Питательная среда для культивирования хлортетрациклина Советский патент 1993 года по МПК C12P29/00 

5 С/)

d

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к производству антибиотйка-хлортетрациклина (ХТЦ), который широко используется в животноводстве в качестве кормового вита- минсодержащего и лечебного препарата.

Известны питательные среды для штаммов Streptomyces aurofaclens - продуцента хлортетрациклина, содержащие кукурузную муку, кукурузный крахмал, сахарозу, куку- рузный экстракт, минеральные соли (аммонийные иитратные, фосфатные) и микроэлементы.

Известна также среда следующего состава, мас.%: Кукурузная мука 8,0-9,0 Кукурузный экстракт (с.в) 0.25-0,60 Источники хлора 0,2-0,8 Источники неоргани- ческого азота 0,5-1.3 (МНз)2НР04 0,010-0,5 Мел 0,75-1,0 Жир 1,0-5,0 Роданистый бензил 0.0003-0,0005 Водопроводная вода Остальное Недостатком прототипа является невысокий уровень накопления антибиотика (12000 мкг/мл) и большая длительность процессаI ферментации (168 ч).

Целью изобретения является повышение уровня накопления ХТЦ при одновременномсокращении времени ферментации. .

Для этого питательная среда для пол- учения хлортетрациклина продуцентом Streptomeces aureofaciens, содержащая кукурузную муку, кукурузный экстракт, источники азота и хлора, мел, жир, роданистый бензил, фосфорнокислый аммоний и воду, дополнительно содержит кормобактерин при следующих соотношениях компонентов, мас.%:

Кукурузная мука8,0-9,0

Кукурузный экстракт

(с.в.)0,3-0,8

Кормобактерин0,2-0,4

Источники азота

и хлора0,65-1,1

Фосфорнокислый

аммоний0,02-0,04

Мел0,75-1,0

Роданистый бензил 0/00025-0,0005 Жир1.0-4.0

Водопроводная водаОстальное

Предлагаемая питательная среда позволяет при выращивании производственного штамма Str.aureofaclens ТБ-633 ФУ в течение 74-96 ч накапливать 7000-10000 мкг/мл ХТЦ, штамма Str. aureofaciens

ВНИИгенетика-723 9000-13000 мкг/мл ХТЦ. За 120-144 ч культивирования штамм ТБ-633 ФУ синтезирует 10000-14600 мкг/мл, а штамм ВНИИгенетика-723 - 11800-16200 мкг/мл ХТЦ.

Эффективность предлагаемой ферментационной среды иллюстрируется следующими примерами.

П р и м е р 1. В качестве продуцента используют штамм Str. aureofaciens ТБ-633 ФУ (ВКПМ S-755). Споровым материалом, хранящимся на агаризованной среде засевают посевные колбы с 60 мл среды следующего состава мас.%: кукурузная мука 6,0, кукурузный экстракт (с.а.) 2,5, рН 6,75. Выращивают посевную культуру при 28°С на качалке (240 об/мин) в течение 24 ч. Выросший инокулят в количестве 5 об.% вносят в ферментационную среду следующего состава, мас.%:

Кукурузная мука8,0

Кукурузный экстракт (с.в.)0,3

Кормобактерин0,2

,4

NH4N030.25

(NH4)2HP040,02

Мел -0,75

Подсолнечное масло.1,0

Роданистый бензил0,00025

Вода,Остальное

Ферментацию ведут в колбах Эрлен- мейера вместимостью 750 мл на качалке (240 об/мин) при 28°С. Антибиотическую активность оценивают фотоколориметрическим методом через 144 ч культивирования. Через 144 ч культивирования в культурной жидкости штамм ТБ-633 ФУ накаливает 11800 мкг/мл ХТЦ.

П р и м е р 2. Выращивают посевной материал и ферментацию проводят как в примере 1 при использовании ферментационной среды следующего состава, мас.%: Кукурузная мука8,0

Кукурузный экстракт (с.в) -0,42

Кормобактерин0,25

NH4CI0,4

МН МОз0,6

(NH4)2HP040,035

Мел0,8

Подсолнечное масло3,0

Роданистый бензил0,0003

ВодаОстальное

В этом случае используют ферментационную среду с оптимальным соотношением компонентов.

