Штамм актиномицета SтRертомYсеS LaVeNDULae SUвSр.аRUртINI для получения аруптина Советский патент 1991 года по МПК C12P1/06 C12N1/14 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения высокоактивного штамма актиномицета - продуцента антибиотика аруптина, предназначенного для использования в сельском хозяйстве, а именно в овощеводстве для борьбы с бактериозами сельскохозяйственных растений и в птицеводстве для повышения эффективности использования кормов.

Цель изобретения - получение нового штамма, обладающего более высокой антибиотической активностью.

Штамм актичомицета Streptomyces lavendulae suhsp.aruptini, получен в. результате его отбора из гомологического ряда спонтанных вариантов.

Отселекциониррванному штамму актиномицета Streptomyces lavendilae subsp.aruptini присвоен № К-4111, штамм депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов под номером AC-1267D,

Культуральные признаки штамма представлены в таблице.

Морфологические свойства: споронос- цы - прямые и крючкообразные или в виде примитивных спиралей, споры - овальные, поверхность спор гладкая.

Физиолого-биохимические свойства: аэроб, оптимальная температура роста 26-28°С, крахмал гидролизует слабо, молоко коагулирует и разжижает желатину на 10-е сут роста.

В качестве единственных источников углерода потребляет глюкозу, ксилозу, арабинозу, инозит. Слабо использует фруктозу и сахарозу, не потребляет маннит, рамнозу, рафинозу.

Обладает широким антимикробным действием, подавляя рост грамположи- тельных (Staphiloccocus aureus, Bacillus mycoides. Bacillus subtilis

GO

00

bo

10

25

и др.) и грамотрицательных (Esch. coli и др.) бактерий, дрожжей (Candida albicang, Monilia sp. и др.), грибов (Fusariun и др.) и актономице- тов (Streptomyces allae, Streptoiny- 5 ces levorts и др.).

Штамм поддерживают на агаризован- ной картофельной среде. Для длительного хранения используют методы консервации культур актиномицетов под вазелиновым маслом в виде почвенных культур или в лиофилизированном состоянии.

Процесс биосинтеза антибиотика аруптина осуществляют путем выращивания актиномицета в течение 3-4 сут в колбах на круговых качалках или в ферментере на жидкой питательной среде следующего состава, %: кукурузная мука 1,5-3; крахмал 1,0-2,0:, аммоний 0 сернокислый 0,5-1; калий фосфорнокислый однозамещенный 0,02-0,05; хлористый натрий 0,2-0,5; мел технический 0,3-0,6; вода водопроводная, рН среды перед стерилизацией 6,5.

Препарат аруптин представляет собой прогретую при 70-75°С в течение 10 мин и лиофильно высушенную 3-4-суточную культуральную жидкость Str.lavendulac subsp. aruptini. 30 Для определения содержания биотика в препарате аруптина последний экстрагируют 0,01 н. НС1 в течение 2 ч. Антибиотическую активность экстракта определяют методом диффу- 35 зии в агар. Для разведения экстракта используют цитратный буфер, в качест- ве тест-культуры - споры Bacillus subtilis 6633. Для сопоставления в качестве стандарта применяют антибио- 40 тик гризин с активностью 1000 мкг/мг.

Пример 1. Streptomyces la- vendulae subsp. aruptini K-4111 выращивают в течение 14 дней при 28 С в пробирках на скошенйом картофель- 45 ном агаре, который готовят следующим образом: 200 г очищенного и мелко прорезанного картофеля отваривают в 1 л воды, отвар охлаждают, фильтруют, добавляют 2% агара и стерилизуют 50 при 1 атм 30 мин.

