Штамм бактерий VIвRIо NaG 083 серовара, используемый для приготовления моноварной диагностической сыворотки Советский патент 1992 года по МПК C12N1/20 A61K39/40 

Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к серологической идентификации патогенных вибрионов.

Целью изобретения является штамм Vibrio Nag нового 083 серовара, используемый для приготовления моноварной диагностической сыворотки для идентификации патогенных вибрионов.

Штамм Vibrio Nag KM-54 (864) 083 серовара хранится в коллекции Музея живых культур Всесоюзного научно-исследовательского противочумного института Микроб под номером КМ-54 (864).

Штамм Vibrio Nag KM-54 (864) обладает всеми свойствами, характерными для рода Vibrio (табл.1).

Морфологические признаки. Подвижные, слегка изогнутые палочки, спор и капсул не образуют, грамотрицательные.

Культуральные признаки. На плотном А

агаре образует гладкие, круглые прозрачные с ровными краями колонии диаметром 2-2,5 мм. В жидких средах вызывает равномерное помутнение, образует на поверхности пленку.

Физиологические свойства. Оксидазо- положительный, относится к 1 группе Хей- берга, ферментирует глюкозу до кислоты без газа, не ферментирует инозит и салицин, образует индол, ферментирует маннит, декарбоксилирует лизин и орнитин, не ди- гидрирует аргинин, не фосфоресцирует, не растет в 1 %-ной пептонной воде с добавлением 7 и 10% хлорида натрия. Не агглютинируется холерными сыворотками 0, Огава, Инаба, RO и вибрионными диагностическими сыворотками 02-082 сероваров. Не ли- зируется фагами С, Эльтор, ХДФ 3-5,

VI

N) О

сл

ТЭПВ-2, ТЭПВ-3, ТЭПВ-4, ТЭПВ-5 и ТЭПВ-6. Лизируется фагами ТЭПВ-1 и ТЭПВ-7. Лизируется фагами ДДФ.

Обладает специфическим 0-антигеном. При иммунизации кроликов 0-антигеном данного штамма образуют специфические антитела.

П р и м е р 1. Для приготовления моно- варной диагностической сыворотки используют 0-антиген штамма Vibrio Nag KM-54 (864) 083 серовара. Культуру штамма Vibrio Nag KM-54 (864) высевают в 1 %-ную пеп- тонную воду, рН 7,6 и выращивают при 37°С 4 ч, затем пересевают на свежескошенный агар, содержащий настой сердечной мышцы рН 7,6. Посевы инкубируют при 37°С 18-20 ч. Выросшую культуру смывают с агара физиологическим раствором рН 7,2. Полученную микробную взвесь кипятят при 100°С 2 ч с момента закипания в 10%-ном растворе хлорида натрия. Затем взвесь дважды отмывают физиологическим раствором рН 7,2 путем центрифугирования. После контроля на специфическую стерильность микробную взвесь используют для иммунизации кроликов.

Кроликов породы шиншилла весом 2- 2,5 кг иммунизируют трехкратно с трехднев- ным интервалом: первую и вторую иммунизацию делают подкожно по 20 млрд.

м.т., третью инъекцию - 5 млрд. м.т. внутривенно. На седьмые сутки после последней инъекции кроликов обескровливают. Сыворотку консервируют путем добавления мер-.

тиолата натрия 1:10000. Титры сывороток составляют 1:3200. За диагностический титр принято разведение сыворотки 1:400.

Сыворотку применяют в реакции агглютинации с вибрионами. Реакцию агглютинации ставят объемным методом в пробирках. Сыворотку используют в одном разведении - диагностическом титре. Для разведения сывороток и приготовления взвесей культур используют физиологический раствор рН 7,2, Положительной считают реакцию с оценкой 2-4 +.

Сыворотка против вибрионов 083 серовара строго специфична и высокоактивна. Положительная реакция отмечалась только

с гомологичным штаммом (табл.2).

Использование предлагаемой сыворотки при диагностике кишечных заболеваний имеет большое практическое значение, так как расширяет возможности дифференцирования патогенных вибрионов.

Формула изобретения Штамм бактерий Vibrio Nag 083 серовара KM-54 (864), используемый для приготовления моноварной диагностической

сыворотки.

Таблица 2

Использование: медицина, диагностика, микробиология - получение сыворотки с целью идентификации патогенных вибрио нов. Сущность изобретения: культуру штамма Vibrio Nag KM-54 083 серо вара (864) высевают в 1%-ную пептонную воду при рН 7,6. и выращивают при 37°С 4 ч. Инокулят пересеивают петлей на агар рН 7.6. содержащий настой сердечной мышцы. Выращивают 18-20 ч при 37°С. Биомассу смывают физиологическим раствором рН - 7,2, дважды отмывают. Кроликов иммунизируют трехкратно с трехдневным интервалом: первую и вторую инъекции подкожно по 20 млрд. вибрионов, третью - внутривенно 5 млрд. вибрионов. На седьмые сутки кроликов обескровливают. Сыворотку консервируют м ертиолатом натрия 1:10000, диагностический титр сыворотки 1:400, сыворотка специфична, высокоактивна, гетерологических антител не содержит. 2 табл. Ь Ј

Специфичность моноварной сыворотки против патогенных вибрионов 083 серовара