СПОСОБ КОНСЕРВАЦИИ КЛЕЩЕЙ-ПЕРЕНОСЧИКОВ АБРОВИРУСОВ Российский патент 1994 года по МПК A01K67/33 

Изобретение относится к паразитологии и вирусологии, способам индикации возбудителей инфекционных болезней в клещах-переносчиках. Предлагаемый способ консервации эктопаразитов предназначен для проведения полевых сборов эктопаразитов и последующей индикации возбудителя в лабораторных условиях для оценки степени эпидемической опасности изучаемой территории по клещевому энцефалиту (КЭ). Проведение индикации вируса КЭ с помощью метода молекулярной гибридизации нуклеиновых кислот (МГНК) [1] требует максимальной сохранности вирусной РНК в клещах-переносчиках. Собранных клещей доставляют в лабораторию живыми в специальных влажных камерах [2]. При этом в случае переувлажнения имеет место бактериальный или грибковый пророст (результатом которого может быть разрушение вирусной РНК или неспецифическое связывание диагностических рекомбинантных плазмид), а в случае недостатка влаги - высыхание эктопаразитов.

Цель изобретения - обеспечение максимальной сохранности вирусной РНК при транспортировке клещей-переносчиков вируса КЭ, повышение безопасности транспортировки зараженных эктопаразитов.

Это достигается тем, что для транспортировки эктопаразитов их помещают в количестве 30-50 экз. в полипропиленовые или полиэтиленовые пробирки на 0,5 или 1,5 мл, заполненные 96^о этанолом или 1%-ным раствором соляной кислоты. Растворы обеспечивают сохранность вирусной РНК в течение 7 сут. при комнатной температуре.

П р и м е р 1. 80 имаго Ixodes persulcatus, собранных в природном очаге клещевого энцефалита, поместили в 2 полиэтиленовые пробирки на 0,5 мл, заполненные 96^о этанолом. 7 сут. спустя клещей разбирали в лаборатории, подсушивали на фильтровальной бумаге и помещали для последующего хранения при -70^оС в 96-луночные полистироловые планшеты, фиксируя клещей в лунках ватными тампонами. При детекции РНК вируса КЭ методом МГНК у 14 клещей выявлена вирусная РНК в количестве 10 пг и у 3 клещей - 100 пг, значения вирусофорности составили 21,3±4,6%.

В контрольной группе клещей (157 экз.), доставленных в лабораторию живыми и хранившихся при тех же условиях (-70^оС), тот же срок, у 21 клеща детектирована РНК вируса КЭ в количестве 10 пг, у 8 клещей - 100 пг, процент зараженности клещей составил 18,5±3,1.

П р и м е р 2. 80 имаго I.persulcatus, собранных в природном очаге КЭ, поместили в 2 полиэтиленовые пробирки на 0,5 мл, заполненные 1%-ным раствором соляной кислоты. 7 сут. спустя клещей разбирали в лаборатории, подсушивали на фильтровальной бумаге и раскладывали для хранения при -70^оС в 96-луночные полистироловые планшеты, фиксируя клещей в лунках ватным тампоном. При последующей детекции вируса КЭ методом МГНК вирусная РНК выявлена в количестве 10 пг у 13 клещей, 100 пг - у 4 имаго, т.е. РНК вируса КЭ определена у 21,3±4,6% исследованных клещей.

Контрольная группа та же, что и в примере 1.

При сравнении (таблица) известного способа хранения и транспортировки клещей-переносчиков вируса КЭ предлагаемым способом можно отметить, что предложенный способ устраняет недостатки известного и при максимальной сохранности РНК вируса КЭ повышает безопасность транспортировки и работы с зараженными эктопаразитами.

Использование: вирусология и паразитология, в частности способы индикации возбудителей инфекционных болезней в клещах-переносчиках. Сущность изобретения: способ включает сбор клещей в полевых условиях, помещение их в полипропиленовые или полиэтиленовые пробирки объемом 0,5 или 1,5 мл, заполненные 96° этанолом или 1%-ным раствором соляной кислоты, в количестве 30-50 экземпляров и транспортирование к месту исследования. 1 з.п.ф-лы, 1 табл.

1. СПОСОБ КОНСЕРВАЦИИ КЛЕЩЕЙ-ПЕРЕНОСЧИКОВ АБРОВИРУСОВ, включающий их сбор в полевых условиях, отличающийся тем, что, с целью обеспечения максимальной сохранности вирусной РНК в клещах, после сбора их помещают в емкости, заполненные 96^o-ным этанолом или 1%-ным раствором соляной кислоты в количестве 30 - 50 экземпляров. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве емкостей используют пробирки из пропилена или полиэтилена объемом 0,5 или 1,5 мл.