65,5±4,3%, затем у здоровых лиц 48,4 ± 4,4% и больных хронической пневмонией в фазе обострения 36,97± 6,6%, а наименьшее их количество у больных сахарным диабетом 16,1 ±2,7%. Напротив , наибольшее число всех других деформированных клеток оказалось у пациентов с сахарным диабетом 62,8 ± 3,4%, а наименьшее - у больных хронической пневмонией 19,4 ±3,2%.

Деформабельность эритроцитов является одним из параметров, определяющим реалогию крови. В предлагаемом способе число эхиноцитов, образующихся в физиологической среде, прямо пропорционально способности эритроцитов изменять свою форму, т.е. пластичности, а число образующихся других форм клеток в такой же мере соответствует стабильности их наружной мембраны, поскольку не сопровождается образованием локальных выпячиваний мембранного вещества.

Таким образом, предлагаемый способ определения спонтанно протекающей деформации эритроцитов в физиологической среде отражает существенные биологические сдвиги в организме.

Предлагаемый способ позволяет характеризовать специфическое сострянле мембраны эритроцитов не только больных и здоровых лиц, но и при том или-ином патологическом процессе, и может быть использован как дополнительный тест в динамическом контроле за течением заболевания.

Формула изобретения

Способ определения спонтанной де- формабельности эритроцитов на препарате путем забора крови, инкубации в среде, содержащей раствор хлорида натрия, изготовления препарата раздавленной капли и выявления шиповато-деформированных эритроцитов, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа путем выявления степени деформабельности, инкубацию проводят при (21±2)°С в течение 60-65 мин, при этом 0,15 М раствор хлорида натрия готовят на 0,1 М фосфатном буфере рН 7,4, а перед изготовлением препарата раздавленной капли в среду добавляют раствор глютарового альдегида до 2,5- 3,0%-ной концентрации, .и при наличии на препарате до 60-100% шиповато-деформированных эритроцитов определяют высокую степень деформабельности эритроцитов, а при наличии до 30-59% шиповато-деформированных эритроцитов - низкую.

Изобретение относится к медицине, а именно, к гематологии. Целью является повышение точности способа путем выявления степени деформабельности эритроцитов. Это достигается тем, что кровь инкуибируют с 0,15 М раствором хлорида натрия, приготовленным на 0,1 М фосфатном буфере рН 7,4. При этом инкубацию проводят при комнатной температуре в течение 60-65 мин. Далее к крови добавляют глютаровый альдегид и готовят препарат раздавленной капли. Под микроскопом просчитывают количество шиповато-измененных эритроцитов и по их содержанию определяют степень деформабельности эритроцитов.