Через 144 ч культивирования в культу- ральной жидкости штамм ТБ-633 ФУ накапливает 14600 мкг/мл ХТЦ.

П р и м е р 3. Выращивают посевной материал и ферментацию проводят как в примере 2 при использовании ферментационной среды следующего состава, мас.%: Кукурузная мука8,2

Кукурузный экстракт (с.в.)0,42

Кормобактерин0,25

NH4CI0,4

,6

(NH4)2HP040,035

Мел0,8

Подсолнечное масло3,0

Роданистый бензил0,0003

ВодаОстальное

Через 144 ч культивирования в культу- ральной жидкости штамм ТБ-633 ФУ накапливает 13800 мкг/мл ХТЦ.

Пример 4. Выращивают посевной материал и ведут ферментацию как в примере 1 при использовании ферментационной среды с максимальным содержанием компонентов, а именно, мас.%:

Кукурузная мука9,0

Кукурузный экстракт (с.в.)0,8

Кормобактерин. 0,4

NH4CI -0.45

МН/|МОз ,65

(NH4)aHP04 l0,04

Мел -.1,0

Подсолнечное масло4,0

Роданистый бензил0,0005

ВодаОстальное

Через 144 ч культивирования в культу- ральной жидкости штамм ТБ-633 ФУ накапливает 10200 мкг/мл ХТЦ.

П р и м е р 5. Выращивают посевной материал и ферментацию проводят как в примере 2. Ферментационная среда отлича - ется от среды, приведенной в примере 2, тем, что в качестве источника азота и хлора в ней используют NH-iCI в количестве 0,65 мас,%.

Через 144 ч культивирования в культу- ральной жидкости штамм ТБ-633 ФУ накапливают 12980 мкг/мл ХТЦ.

П р и м е р 6. Выращивают посевной материал и ферментацию проводят как в примере 5. Ферментационная среда отличается от среды, приведенной в примере 5, тем, что в ней используют NH4CI в количестве 0,75 мас.%.

Через 144 ч культивирования в культу- ральной жидкости штамм ТБ-633 ФУ накапливает 14620 мкг/мл ХТЦ..

Пример. Выращивают посевной материал и ферментацию проводят как в примере 5. Ферментационная среда отличается от среды, приведенной в примере 5,

тем, что в ней используют МНЬцС в количестве 1,1 мас.%.

Через 144 ч культивирования в культу- ральной жидкости штамм ТБ-633 ФУ накап- ливает 12800 мкг/мл ХТЦ.

ПримерЗ. В качестве Продуцента используют штамма Str. aureofaclens ВНИ- Игенетика-723 (ВКПМ-863). Споровым материалом, хранящимся на агаризованной среде, засевают посевные колбы с .60 мл среды, приведенной в примере 1. Выращивают посевную культуру при 32°С на качалке (240 об/мин) в течение 28 ч. Выросший инокулят в количестве 5 об.% вносят в фер- ментационную среду, приведенную в примере 1. Ферментацию проводят при 32°С.

Через 144 ч культивирования в культу- ральной жидкости штамм ВНИИгенетика- 723 накапливает 12300 мкг/мл ХТЦ. П р и м е р9. Используют штамм ВНИ- Игенетика-723. Выращивают инокулят и ферментацию проводят как в примере 8 на ферментационной среде, представленной в примере 2,..-..

Через 144 ч культивирования в культу- ральной жидкости штамм ВНИИгенётика- 723 накапливает 162000 мкг/мл ХТЦ.

П р и м е р 10. Используют штамм ВНИИгенетика-723. Выращивают йнокулянт и

ферментацию проводят как в примере 8 на

ферментационной среде, представленной в

примере 3....

Через 144 ч культивирования в культу- ральной жидкости штамм ВНИИгенетика- 723 накапливает 15100 мкг/мл ХТЦ.

