Штамм CoxIeLLa вURNеттI, используемый для получения гипериммунных сывороток Советский патент 1992 года по МПК C12N1/00 A61K39/40 

сл С

Использование: медицина, диагностика, микробиология - получение гипериммунных сывороток с целью идентификации коксиелл Бернета в первой фазе. Очищенную дифференциальным центрифугированием яичную культуру коксиелл в разведении с: интервалом в 3 дня вводят внутрибрюшинно кроликам. Первую инъекцию в объеме 0,5 мл, вторую 1 мл, третью 2 мл. Через 10 дней после последней иммунизации получают гипериммунную сыворотку. Сыворотка не реагирует с антигенами риккетсиальной природы (риккетсии Провачека, риккетсии Сибирина), не теряет своей чувствительности в течение 2-х лет.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в вакцинно-сывороточном производстве для приготовления диагностических препаратов.

Известны зарубежные штаммы коксиелл Бернета Наин Майл, Хензерлинг и др., однако они выделены более 30 лет назад, многократно пассировались на развивающихся куриных эмбрионах, что приводило к снижению их антигенной активности и возможному переходу фазового состояния.

Известен штамм М-44. используемый для производства живой вакцины и сухого корпускулярного антигена для реакции связывания комплемента, однако в результате длительного пассирования на куриных эмбрионах перешел во второе фазовое состояние, т.е. утратил некоторые антигенные

субстанции и не может вызывать образование антител к антигенам первой фазы коксиелл,

Цель изобретения - получение штамма, обладающего выраженными антигенными свойствами и обусловливающего получение сыворотки с высоким содержанием антител к антигенам коксиелл первой фазы,

Предлагаемый штамм коксиелл Бернета, названный Вологда, выделен от овец в Вологодской области. Депонирован во Всесоюзном музее риккетсиальных культур научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии им, Н.Ф.Гамалеи АМН СССР под № 105 от 25 мая 1989 г.

Морфология и культуральные свойства. Коксиеллы находятся в первом фазовом состоянии, при окраске по Романовскому- Гимзе и Гименец - морфология типичная.

ч

hO N О 00

со

Культивируются в развивающихся куриных эмбрионах или в селезенках белых мышей. Наибольшее накопление возбудителя в оболочке желточного мешка при заражении 5-дневного куриного эмбриона получают при инфицировании их материалом, содержащим риккетсии в больших концентрациях (+++), в разведении 10 -10 в объеме 0,4 мл.

Патогенные свойства. При подкожном заражении морских свинок массой 300350 г 1,0 мл яичной культуры в разведении вызывает развитие лихорадочной реакции продолжительностью не менее 3 сут.

Антигенность. Антигенная активность штамма выражена: в ответ на однократное внутрибрюшинное введение кроликам массой 3-3,5 кг 1,0 мл яичной культуры (+++) в разведении , уже на седьмой день после иммунизации выявлялись с помощью реакции связывания комплемента (РСК) антите- ла к антигену первой фазы в титрах 1:20-1:40. Максимальная концентрация антител наблюдается на 21-23 дни после однократной иммунизации, в этот период титр антител составляет к антигену первой фазы 1:163-1:320. В дальнейшем концентрация антител постепенно снижается, однако и через 1 год после заражения (срок наблюдения) у большинства животных определяются антитела к первой фазе кок- сиелл (в титре 1:10-1:20).

Пример. Для получения гипериммунных сывороток частично очищенную от тканевых примесей дифференциальным центрифугированием яичную культуру (+++) коксиелл штамма Вологда в разведении 10 последовательно с интервалом 3 дня внутрибрюшинно вводили кроликам массой 3-3,5 кг в обьеме 0,5; 1 и 2 мл. Через 10 дн после последней иммунизации получали гипериммунную сыворотку. Титры антител у животных, зараженных коксиеллами штамма Вологда, к антигену первой фазы коксиелл составили 1:640-1:1280. Сыворотка не реагировала с другими антигенами рик- кетсиальной природы (риккетсии Проваче- ка, риккетсии Сибирика). Сыворотка, хранившаяся в замороженном состоянии при -20°С не теряла своей активности на протяжении двух лет (срок наблюдения). Для сравнения антигенных свойств предлагаемого штамма с международным штаммом, аналогичным образом получали сыворотку от кроликов, заражённых штаммом Хензерлинг. Титр антител у этих животных к антигену первой фазы коксиелл составил 1:80-1:320, т.е. был значительно ниже, чем у животных, иммунизированных коксиеллами штамма Вологда. Формула-изобретения Штамм Coxlella burnetti Вологда НИ- ИЭМ № 105, используемый для получения гипериммунных сывороток.