Способ получения индуктора устойчивости корнеплодов сахарной свеклы Советский патент 1991 года по МПК C12N1/14 C12N1/14 C12R1/645 A01N63/00 

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к получению индуктора устойчивости корнеплодов сахарной свеклы путем экстракции мицелия гриба Botrytis cinerea.

Известен способ получения индуктора устойчивости сахарной свеклы путем экстракции мицелия гриба В.cinerea, выращенного поверхностно на жидкой минеральной среде Чапека, при следующем соотношении компонентов, мае.%:

Азотнокиспый натрий 1,0 Фосфорнокислый одноза- мещенный клинч1,0

Сернокислый магний 0,5 Хлористый калчй 0,5 Сернокислое железо 0,01 Сахароза30.0

Оптимальная температура -20-2.0С,, рН среды 5,8. Выход cvxoft биомассы за 14 дней не превышает 7,3 г на 1000 ил среды, активность индуктора, полученного из гриба, выращенного таким образом, составляет 21,5. Активность индуктора выражается степенью устойчивости обработанном свеклы, в сраьнегшч с необработанными растениям:;) .

Недостатком известного способа является длительность куль птннрования

ел

to

20-30

1,0-2,0

0,3-0,5

0,03-0,05

30,0-40,0

остальное,

15

20

из-за медленного роста гриба, низкая производительность, т.к. поверхностное культивирование гриба дает мало мицелия и недостаточную активность полу- г чаемого индуктора.

Цель изобретения - ускорение процесса, повышение ныхода и активности индуктора. ,

Способ заключается в следующем. Q Гриб Botrytis cinerea выращен глубинно при температуре 20-24°С на среде, содержащей (мас.%): мочевину

калий фосфорнокислый однозамещенный магний сернокислый цинк сернокислый сахароза

вода дистиллированная

рН среды 5Э8Э 4-5 суток. Затем отделяют биомассу и выделяют индуктор из -сухой биомассы гриба экстракцией 70%-ным кипящим этанолом в 15 отношении биомасса:этанол 1:10 в течение 30 мин,

Реакционную смесь фильтруют, центрифугируют и выпаривают.

Способ иллюстрируется примерами. jg Пример 1. Подготовка питательной среды. 1,5-3,5 г мочевины, 0,5- 2,5 г калия фосфорнокислого однозаме- щепного, 0,3-0,5 г магния сернокислого, 0,02-0,05 г цинка сернокислого 35 и 30-40 г сахарозы растворяют в литре дистиллированной воды. Полученную среду разливают в качалочные колбы по 100 мл в каждую, закрывают ватно-мар- левымк пробками и стерилизуют при $о 0,5 атм Б течение 30 мин. Конкретный состав среды указан в таблице.

Подготовка посевного материала. Посевной материал выращивают на свекловичном агаре в чашках Петри или про- 45 бирках на косяках при 20-22°С до полного споропошения (примерно 7-8 сут). Перед посевом споры смывают жидкой питательной средой, встряхивают 10 мин для получения стабильной суспензии. . о

Ферментация. Суспензию спор стерильно вносят в качалочные колбы с предлагаемой питательной средой. Плотность спор должна быть 0,5-1,0 х10 шт/мл среды.

Культивирование осуществляют в термостате при 22-24°С в течение 4- 5 суток. Выросший мицелий отделяют фильтрованием от культуральной жид1700052

кости, промывают и сушат при комнатной температуре до постоянного веса. Выход сухой биомассы на средах с различным соотношением компонентов указан в таблице.

Получение индуктора. Сухую биомассу экстрагируют 70%-ным кипящим этиловым спиртом в отношении биомасса: :спирт 1:10. Экстракция идет в течение 20 мин при температуре кипения спирта. Смесь фильтруют, центрифугируют при 5000 об/мин для осаждения спор. Центрифугат выпаривают с помощью пленочного испарителя. Высушенный осадок растворяют в таком количестве 70%-ного спирта, которое соответствует массе навески. Это маточный раствор, из которого готовят рабочие растворы нужной концентрации.

Определение активности индуктора. Активность индуктора - это способность повышать устойчивость сахарной свеклы к возбудителям кагатной гнили. Устойчивость определяется соотношением гнилой и здоровой ткани, по формуле:

где А - %

100.

55

гнилой ткани в контрольной пробе;

В - % гнилой ткани в 5вежеобрабо- танной индуктором 0,003%-ным раствором индуктора обрабатывают свекловичные корнеплоды. Для определения активности индуктора на корнеплоды наносят инокулят в виде вырезок мицелия гриба диаметром 4 мм.

Через 5-6 дней попе заражения вырезают и взвешивают загнившую ткань и рассчитывают процентное содержание гнилой ткани в пробе.

