Способ прогнозирования течения интегументных форм красной волчанки Советский патент 1991 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к дермато-венерологии, может применяться для определения длительности ремиссии интегументных форм красной волчанки (ИКВ).

Цель изобретения - повышение точности способа за счет определения длительности ремиссии.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу, включающему определение в сыворотки крови антител против внутриклеточных ферментов вы- ,являют в1 сыворотке крови антитела- к нейраминидазе и при их наличии прогнозируют длительность ремиссии в .пределах 4-9 мес, а при отсутствии - более 9 мес.

Способ осуществляется следующим образом.

При поступлении у больного берут кровь из вены натощак в количестве 5-6 мл и после 15-минутной инкубации в термостате при 37°С центрифугируют и отделяют образовавшуюся сыворотку. Полученную таким образом сыворотку разводят сорбентом (мясопептонным бульоном и т.д.) по предварительно установленному титру. Ставят иммуно- ферментный тест (ИФА). В качестве твердофазного носителя применяют полистироловые планшеты с 96 лунками. Плас-тины сенсибилизируют коммерческим- препаратом нейраминидазы, нехолерных вибрионов, в разведении по титру в

о со оо i

vj

со

количестве 0,2 мл, растворенным в . дистиллированной воде с последующей инкубацией в течение 18-20 ч при комнатной температуре. После трехкратно- го отмывания в физиологическом растворе с твином-20 на высушенные плашки наносят испытуемые сыворотки (по 0,2 мл), разведенные по титру в сорбенте и выдержанные в термостате при 37°С в течение 1 ч. Плашки помещают в термостат при 37°С на 30 мин. После этого плашки промывают, высушивают, наносят по 0,2 мл конъюгата и инкубируют в термостате в течение 30 мин. Конъюгатом служат сухие кроличьи антитела против иммуноглобулинов : человека, меченные пероксидазой хрена, растворенные в сорбенте и в изотоническом растворе. 1:1. Индикатором является 5-аминоса-1 лициловая кислота с 0,05%-ной Нг02. При каждой постановке реакции ставят контроли: контроль положительной сыворотки (АГ+СВ+КТ+СБ), контроль отридательной сыворотки (АГ+СВ+КТ+СБ), контроль субстрата (АГ+ФР+ФР+СБ), конторль конъюгата (АГ+ФР+КТ+СБ).

Кроме того, для определения специфичности полученных результатов; ста- вили следующие контроли: плашки, без нейраминидазы + конъюгат + сыворотка больного; плашки без нейраминидазы + + сыворотка больного с положительной реакцией с последующим истощением препаратом нейраминидазы + конъюгат, плашки без нейраминидазы + нейраминидаз + конъюгат. После приливания , субстратной смеси контроли должны быть все отрицательными.

Реакцию учитывают визуально или проводят инструментальную оценку. В лунках планшета, где прошла реакция, появляется окрашивание от светло- до темно-коричневого. В лунках, где проводилось исследование отрицательной сыворотки, цвет субстрата светло- или темно-бежевый.

При визуальной оценке результатов ЙФА бесцветный и светло-бежевый субстрат соответствует отрицательным рё- зультатам, бежевый, темно-бежевый - 1 кресту (отрицательный результат), .бежевый, коричневый - 2 крестам, , светло-коричневый - 3 крестам, ко- ричневый и темно-коричневый - 4 кресгам.

2-крестовые и выше результаты счищали положительными, т.е. определяли

0 5

0

наличие антител к неираминидазе и длительность ремиссии в пределах 4- 9 мес.

П р и м е р 1. Б-й, С-в, 30 лет, находился в дерматологической клини- . ке с.12.03 по 23.04.87 по поводу дискойдной красной волчанки. В сыворотке крови обнаружены антитела против нейраминидазы, прогнозирующие длительность ремиссии 4-9 мес. Проведено лечение. Выписан со значительны улучшением клинических проявлений. Прогноз подтвердился дальнейшим нием болезни. Обострение наступило через 6 мес после первой выписки.

Пример 2. Б-й Б-н, 47 лет, находился в клинике с 20.01 по 16.03.87. При поступлении в сыворот ке крови зарегистрировано отсутствия антител к нейраминидазе, что прогно- зировало -длительность ремиссии боле 9 мес и наличие антител к лактатде- гидрогеназе. Проведено лечение. Боль ной выписан с исчезновением клиничес- ких проявлений. Длительность ремиссии подтвердилась катамнестическим наблюдением. Ремиссия болезни наблюдается более ,2 лет.

В настоящее время предлагаемым способом прослежена .длительность ремиссии у 25 больных ИКВ (3 женщины и 22 мужчины). Длительность заболевания от 1 года до 17 лет, возраст больных от 20 до 60 лет.

Исследования обработаны статистически с применением критерия Пирсо- -на-Х2 (хи-квадрат).

Из 25 больных ИКВ антитела к нейраминидазе, позволяющие определять длительность ремиссии в пределах 4- 9 мес, обнаружены у 14, при дальнейшем наблюдении длительность ремиссии подтвердилась у .13 (точность способа 92,8%), в то время, как положительные результаты по выявлению антител к лактатдегидрогеназе,(прототип) были лишь у 4 больных с длительностью ремиссии 4-9 мес (точность способа прототипа 30,8%). Следовательно, точность определения длительности ремиссии с помощью предлагаемого способа повышается (X2 7,6| р 0,01).

Отрицательные результаты по выявлению антител к нейраминидазе, позволяющие прогнозировать длительность ремиссии более 9 мес, были у 11 ббль- ньпс. Продолжительность такой ремиссии подтвердилась у 10 больных ИКВ

31698779b

(точность способа 90,9%). Отрицатель-тем иммунологического исследования „;

ные результаты прототипа зарегистри-сыворотки и выявления антител к фер рованы у этих больных лишь в 2 случа-менту с последующим анализом, о т ях (точность прототипа 20,0%). ,личающийся тем, что, с цеТаким образом, предлагаемый способлью повышения точности за счет опрепозволяет повысить точность при опре-деления длительности ремиссии, выяв; делении длительности ремиссии болееляют антитела к ферменту нейраминида-9 мес (X2 7,1,,01).зеи при их наличии определяют длиФормула изобретения,IQтельность ремиссии в пределах 4Способ прогнозирования течения ин-9 мес, а при их отсутствии - более

тегументных форм красной волчанки пу-9 мес.

Изобретение относится к медицине, а .именно к дерматовенерологии, и может применяться для определения длительности ремиссии интегументных форм красной волчанки. Цель изобретения - повышение точности предлагаемого способа за счет определения длительности ремиссии. Для этого в сыворотке крови, взятой до начала лечения, в иммуноферментном анализе определяют антитела к нейраминидазе. В зависимости от полученных результатов определяют характер дальнейшего течения болезни. Положительный эффект предлагаемого изобретения заключается в том, что точность определения длительности ремиссии повышается до 90,9-92,8% по сравнению с прототипом- 56 определением антител к лактатдегидро- геназе. (Я