Штамм бактерий SеRRатIа маRсеSсеNS - продуцент хитиназы Советский патент 1992 года по МПК C12N9/42 C12N1/20 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и представляет собой новый штамм бактерий Serratia marcescens ВКПМ В-4993 (41-10). продуцирующий высокоактивную внеклеточную хитиназу (хитодекстриназа, ,4- /3 (2-ацетамидо-2-дезокси-Д-глюкозид) гликаногидролаза, К.Ф.3.2.1.4.), которая может быть использована для биоконверсии хитинсодержащих отходов в белок одноклеточных дрожжей, борьбы с насекомыми и патогенными грибами, вредителями сельскохозяйственных растений, в лабораторной практике при количественном определении хитина с составе клеточной стенки грибов и других биологических обьектов. для разрушения клеточной стенки грибов.

Цель изобретения - получение штамма Serratia marcescens. проявляющего более высокий уровень хитиназной активности в культуральной жидкости.

Штамм получают методом рассева исходного музейного штамма Ser. marcescens 41 на агаризованную питатетельную среду, содержащую хитин, с последующим отбором колоний с наибольшей хитиназной активностью. Штамм депонирован в коллекции Центрального музея промышленных микроорганизмов института ВНИИгенети- ка. коллекционный номер ВКПМ В-4993.

о с

Ј с

Для получения хитиназы штамм Serratia marcescens ВКПМ В-4993 (41-10) выращивают на среде следующего состава, г/л:

Коллоидный хитин10.0

К2НР04 -ЗН204.0

MgSO-i ; 7H200.9

Дрожжевой экстракт0,5

рН среды8,5.

Штамм Ser. marcescens 41-10 имеет следующие характеристики.

Морфологические признаки. Клетки палочковидные размером 1,5-2.0 х 0,8- 1,0 мкм, одиночные подвижные, грамотри- цательные.

Культуральные признаки и физиологические свойства. На МПА через 24 ч роста колонии блестящие, гладкие, ярко-красные, выпуклые, с ровным краем, диаметром 1,5- 2,0 мм. На МПБ - равномерная муть, на картофеле- блестящий красный налет. Молоко свертывает, но не пептонизирует. Желатин разжижает медленно.

Ферментирует с образованием кислоты глюкозу, сахарозу, мальтозу, сорбит, понизит, маннит, салицилат. Не расщепляет мочевину. Сероводород, индол не образует. Реакция Фогес-Проскауэра положительная, реакция с метил-рот отрицательная.

Прототроф.

Оптимальная температура роста 28- 30°С, рН среды 7,4-7.6.

Пример. Получение штамма с повышенной хитиназной активностью.

Исходный музейный штамм №41 выращивают на мясопептонном агаре в течение 1 сут при температуре 30 ±0,1°С. Выросшие клетки смывают 0.5%-ным физиологическим раствором и рассеивают на чашки Петри с агазированной средой, содержащей хитин, из расчета 200-300.микробных клеток на чашку. Посевы выдерживают в термостате в течение 6 сут при температуре 30 ±0,1°С. Вокруг колоний, выделяющих хитиназу, образуется прозрачная зона в результате расщепления хитина в среде. Коло- нии с наибольшей зоной отсевают в пробирки с МПА и проводят сравнительное

изучение хитиназной активности отобранных штаммов.

Наибольшей хитиназной активностью обладает штамм 41-10.

В таблице показана хитиназная активность различных штаммов Serratia marcescens.

П р и м е р 2. Использование штамма в качестве продуцента хитиназы. Подготовка посевного материала.

Культуру Sec. marcescens 41-10 выпра- щивают в течение 1 сут в пробирках со скошенным мясопептонным агаром при 30°С. Выросшие клетки смывают 0,5%-ным физи- ологическим раствором. Полученный посевной матерая засевают в 1-литровые колбы с 200 мл питательной среды из расчета 0,05 оптических единиц (Дббо) на 1 мл среды и выращивают на качалке (200 об./мин-1) в оптимальных для образования хитиназы условиях:

Исходный рН среды8,5

Температура, °С30 ±0,1

Время выращивания, ч96-100

Затем бактериальные клетки отделяют

центрифугированием при 6000 g 20 мин. В надосадочной жидкости определяют хити- назную активность. Надосадочную жидкость используют в качестве источника хитиназы.

Через 96-100 ч культивирования на среде с хитином хитиназная активность в куль- туральной жидкости достигает 314-362 кд. на 1 мл. 604-692 ед. - на 1 мг белка, что соответствует 70-80 мг освобожденного за 1 ч инкубации N-ацетил-Д-глюкозамина в расчете на 1 мл культуральной жидкости.

Хитиназная активность штамма 41-10 превышает хитиназную активность извест- ных штаммов (таблица). Она в 16-18 раз выше таковой штамма ВКМВ-851, в 7-9 раз - штамма QMB 1466, широко используемого для получения хитиназы Serratia marcescens за рубежом. Формула изобретения

Штамм бактерии Serratia marcescens ВКПМ В-4993 - продуцент хитиназы.

Изобретение относится к микробиологической промышленности и представляет собой новый штамм бактерий Serratia marcescens. продуцирующий хитиназу хи- тодекстриназа, ,4-/3 (2-ацетамидо-2- дезокси-Д-глюкозид) гликаногидролаза (К.Ф.3.2.1.4.), которая может быть использована для биоконверсии хитинсодержащих отходов в белок одноклеточных, борьбы с насекомыми и патогенными грибами, вредителями сельскохозяйственных растений, в лабораторной практике при количественном определении хитина в составе клеточной стенки грибов. Цель изобретения - получение штамма Serratia marcenscens, проявляющего более высокий уровень хити- назной активности в культуральной жидкости. Полученный методом естественного рассева штамм Serratia marcescens ВКПМ- 4993 (41-10) обладает хмтиназной активностью 314-362 ед/ил, 604-695 мкмоль N-АГА мг белка ч . что в 7-9 раз превышает активность известного продуцента. 1 табл. и с