Активность индуктора из мицелия гриба, выращенного на средах разного состава, показана в таблице.

Сведения, приведенные в таблице, наглядно показывают, что в тех случаях, когда содержание компонентов ниже предлагаемого интервала концентраций (примеры 3,5,9), положительный эффект не столь велик.

В примерах 1,2,7,8,10 приведены данные по составам в пределах предлагаемого интервала концентраций и сведения по потерям свекломассы и сахара в корнеплодах.

Таким образом, применение предлагаемого способа получения индуктора

муле:

100.

где А - %

гнилой ткани в контрольной пробе;

В - % гнилой ткани в 5вежеобрабо- танной индуктором 0,003%-ным раствором индуктора обрабатывают свекловичные корнеплоды. Для определения активности индуктора на корнеплоды наносят инокулят в виде вырезок мицелия гриба диаметром 4 мм.

Через 5-6 дней попе заражения вырезают и взвешивают загнившую ткань и рассчитывают процентное содержание гнилой ткани в пробе.

Активность индуктора из мицелия гриба, выращенного на средах разного состава, показана в таблице.

Сведения, приведенные в таблице, наглядно показывают, что в тех случаях, когда содержание компонентов ниже предлагаемого интервала концентраций (примеры 3,5,9), положительный эффект не столь велик.

В примерах 1,2,7,8,10 приведены данные по составам в пределах предлагаемого интервала концентраций и сведения по потерям свекломассы и сахара в корнеплодах.

Таким образом, применение предлагаемого способа получения индуктора

устойчивости г.лчоляет сократить время выращивания мицелия, увеличить количество мицелия и повысить активность индуктора,5

Формула изобретения

Способ получения индуктора устойчивости корнеплодов сахарной свеклы, 10 включающий вырарщвание гриба Botrytis cinerea на питательной среде, содержащей источник ззота сахарозу, калий фосфорнокислый однозамещенный, магний сернокислыйj соль серной кислоты 15 и воду, отделение мицелия гриба и выделение индуктора из биомассы путем экстракции спиртомs отличающийся тем, что, с целью ускорения процесса и повышения выхода целевого продукта, из источников азота используют мочевину, из солей сернокислой кислоты - сернокислый цинк при следующем соотношении компонентов (мас.%):

Мочевина2,

Калий фосфорнокислый однозаме- щенный1,0-2,0

Магний сернокислый 0,3-0,5 Цинк сернокислый0,03-0,05

Сахароза30-40,0

ВодаОстальное

при этом выращивание осуществляют глубинным методом.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к получению индуктора устойчивости корнеплодов сахарной свеклы путем экстракции мицелия гриба Botrytis cinerea. Цель изобретения - устранение процесса, повышение выхода и активности индуктора. Способ получения индуктора заключается в следующем: гриб Botrytis cinerea выращивают глубинно при температуре 20-24°С, на среде содержащей (мас,%): мочевина 20-30, калий фосфорнокислый однозамещенный 1,0-2,0, магний сернокислый 0,3-0,5, цинк сернокислый 0,03-0,05, сахароза 30,0- 40,0, вода дистиллированная - остальное, рН среды 5,8; время культивирования 4-5 суток. Затем отделяют биомассу и выделяют индуктор кз сухой биомассы гриба экстракцией 7Q% кипящим этанолом в соотношении биомасса: этанол 1:10 в течение 30 мин. Реакционную смесь фильтруют, центриЛугирллот и выпаривают. Применение способа получения индуктора устойчивости позволяет сократить время выращивания мицелия, увеличить количество мицелия и повысить активность индуктора, (Л

Влияние разного соотношения компонентов питательной среды на выход мицелия и активность индуктора

18,0

40,0

16„П

35,4

22,2

18,5

12/

10,2

20,1

1

2

3

4

15

16

IV

V

I

II

III

TV

V

1

II

LTI

IV

V

I

IL

III

IV

V

I

II

III

IV

V

I

II

III

IV

V

I

II

III

IV

V

I

TI

III

IV V

I

II

III

IV

V

1

II

III

IV V

I II

0,05 40,0

3,0

2,5

0,5

0,05 40,0

3,0

2,0

0,5

0,03 40,0

3,0

2,0

0,5

0,01 40,0

3,0

2,0

0,5

0,06 40,0

3,0

2,0

0,3

0,05 40,0 3,0 2,0 . 0,6 0,05

40,5 3,0 2,0 0,2 0,05

40,0 3,0 2,0 0,5 0,05

30,0 3,0 2,0 0,5 0,05

25,0 3,0 2,0

Продолжение таблицы

18,

1/.7

38,5

16,4

35,2

P. 8

39,5

17,8 38,1

18,2

40,6

о 5

17,1

40,0

17,Ь

17,

39,4

1700052

10 Продочжение таПлицы