Способ определения иммунокомпетентных клеток Советский патент 1992 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а. именно к иммунологии и аллергологии, предназначено для использования в клинических и исследовательских целях и может быть использовано в биологии и ветеринарии.

Цель изобретения - повышение точно- сти и упрощение способа.

Способ осуществляют следующим образом.

В лунки круглодонного плейта вносят по 0,05 мл 0,5%-ного раствора хлорида хрома и инкубируют 5 мин при комнатной температуре, после чего полностью удаляют хлорид хрома путем встряхивания плейта резким движением. В лунки вносят по 0,05 мл 0,5%-ной суспензии эритроцитов барана и центрифугируют 10 мин при 1000 об/мин для осаждения и фиксации эритроцитов. В опытные лунки вносят по 0,05 мл теофилли- на в концентрации 1 мг/мл, в контрольные по 0,05 мл 0,9% раствора натрия хлорида на фосфатном буфере (рН 7,2-7,4) и

по 0,05 мл суспензии лимфоцитов в концентрации 5 105 клеток/мл. Инкубируют 30 мин при 37°С, затем помещают в холодильник на 1 ч при 4°С. После инкубации ресус- пендируют неприкрепившиеся лимфоциты и удаляют надосадочную жидкость. В лунки добавляют по 0,1 мл гемолитической жидкости, содержащей 0,8 г/л хлорида аммония и 0,04 г/л этилендиаминотетраацетата (рН 7,2-7,4), на 1 мин. Переносят из каждой лунки по 0,1 мл содержимого в стаканчик с 6,25 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида и подсчитывают число клеток в суспензии на проточном кондуктометрическом цитоанэ- лизаторе Лаборскаль ПСА-1-ПСЛ-1 или аналогичном. Соотношение регуляторных субпопуляций Т-лимфоцитов определяют по формуле.

К - соотношение теофиллин-резистент- ных и теофиллин-чувствительных лимфоцитов; А - количество лимфоцитов в опытной

(Л

о 1

00

пробе; В - количество лимфоцитов в контрольной пробе.

Способ был использован при проведении комплексного иммунологического исследования 170 больных, находившихся на лечении в клиниках Всесоюзного научного центра радиационной медицины. Сравнительный анализ результатов по известному и предлагаемому способам приведены в таблице. /

Как видно из таблицы,при использовании предлагаемого способа отмечена достаточная корреляция показателей при сравнении с известным способом как в области низких, нормальных, так и повышенных значений соотношения субпопуляций.

Способ подтверждается следующим примером.

Приме р. Больной Н., 33 года, диагноз: хронический гепатохрлецистит. Кровь больного 0,05 мл инкубируют 5 мин при комнат- ной температуре. В опытные лунки

добавляют теофиллин, а в контрольные физический раствор. Количество клеток подсчитывают в цитоанализаторе Лаборскаль (табл.).

Технико-экономическая эффективность изобретения: использование заявленного способа позволяет повысить точность при снижении трудоемкости способа, уменьшить расход дефицитных реактивов для

проведения исследований.

Формула изобретения

Способ определения иммунокомпетен- тных клеток.путем выявления количества теофиллин-чувствительных и теофиллин-не- чувствительных клеток, отличающий- с я тем, что, с целью повышения точности и упрощения способа, субпопуляции лимфо- цитов определяют по количеству клеток, присоединенных к фиксированным на поверхности лунки эритроцитам барана в среде, содержащей 1 мг/мл теофиллина.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии и аллергологии, и может быть использовано в биологии и ветеринарии. Цель изобретения - повышение точности и упрощение способа. Исследование популяционного состава лимфоцитов проводят по количеству клеток, соединившихся с фиксированными в лунке плсйта эритроцитами, в среде, содержащей тео-4 филлин, влияющий на экспрессию рецеп- торного аппарата лимфоцитов к эритроцитам барана в зависимости от функциональных характеристик клеток,. Использование заявленного способа позволяет повысить точность при трудоемкости, уменьшить расход дефицитных реактивов для проведения исследований. 1 табл.

Сравнительный анализ выявления соотношения регуляторных субпопуляций Т-лимфоцитов у больного Н-ва, 33 года, диагноз: хронический гепатохолецистит.

Продолжение таблицы