Штамм гриба RнIZорUS сонNII BeRL eF De ToNI - продуцент липазы с каталазной активностью Советский патент 1992 года по МПК C12N9/20 C12N1/14 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения нового штамма гриба для использования в бытовой химии при производстве синтетических моюцих средств.

Целью изобретения является получение нового штамма гриба Rhizopus cohnii Berl et de Toni - продуцента липазы с каталазной активностью.

Штамм депонирован во Всесоюзный коллекции промышленных микроорганизмов Института ВНИИгенетика под номером ВКПМ Г-408.

Штамм Rhizopus cohnii выделен из образцов темно-каштановой почвы.

Культурально-морфологические свойства штамма. Штамм Rhizopus cohnii Berl et de Toni быстрорастущий, образует хорошее спороношение при выращивании на агари- зованных средах, например на сусловом агаре (фиг.1). На картофельно-дрожжевом агаре при 37°С образует колонии рыхловойсо

лочные до 1 см высотой, вначале светлосерые, затем пепельно-серые. Ризоиды простые или слабо разветвленные, светло-коричневатые. Спорангиеносцы простые, прямые или слабо изогнутые, отходят по 1-3 от шейки ризоида или столо- новидных гиф, 82-520 х 5-13 мкм. Спорангии45-90 мкм в диаметре, Спорангиоспоры неправильно шаровидные, шаровидные, 4-6 (7) мкм в диаметре, гладкие, в массе бледно-голубоватые. Хла- мидоспоры многочисленные, цилиндрические, шаровидные, 15,6-21,3 х 10,1-15,4 мкм.

Физиолого-биохимические свойства. Аэроб, гетеротроф, растет в широких пределах рН 2-9. Гриб термотолерантный, температурные границы его роста: от 17-19 до 51-52°С, оптимальная температура роста 42-45°, спороношения 37-40°С.

В качестве источников углерода усваивает сахарозу, глюкозу, галактозу, мальтозу, лактозу, фруктозу, декстрозу, крахмал, инулин, сорбит, маннит и др., этанол и метанол слабо. Усваивает нитратный, нитритный, аммонийный азот; из органических источников азота ассимилирует аминокислоты, мочевину, пептон, кукурузный экстракт.

Признаки штамма устойчивы. Штамм атоксичный, не подвержен лизису, устойчив к антибактериальным веществам; не продуцирует протеазу. Штамм является продуцентом липазы, обладает каталазной активностью.

Липазу получают глубинным культивированием продуцента на среде описанного ниже состава.

П р и м е р 1. Культивирование продуцента Rhizopus cohnii проводят на качалках с 220 об./мин при 40° на среде состава, %: соевая мука 1,5; КаНРСМ 0,2; KCI 0,05; СаСОз 0,05; MgS04 0,05; ЫЩМОз 0,3; масло подсолнечное 1,0 (величина рН до стерилизации 7,0+0,1; после стерилизации 6,5-0,1) по 150 мл в колбах емкостью 750 мл. Посев 5% односуточного инокулюма, полученного на среде состава, %: вытяжка из пшеничных отрубей 10,0; сахароза 1,0; К2НР04 0,2; KCI 0,05; СаСОз 0,05; MgSCM - 0,05; - 0,3. Длительность ферментации 72 ч. Активность липазы 600-700 ед/мл, каталазы 10- 12 ед/мл.

П р и м е р 2. Культивирование осуществляется в ферментере при 40°, аэрации питательной среды 1 м3/м /мин при работе мешалки 280 об./мин, величина рН в пределах значений 5,8-6,2. Пёнообразование

снижают уменьшением степени аэрирования до 0,8м /м /мин длительность процесса биосинтеза липазы 60-62 ч. Липолитическая активностью 1000-1100

ед./мл, каталазы 12-15 ед/мл.

Препарат внеклеточной липазы выделяют из культуральной жидкости /к.ж./ Rhizopus cohnii осаждением тремя объемами ацетона к одному объему к.ж. с последующим высушиванием. Активность образцов препарата липазы из Rhizopus cohnii составляет 50000-100000 ед/г, каталазы - 200000-250000 ед/г. Температурный оптимум действия препарата внеклеточной

липазы из Rhizopus cohnii 45°, рН-оптимум действия - в пределах рН 6-7.

В то время как липаза из Rhizopus microspurus УзЛТ-1 (прототип) при 50°С утрачивает активность на 50% з 120 мин,

при 60° на 50% за 40 мин, а при 70° фермент инактивируется полностью за 20 мин, липаза из Rhizopus cohnii стабильна при 30, 40, 50, 60 и 65° (100% относительной активности) в течение 60 мин, а при 80° активность

достигает нулевого значения в течение 30 мин (фиг.2).

Липаза из Rhizopus cohnii проявляет стабильность (100% относительной активности) при значениях рН 7,8,9 в течение 60

мин; при рН 10 теряется 60% активности за 60 мин; при рН 11 теряется до 80% активности за 30 мин (фиг.З).

Rhizopus cohnii не продуцирует протеазу, что отличается от значительного числа

микроорганизмов, в том числе микромице- тов - продуцентов липаз, накапливающих в к.ж. наряду с липазой протеазу, которая снижает со временем липолитическую активность.

Полученный из штамма гриба Rhizopus cohnii липолитический ферментный препарат, содержащий каталазу, участвующую в расщеплении перекиси водорода и удалении ее остатков, перспективен для применения в составе отбеливающих моющих средств, содержащих неорганические перекиси.

Использование культуры Rhizopus cohnii Berl et de Toni - продуцента липазы с

каталазной активностью - обеспечивает получение ферментного препарата для применения в качестве биодобавки в составе синтетических моющих средств. Форму л а изобретен и я

Штамм Rhizopus cohnii Berl et de Toni ВКПМ F-408 - продуцент липазы с каталазной активностью,

Изобретение представляет собой новый штамм (Ш) микроскопического гриба Rhizopus cohnii Berl et de Toni ВКПМ F-408 - продуцент термостабильной липазы с ка- талазной активностью - и позволяет расширить ассортимент продуцентов липазы. Выделен Ш из образцов темно-каштановой почвы целинной типчаково-полынной степи (Аскания Нова) на глубине 3-5 см. Гриб атоксичен, мало спороносит, не пылит, не подвержен лизису, устойчив к антибактериальным веществам. Ш не продуцирует про- теазу, чем выгодно отличается от микромицетов - продуцентов липаз, образующих наряду с липазой протеазу, что снижает со временем липолитическую активность. Как термофиллон характеризуется повышенной биохимической активностью, высокой скоростью роста по сравнению с мезофилами, обусловливая интенсификацию получения конечного продукта. Препарат внеклеточной липазы из Rhizopus cohnii, полученный осаждением ацетоном, характеризуется термостабильностью. Липаза из штамма Rhizopus cohnii стабильна при 30, 40, 50, 60 и 65°С(ЮО% относительной активностиJB течение 60 мин, а при 80°С активность достигает нулевого значения в течение 30 мин. Липолити- ческая активность образцов препарата из Rhizopus cohnii составляет 50000-100000 ед/г. Препарат обладает каталазной активностью, которая составляет 200000-250000 ед/г, что обеспечивает применение его в бытовой химии в качестве биодобавки в составе синтетических моющих средств. 3 ил. Ьс сл с и b S3 с сл