П р и м е р 11. Используют штамм ВНИИгенетика-723. Выращивают инокулят и

ферментацию проводят как в примере 8 на

ферментационной среде, представленной в

примере 4. ..

Через 144 ч культивирования в культу- ральной жидкости штамм ВНИЙгенетика- 723 накапливает 11800 мкг/мл ХТЦ.

П ример 12. Используют штамм ВНИИгенетика-723. Выращивают инокулят и

ферментацию проводят как в примере 8 на

ферментационной среде, представленной в

примере 5.

Через 144 ч культивирования в культу- ральной жидкости штамм ВНИИгенетика- 723 накапливает 13200 мкг/мл ХТЦ.

П ример 13. Используют штамм ВНИИгенетика-723. Выращивают инокулят и

ферментацию проводят как в примере 8.на

ферментационной среде, представленной в

примере 6.

Через 144 ч культивирования в культу- ральной жидкости штамм ВНИИгенетика- 723 накапливает 16180 мкг/мл ХТЦ.

Пример 14. Используют штамм ВНИИгенетика-723. Выращивают иноку- лят и ферментацию проводят как в примере 8 на ферментационной среде, представленной в примере 7.

Через 144 ч культивирования в культу- ральной жидкости штамм ВНИИгенетика- 723 накапливают 13600 мкг/мл ХТЦ.

Таким образом, предлагаемая среда позволяет повысить выход хлортетрациклина

по сравнению с прототипом для штамма. Str.aureofaclens ТБ-633 ФУ через 72 ч культивирования на 39,7%, через 144 ч - на 29,0%, а для штамма ВНИИгенетика-723 через 72 ч культивирования на 29,0%, а через 144 ч-38,8%,

(56) Авторское свидетельство СССР N: 437343,кл. С 23 Р 29/00, 1975.

Использование: в микробиологической промышленности для производства антибиотика-хлор- тетрациклина. применяемого в животноводстве в качестве кормового витаминсодержащего и лечебного препарата. Сущность изобретения: споровым материалом штамма - продуцента Straureofaciens ТБ-633ФУ (ВКПМ S-755) засевают посевные колбы с 60 мл среды следующего состава, мас.%: кукурузная мука 6.0, кукурузный экстракт (са) 2,5, рН 6,75. Выращивают посевную культуру при 28° С на качалке (240 об/мин) в течение 24, ч. Выросший инокулят в количестве 5 об.% вносят в ферментационную среду следующего состава, мас.%: кукурузная мука 8.0. кукурузный экстракт (св.) 0.3. кор- мобактерин 0.2, NH CI 0.4. NH4N03 025. (INH ) НРО 0,02. мел 0.75. подсолнечное масло 1,0, роданистый бензил 0,00025. вода остальное. Ферментацию ведут в колбах Эрленмейера вместимостью 750 мл на качалке (24Х) об/мин) при 28° С. Через 144 ч культивирования штамм ТБ-633ФУ накапливает 11800 мкг/мл хлортетрацеклина. на 29.0% выше по сравнению с прототипом. 1 табл.

Сравнительное содержание ХТЦ в культуральной жидкости двух штаммов Sir. aureofaclens на среде-прототипе и предлагаемой

1 - концентрация хлортетрациклина в таблице указана в мкг/мл.

Формула изобретения

Кукурузный экстракт

Кормобактерин

Источники азота и хлора

Фосфорнокислый аммоний

Мёл

Роданистый бензил

Жир

Вода

0,3 - 0,8 0,2-0,4 0,65-1,1 0,02-0.04 0,75-1,0 0,00025 - 0,0005 1,0-4,0 Остальное

20 2. Питательная среда по п.1, отличающаяся тем, что в качестве источников азота и хлора используют смесь МЩС и МНзМОз при следующем соотношении компонентов в среде, мас.%:

25 NH4CI0,4 - 0,45

МНдМОз0,25-0,65

Или NH4CI в количестве 0,65 -1,1 мас.%.