Способ микроклонального размножения грецкого ореха Советский патент 1992 года по МПК A01H4/00 

Изобретение относится к биотехноло- ii/ iti, в частности к способом микроклональ- ного р.:змноженич растений в культуре ткани, и может быть использовано в питом- ниководстве и при селекции ценных древесных рг.стений.

Известен способ мимюразмноженнч орехоплодны;: путем индукции лдьенгивкых побегов из мсрисчим.

Однпко на иернмх л;лпг : кул ливировгг нил мно;г, дповесных в частности ореха (ре.цкого. r.poi . пон-мнепго и некроз ткани кспл;;нт; |Л. к.О Прпс затрудн ei или

ДОмПОТ HiM10r.MO:J; fUIM ПрСцОСС )1МЧ:НОрПЦИИ

побегов и растений. Известно, что потемнение связано с накоплением фенольных соединений, которые, в зависимости от концентрации, угнетают рззритие эксплантатов в культуре.

Наиболее к пподлсл-аемому решению является способ размножения In vitro ореха грецкого, при котором дополнительною побеги дифференцируются з вор- хуше1м.1.л побегов, культигл руемых на среде Мурпсигс:-Скуга и/ш срег-о Вуда с до- басками НУК (0,1-0,5) MI/л; С.A O.J-- 2.0 мг. Д-паитоюноаой кислоты 1 i:- олиопой кислогы 1 мг, гидролизата кг.зг.ина 100 мг,

- 0х

4

K-J

оэ

т

ГАЗ (O.I-0.5} сг. Поте- нен -с гк :;:й устраняют рсл -Ч р .-.телингд -. . з::сГ; Л 3 Ml :jTOT ИЛИ Si D ОЛ I 1 с -1 Ч СОСТЗП

run о i е.п:-.ой сседь- рт .ч.чичных fiimiOr Cii- ДЙНТОУ .я кислота. Флороглю- ЦИ;ПА. г.-т)С.//.--.-эт нутрия. г-лиБироопнпин

ДРО ; ;г 1 й УГОЛ ; И ДД1 )j2j.

Недостатком изпзсг.тго способа, умсньи;..: - Щ1-.м комечн .- й ьгход растений, ясляеш; нспог- эог ние, пооегоп, содержа- щих п 4 р; /а Оо.чыне фенс.льных соединений, ЧПМ, 1:.П,, В .- рОВс. ННЫХ.

Целы . - пог-лгйнке выхода рэсте i::ii-pere.epeiim j.

Пример 1. 1-лстний сеянцы Б коли- чсслве 10 шту : а апреле месяце сысэживгют D сосуды с сомлей и выраи-иьзюг с теплице в темноте. Контролем слу;. 50 растений, содержащиеся Е теплице, но при освещении. Когдг новые этиолированные травяни- стые побеги достигают 10-15 см, а содержание фенольных соединений в них по сравнению с зелеными снижается с 8,0 до 2,0 мг на 100 г cyxoi о веса, верхушечные и бокозые почки в количестве 50 шт. из этиолиро&аниь х побегов и ЬОО uii. из зеленых стерилизуют v;j с тчым способом, вы- сажизгют на аггр..ооеаяную питательную среду Мурэсигь-Скуга (МС). Q которой концентрацию макросолей уменьшают в 4 раза (I этап культивирования, та5/т. 1) и выдержи- сают е темноте. Через неделю эксплантаты переносят на питательную среду МС, содержащую половинную концентрацию макро- солей (II этап гуль иэироЕЗния) и наряду с органическими дсЛзгкзми - фитогормоны: ИМК (C.Oi - 0.02} мг/п и БАП 1 мг/л (табл. 1). 3..ui/iDi;TdiM помещают в условия низкой освещенности (1Г 0-200 лк). Через три недели культивирования используют среду с полной концентрацией МсЖросолей(П этап, табл. 1). а осве.цение эксплантатов увеличивают до 5СО лк. В процессе культивирования выбраковывают почерневшие эксплантаты. Через месяц в варианте с эти- олированным почками осталось 90% не потемневших эксплантатов, тогда как в варианте с зелеными - 88,2% (табл. 2). Че- резтри месяца в варианте с Э1полирорг н-|ы- ми почками было 20,0% начавшими рост побегов, а в варианте с зелеными - 5,8%, т. е. в 3,4 раза маньше.

