Способ определения метакриловой кислоты в биологическом материале Советский патент 1992 года по МПК G01N33/49 

Изобретение относится к медицине, а именно к способам количественного определения метакриловой кислоты в тканях животных при проведении токсикологических исследований.

Целью изобретения является повышение точности определения метакриловой кислоты в тканях животных и сокращение продолжительности анализа.

Способ осуществляется следующим образом. Навеска анализируемой ткани, например, печени, легкого, мышечной ткани, гомогенизируется в присутствии 0,1N раствора серной кислоты в соотношении 1:1. Такое cooтнoшeflиe пробы и раствора является оптимальным, так как при меньшем соотношении консистенция пробы является

недостаточно подвижной и неудобной для дальнейшего анализа, при большем соотношении - увеличение чувствительности метода необходимо из-за увеличения разведения, что также является нежелательным. После гомогенизации проба вводится в газовый хроматограф при помощи устройства, состоящего из двух частей.

На фиг. 1 представлена нижняя часть устройства - пята; на фиг. 2 - трубка.

Пята имеет конусное отверстие 1, в которое вставляется трубка, заканчивающаяся корпусом 2. В верхней части трубка имеет небольшое отверстие 3 для ввода газа-носителя. Пята находится в испарителе постоянно, а трубка с пробой анализируемой ткани вставляется в пяту во время анализа. Длина

трубки с пятой в собранном виде равна длине испарителя хроматографа. Обе части во время анализа соодиияются герметично, В трубку помещают кусочек стекловолокна или обычной ваты/затем трубка прокаливается до выхода нулевой линии и взвешивается без навески и с навеской гомогената, По разности масс устанавливается точный вес анализируемой пробы ткани. Трубка вводится в испаритель хроматографа, где происходит термодесорбция летучих органических веществ, содержащихся в пробе, в том числе и метакриловой кислоты.

Количественное определение проводится методом абсолютной градуировки прибора по водным растворам метакриловой кислоты в пределах 0,01-1,00 мкг в 10 мл раствора. Чувствительность метода при навеске анализируемой ткани 10 мг - 0.001 мг/г. Расчет содержания МАК проводится по формуле

С ,мг/кг m

где С - концентрация МАК;

g - количество МАК, найденное по графику, мкг;

m - навеска образца, введенного в испаритель, мг;

2 - коэффициент, учитывающий степень разведения при гомогенизации.

Сущность изобретения заключается в совокупности последовательных операций путем использования реактивов в определенном соотношении и конкретного приспособления. Все перечисленные признаки существенны: именно использование металлической трубки, состоящей из двух частей, дает возможность посл.е минимальной обработки пробы ткани (гомогенизация в присутствии О,IN серной кислоты) вводить ее в газовый хроматограф, что повышает точность анализа и значительно сокращает его продолжительность.

П р и м е р 1. Навеску печени контрольной крысы 1,6 г гомогенизировали в присутствии 1,6 мл 0,1 N серной кислоты, затем в гомоге нат вводили 160 мкг метакриловой кислоты в виде водного раствора, концентрация кислоты в ткани 0,05 мкг/мг. Определение метакриловой кислоты в гомогенате проводилось по предлагаемому способу. Проанализированы навески гомогената 10,5 мг, 11,4 мг и 13,0 мг - найдено соответственно 0,47 мкг, 0,52 мкг и 0,б5 мкг кислоты. Таким образом обнаружено 93,5% от введенного количества кислоты.

Пример2. В ходе эксперимента крысы подвергались воздействию метилметакрилата. который подавался в затравочные камеры непрерывно в течение 5 ч в

концентрациях 360-450 мг/м . При попадании в организм метилметакрилат разлагается на метанол и метакриловую кислоту. После затравки одна из крыс забивалась и в

ее печени определялось содержание метакриловой кислоты по указанному способу. С этой целью 2,4 г печени гомогенизируют с 2,4 мл О,IN серной кислоты, вводят пробу в газовый хроматограф при помощи описанного устройства и проводят десорбцию в испарителе хроматографа, Условия анализа: Прибор - хроматограф Цвет-ЮО с пламенно-ионизационным детектором, колонка стеклянная 1 м, заполнена насад5 кой 10% ПЭГА на целите, Тисп. 200°, Ткол. . 120°, мл/мин, Ун2 40 мл/мин, VB03fl 400 мл/мин. Дляпредотвращения адсорбции МАК в поток газа-носителя вводили пары муравьиной кислоты. Время удерживания МАК 3 мин. По градуировочному графику найдено, что в пробе содержится 0,022 мкг МАК следовательно, содержание МАК в печени 0,0046 мг/гТ

Параллельно проводят определение ме5 такриловой кислоты в печени по прототипу: 2,4 г печени растирают, заливают 10 мл серного эфира, выдерживают 20 мин, перемешивая, операцию .повторяют трижды. Серный эфир отделяют от печени фильтрованием, экстракты объединяют, выпаривают эфир, к сухому остатку добавляют 0,5 мл дистиллированной воды и анализируют 10 мкл полученного раствора в тех же условиях, при этом метакриловая кислота была оп5 ределена лишь качественно.

Таким образом, преимущества предлагаемого изобретения, заключаются в том, что данный способ позволяет определять количественное содержание ММА в тканях

0 животных, что является более точным методом. Использование данного способа сокращает время исследований.

Сравнение проводили в моделируемых условиях. В извлеченную печень конт.рольной крысы вводили метакриловую кислоту в количестве 5 мкг/мг. Далее проводили определение по заявляемому способу и протог типу. Результаты анализов представлены в табл.1.

0 Из представленных результатов видно, что точность заявляемого способа намного выше точности способа, взятого в качестве прототипа. Время выпЬлнения одного анализа в заявляемом способе, включая время

5 обработки пробы, 15 мин. Время выполнения одного анализа по способу, взятому ,ч качестве прототипа, более 1 ч.

Формула изобретения Способ определения метакриловой кислоты в биологическом материале путем хроматографического анализа, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и ускорения способа за счет ис1слючения предварительной обработки пробы, пробу гомогенизируют в присутствии O.IN раствора серной кислоты в соотношении 1:1, а ввод пробы в газовый хроматограф осуществляют с помощью разъемного устройства, состоящего из 2 металлических трубок, одна из которых постоянно находится в испарителе хроматографа, а другая служит для ввода пробы.

Т а б л и ц а 1

Изобретение относится к медицине, а именно к способам количественного определения метакриловой кислоты в тканях животных при проведении токсикологических исследований. Целью изобретения являетсяповышение точности определения метакриловой кислоты в тканях животных и сокращение продолжительности анализа. Поставленная цель достигается тем, что ме- такриловую кислоту в тканях животных определяют путем газохроматографического анализа, причем предварительно навеску ткани гомогенизируют в присутствии 0.1 N~ раствора серной кислоты в соотношении 1:1, после чего осуществляют ввод пробы в газовый хроматограф посредством металлической трубки, состоящей из двух частей, одна из которых служит для ввода пробы, а другая постоянно находится в испарителе. Изобретение может быть использовано для количественного определения метакриловой кислоты в тканях животных при прове- де,нии токсикологического эксперимента. 2 ил.;2 табл.С

Таблица 2