С целью получения вегетативного посевного материала агаровый блок 14-суточной культуры вносят в колбы емкостью 750 мл, содержащего 100 мл 55 жидкой питательной среды следующего состава, %: кукурузный экстракт 1,0;, мел технический 0,5; глюкоза 0,5; крахмал 1,5: аммоний сернокислый

10

5

5

0

0 35 40

45 50

55

0,35; натрий хлористый - 0,5. вода - водопроводная, р среды естественной. Стерилизация при 1 атм в течение 30 мин,

Инокулированные колбы помещают на качалку (200 об/мин). Культуру выращивают при 28°С 48 ч. Полученный таким образом вегетативный посевной материал используют для инокуляции ферментационной среды, которая имеет следующий состав, %: кукурузная мука 2; крахмал 1,5: аммоний сернокислый 0,7; калий фосфорнокислый однозамещенный 0,03; натрий хлорис- тый 0,2; мел технический 0,5; вода водопроводная, рН среды перед стерилизацией 6,8-7.0. Режим стерилизации 1 атм, 30 мин.

Посевной материал в количестве 5 мл вносят в колбы емкостью 750 мл, содержащие по 100 мл ферментационной среды. Колбы помещают на круговую качалку и инкубируют при 28°С в течение 3 сут. По истечении этого срока культуральную жидкость прогревают прр 70-75°С в течение 10 мин и лиофильно высушивают.

Антибиотическая активность куль- туральной жидкости штамма К-4111 Str.lavendulae subsp.aruptini 1120 мкг/мл. Антибиотическая активность культуральной жидкости в контроле (штамм 39 Str.lavendilae subsp. aruptim) 300 мкг/мл.

Пример 2. Streptomyces lavendulae subsp.aruptini, выращивают на скошенном картофельном агаре и в жидкой питательной среде для получения вегетативного посевного материала как указано в примере 1. По- севной материал в количестве 5 мл вносят в колбы емкостью 750 мл, содержащее 100 мл ферментационной среды (состав по примеру 1). Колбы помещают на круговую качалку и инкубируют при 28 С в течение 4 сут. Далее порученную культуральную жидкость про- гревают при 70-75°С в течение 10 мин и лиофильно высушивают.

Антибиотическая активность культуральной жидкости предлагаемого штамма К-4111 Str.lavendilae subsp.arup-- tini 1040 мкг/мл. Антибиотическая активность культуральной жидкости в контроле (штамм № 39 Str.lavendulae subsp.aruptini) - 348 мкг/мл. , Пример 3. Streptomyces lavendulae subsp.aruptini выращивают на скошенном картофельном агаре и в

5163

жидкой питательной среде для получения вегетативного посевного материала, как указано в примере 1„

Посевной материал в количестве :5 мл вносят в колбы емкостью 750 мл, содержащие 100 мл ферментационной ере ды (состав см. пример 1). Колбы помещают на круговую качалку и инкубируют при 28°С в течение 5 сут. По истечении этого срока культуральную жидкость прогревают при 70°С в течение 10 мин и лиофильно высушивают.

Антибиотическая активность культу- ральной жидкости предлагаемого штамма К-4111 Str.lavenhulae subsp. aruptini 990 мкг/мл.

5

Антибиотическая активность культу- ральной жидкости в контроле (штамм № 39 Str.lavendulae subsp.aruptini) 300 мкг/мл. ,

Таким образом, штамм актипомице- та Streptorayces lavendulae subsp. aruptini К-4111 позволяет интенсифицировать процесс биосинтеза антибиотика в 3-3,5 раза.,

Формула изобретения

Штамм актйномицета Streptomyces lavendulae subsp.aruptini BKM Ас-1267Д для получения аруптина.

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения высокоактивного штамма актиномицета - продуцента ару- птина, предназначенного для использования в сельском хозяйстве, а именно в овощеводстве для борьбы с. бактериозами сельскохозяйственных растений и птицеводстве для повышения эффективности использования кормов с Целью изобретения является получение нового штамма, обладающего более высокой антибиотической активностью. Штамм актиномицета Streptomyces lavendulae subsp.aruptini К-4111 депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов под номером Ас-1267Д, Данный штамм позволяет увеличить синтез аруптина с 300-348 мкг/мл (известный штамм под К° 39) до 990- 1120 мкг/мл. 1 табл.

Культуральные признаки штамма

Глюкозоминеральная (СР-0

Овсяная с дрожжевым экстрактом

Картофельная Кукурузная № 2 Гаузе № 1 Соевая

Мясопептонный агар Сусло-агар

обозначения окраски мицелия даны по шкале цветов Бондарцева.