Пример 2. 3-летние привитые саженцы в количестве 10 UPVK в апреле высаживают о сосуды с земьгй и выращивают в теплица без освещения. Контролем служат 5 растений, содержащихся в теппице при освещении. Когда чооые этиолироэаниые побеги достиго.с длины 10-15 см. а содержание фенольных соединений с них по

срз)нени:о г. зелеными снижается с 8,7 до 2,2 мг 100 г сухого васа, пер-уточные боковые почки в количестве 5Г, шт. из этиолированных и ЦО шт. из зеленых побегов стер /лизуют известным способом и еыса- исг;ют на 31 аризоианную питятопы .- ю среду МС (I этгн культипиросшния), в которой :;онцентряцию мдкросолсй уменьшают в 4 ргза и ьыдер/кипают в темноте (табл. 1). Через неделю эксплантат. переносят на питательную среду МС, содержащую половинную концентрацию м; кросолей (II этап культивирования) и наряду с оргзн/ме- скими добавками - фиюгормоны: ИМК (0,01

- 0,02) мг/л и БАП 1 мг/л (таб/ 1). Эксплантаты помещают в условия низкой освещенности (150-200 лк), Через три недели культивирования используют среду с пол- н:1: концентрацией мчкросолей ( ., табл. 1), а освещение эксплантатов увеличивают до 500 лк. Через месяц в варианте с этиолированными почками осталось 60.0% не потемневших эксплантатов, тогда как в варианте с зелеными - 42,9% (табл. 3). Через три месяца в варианте с этилированными почками было 10.0% намявшими рост побй оо. а в варианте с зелеными - 2,5%, т. е. в 4 раза меньше.

Состав питательных сред, используемых при микроклональном размножении ореха грецкого, представлен в табл. 2

Количество развившихся эксплантатов при культивировании почек из этиолированных и зеленых побегов сеянцев представлено в табл.2.

Количество развившихся эксплантатов при культивировании почек их этиолированных и зеленых побегов привитых саженцев представлено в табл. 3.

Способ позволяет увеличить выход размножаемого растительного материала в 3-4 раза и более по сравнению с HSCCCTHJM. Кроме того, при этом уменьшаются затраты .руда и средств, поскольку уменьшается количество потемневших эксплантатов, на культивирование которых затрачивалась питательная среда и рабочее время. Предлагаемый способ может быть рекомендован и f ля микроклонального размножения других древесных растений с высоким содержанием фенольных соединений в тканях.

Формула изобретения

Способ микроклонального размножения грецкого ореха, включающий вычленение эксплантата от материнского растения, высадку ei о на питательную среду Мурасиге

- Скуга и кулыивирооание до получения побега, о т л и ч а ю щи и с. я тем, что, с цепью повышения выхода растений-регенерантов, н качесгпе материнского растения испольЗуЮТ СО Я И U.S. ИЛИ .in,eC.:OHi.;,:.l, Пр1-. ЗГО;

si-xmoHT- r I гич. из Ь иолиропг.нних

ТПДРЯНИСТиХ ПО:.)ГОЕ МЗТСрИИСКОГ 1 ПЗСТСни1, npsp.i .-ipitre.ibHO bb jv:v. r;, в .

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способам микроклснзльиого размножения растений в культуре ткани, и может быть использовано в питомни- ководст е и при селекции ценных древесных растений. Целью изобретения является повышение ь;,;хода рпстэний-ре- генерантов, Микроклональн.сзе размножение осущестпляют путем использования о качестве материнского растения сеянцев или привитых саженцев, которые предварительно культипг.оуют в темноте до образования травянистых этиолированных побегов. С этих побегов вычленяют эксплантаты, которые затем высаживают на питательную среду Мурасиге-Скугя и культивируют до получения рзстений-реген.ерчнтов. Способ позволяет увеличить выход посадочного материала в 3-4 раза за счет уменьшения количества потемневших эксплантатов. Способ может быть рекомендован для мик- роклонального размножения других дрепос- ных культур. 3 табл. t г

Ко - .гюкенты

Состян сре. ,ТпПС культиБипр1.:;;кл-- , мг/л i

а б л и ц а 1

1G50

1900

440

370

/О

Г, 63

8,6 0,025 0,025 37,3 27.8

100 2

10

0,5

0,5

0.01 - 0,02

30000

7000

Тэблица2

ТаблицаЗ