Способ определения иммунокомпетентных клеток Советский патент 1991 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано в качестве скрининг-теста в клинической иммунологии и в практике массовых иммунологических обследований населения и промышленных рабочих.

Цель изобретения - повышение информативности, упрощение и сокращение времени определения розеткообразующих и фагоцитирующих лейкоцитов периферической крови.

Пример. Кровь забирают из пальца в количестве 0,05 мл в пробирку с сухим гепарином (10 ЕД) и проводят гемолиз эритроцитов путем добавления 2 мл охлажденной до +4°С дистиллированной воды. Пробирку встряхивают, добавляют 2 мл двойного (1.8%) физиологического раствора и центрифугируют 5 мин при 200 g Надосадочную жидкость удаляют, добавляют 0,1 мл питательной среды 199 и для устранения шока клетки инкубируют 10 мин при 37°С. Затем к клеткам добавляют в двойном объеме, т. е. по 0,1 мл 0,3%-ную суспензию эритроцитов барана и 0,1 %-ную суспензию комплекса зимозан - комплемент. Без предварительной инкубации (при 37°С) проводят мягкое осаждение клеток центрифугированием в течение 1 мин при 200 g и инкубируют 30 мин при 4°С. Для мягкой фиксации образовавшихся розеток добавляют 0,1 мл 1,5%-ного водного раствора глутарового альдегида, выдерживают 5 мин, сливают надосадочную жидкость и добавляют 0,1 мл физиологического раствора. Готовят мазок, который высушивают на воздухе и фиксируют 10 мин в

О

N hO СО

ч

vl

абсолютном этиловом спирте. Для окраски препарата смешивают extempore 1 ч. 1%- ного водного раствора Азура II и 2 ч. 1 %-но- го водного раствора эозина и окрашивают препарат 5 мин. Препарат промывают водой, высушивают и микроскопируют с иммерсионной системой. При этом просчитывают по 100-200 лимфоцитов и нейтрофилов, принимая за розеткообразующие клетки присоединившие три и более частиц соответствующего индикатора. В препарате определяют следующие лейкоциты:

с рецепторами в эритроцитам барана, т. е. Т-лимфоциты и Е-розеткообразующие ней- трофилы (Е-РОН);

с рецепторами к комплементу, адсорбированному на зимозане, т. е. В-лимфоциты и СЗ-розеткообразующие нейтрофилы (СЗ- РОН);

с рецепторами к обоим индикаторам, т. е. D (двойные)-лимфоциты и двойные розеткообразующие нейтрофилы (Е-СЗ-РОН);

не имеющие рецепторов к соответствующим индикаторам, т. е. нулевые клетки (0-лимфоциты и 0-РОН);

фагоцитирующие клетки среди нейтрофилов, т. е. опсонизирующие комплекс зи- мозан - комплемент.

Положительный эффект подтверждается совпадением результатов определения Т- и В-лимфоцитов периферической крови по предлагаемому способу и известному (в микроварианте раздельного определения Т- и В-лимфоцитов), а также возможностью определения по предлагаемому способу D- и 0-лимфоцитов в препарате. Показана зависимость направленности и глубины изменения количества розеткообразующих лимфоцитов от статуса здоровья обследованных лиц: снижение Т- и повышение В- и Д-клеток при аллергических реакциях, особенно при обострении процесса, и выраженное снижение всех розеткообразующих субпопуляций при вторичном иммунодефиците. Нулевые лимфоциты перераспределяются в зависимости от изменения

количества розеткообразующих субпопуляций.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет значительно повысить информативность, упростить приемы и сократить

время исследования.

Формула изобретения

Способ определения иммунокомпетентных клеток путем добавления к лейкоцитарной взвеси эритроцитов барана с последующей фиксацией глютаровым альдегидом, окраской Азуром II и эозином и определением розеткообразующих Т- и Влимфоцитов, отличающийся тем, что, с целью повышения информативности, упрощения и сокращения времени, в качестве маркера В-лимфоцитов используют 0,1%- ную суспензию комплекса комплемент-зимозан, при этом добавляют 0,03%-ную суспензию эритроцитов барана, фиксируют 1,5%-ным глютаровым альдегидом, окрашивают 1 %-ной смесью Азура II и эозина в соотношении 1:2 и дополнительно определяют Д-, 0-лимфоциты, Е-СЗ-нейтрофилы и нейтрофилы, фагоцитирующие комплекс комплемент-зимозан.

Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано в качестве скрининг-теста в клинической иммунологии и в практике массовых иммунологических обследований. Целью изобретения является повышение информативности, упрощение и сокращение времени исследования. Для этого в 0,05 мл крови проводят гемолиз эритроцитов дистиллированной водой, к лейкоцитам добавляют в двойном объеме (по 0,1 мл) индикаторы для двух типов мембранных рецепторов - 0,03%-ную суспензию эритроцитов барана и 0,1 %-ную суспензию комплекса комплемент - зимо- зан. Образовавшиеся розетки фиксируют 1,5%-ным глютальдегидом, готовят один препарат и окрашивают 5 мин смесью 1 %- ных растворов в соотношении 1:2 Аэура II и эозина. В препарате определяют Т-, В-, Д-, 0-лимфоциты, Е-СЗ-нейтрофилы и нитро- филы, фагоцитирующие комплекс комплемент - зимозан. w Ё