СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПЛЕКСА ПЕКТОЛИТИЧЕСКИХ И ЦЕЛЛЮЛОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТНЫХ ПРЕПАРАТОВ Советский патент 1971 года по МПК C12N9/14 

Изобретение относится к ферментной промышленности, а именно к способу получения комплекса пектолитических и целлюлолитических ферментных препаратов.

Известен способ получения комплекса пектолитических и целлюлолитических ферментных препаратов путем выращивания продуцентов Botrytis cinerea на питательной среде, содержащей свекловичный жом и отруби, с последующим выделением ферментов и их сушкой.

Целью изобретения является ускорение процесса получения ферментных препаратов.

Для этого в качестве продуцента используется штамм Botrytis cinerea № 20.

Выращивание штамма Botrytis cinerea № 20 можно осуществлять глубинным способом на среде, содержащей 2% свекловичного жома и 1% отрубей.

В питательную среду можно дополнительно вводить 0,5% кукурузного экстракта, 0,6% сернокислого аммония и 0,2% однозамещенного фосфорнокислого калия.

Выращивают гриб Botrytis cinerea № 20 на питательной среде следующего состава %: свекловичный жом 2, отруби 1, кукурузный экстракт 0,5, сернокислый аммоний 0,6, однозамещенный фосфорнокислый калий 0,2. Первичную расплодку готовят в колбах на качалке при 280 об/мин при 28°С в течение 48 час.

Этой расплодкой в количестве 5% засевают инокулятор-фермент емкостью ЮО л. Здесь выращивание продолжается еще 24 час при тех же условиях с принудительной подачей

воздуха в количестве 1 объема на 1 объем питательной среды в час.

Полученным посевным материалом в количестве 5% засевают производственные ферментеры емкостью 500 л, в которых процесс

выращивания гриба длится 72 час. При этом в культуральной жидкости идет накопление пектолитпческих ферментов. Состав питательной среды и условия выращивания остаются теми же.

Культуральную жидкость отделяют от мицелия на нутч-фильтре и затем сепарируют для лучшей очистки. Полученный фильтрат охлаждают от 10 до 12°С (чем ниже температура, тем лучше). Одновременно охлаждают и спирт ректификат, который используется в качестве осадителя. Затем обе жидкости смешивают в пропорции 1 : 4 (крепость смеси 76°) при естественном рН культуральной жидкости, т. е. 4,5. Через несколько часов образовавшийся осадок отделяют сепарированием, промывают спиртом и окончательно выделяют на нутч-фильтре. Сушку производят на открытом воздухе при комнатной температуре. Выход препарата 0,5%. По внешнему

Таблица

ской активностью 4600 ед1г (объемный медный метод Херсона: Л. А., 1965 г.), с активностью нектннэстеразы 34,6 ед. (метод Лившиц) , активностью нолигалактуроназы 103 ед (метод Лившиц), протеолитической активностью, равной 13,2 е(3/г (по гамма-глобулину) и целлюлолитической активностью (Ci и Сх) соответственно равной 28 и 300 жг/г (радуцирующие сахара определяют по методике Шомодьи Нельсона).

Полученный препарат представляет комплекс ферментов, который был использован в винодельческой промышленности при изготовлении красных столовых, десертных и белых десертных виноматериалов. Штамм № 20 выделен из пораженных серой гнилью ягод сорта Зант белый в 1962 г. в колхозе «Россия Советского района Крымской области. Культивирование гриба проводят на агаризованном солодовом сусле.

Штамм характеризуется следующими морфологическими и физиологическими свойствами. Окраска колоний темно-серая. Мицелий относительно слабо развит. Конидиеиосцы невысокие (2-4 мм), плотно и равномерно расположены по всей поверхности колонии. Спороношение очень обильное. Склероции в культуре отсутствуют. Аппрессории средне развиты, в виде черного тонкого окаймления у стекла по краям колонии. Макроконидии четырех форм: овальные, шаровидные, яйцевидные и эллипсоидальные, собраны в кистевидные головки.

В табл. 1 показаны форма и размер микроконидий (на солодовом сусле-агаре).

Кроме макроконидий, выполняющих основную роль в распространении заболевания, штамм Botrytis cinerea № 20 формирует .микроконидии до 2-3 мк диаметром, собранные в головки различной формы и величины, которые крепятся на конидиеносцах пенициллоидного типа.

При выращивании культуры гриба штамма

№ 20 на разных питательных средах выявились некоторые различия в культурально-морфологических признаках. В табл. 2 показано влияние условий питания на морфологические признаки штамма N° 20.

Биологические особенности штамма. Установлено, что очень интенсивное развитие штамма № 20 наблюдается при 16-27°С и по сравнению с другими разновидностями штамм № 20 является наиболее термофильным. Кроме того, он является единственным штаммом, который при низкой температуре (3°С) образует конидиеносцы с конидиями, а при оптимальных для его развития условиях дает очень обильное спороношение. Развитие

гриба нрекрашается при 29°С.

Таблица 2

Питательные среды

Предмет изобретения

1 % отрубей.

4.Способ по пп. 1 и 3, отличающийся тем, что в питательную среду дополнительно введено 0,5% кукурузного экстракта, 0,6% серпокислого аммония и 0,2% однозамещенного фосфорнокислого калия.