Способ определения микобактерий М. воVIS, М. тUвеRсULаSIS Советский патент 1992 года по МПК G01N33/49 G01N30/02 

Изобретение относится к области ветеринарии и медицины, в частности к лабора- торным способам идентификации микроорганизмов, и может быть использовано для идентификации микобактёрий туберкулеза.

Цель изобретения - повышение специфичности и упрощение способа.

Способ осуществляется следующим образом.

Патологический материал засевают на селективную среду Левенштейна-Иенсена. Визуально проверяют чистоту культуры и делают мазок с окраской по Цилю-Нильсе- ну. У выросших в темноте при 37°С культур определяют характер пигментации.

Культуры со среды Левенштейна-Иенсена пересевают на картофельно-глицери- новую среду Павловского и инкубируют в течение 1-2 нед. при 37°С. Анализ бактериальной массы со среды Павловского позволяет получать стабильные жирнокислотные спектры различных видов микобактёрий,

5,0-10,0 мг микробной массы петлей переносят в стеклянную ампулу и добавляют несколько капель (0,1-0,2 мл) 7%-ного раствора гидроокиси тетраметиламмония в метиловом спирте. Ампулу запаивают и про- гравают при 110-120°С в течение 20-30 мин. Под действием гидроокиси тетраметиламмония происходит гидролиз липидов и метилирование жирных кислот.

Для хроматографического анализа используют две стальные колонки 2 м х 3 мм. Колонки заполняют целитом - 545 с нанесенной на него жидкой фазой -7% апиезона L, Приготовление сорбента и заполнение колонок проводят по общепринятым методам.

Хроматографический анализ проводят на газожидкостном хроматографе марки Цвет с пламенно-ионизационным детектором при следующих рабочих параметрах: температура термостата колонок в режиме программирования от 180 до280°С при скорости нагрева 8уС/мин; температура испарителя 370°С; расход газа-носителя и водорода 2,4 л/ч, воздуха 25 л/ч. Пробу в количестве 2,0-5,0 мкл анализируемого материала вводят в испаритель.

На хроматограммах микобактёрий выявляются жирные кислоты с алифатической цепью, содержащей от 12 до 26 атомов угле6

СО 01

VJ VI с

рода. Основным отличительным признаком для микобактерий является наличие жирных кислот с числом атомов углерода выше 20 - тетракозановая кистота ( С24.о), гексакоза- новая (С2б:о).

Предлагаемый способ в отличие от известного позволяет проводить определение в контаминированных другими микроорганизмами культуральных микобактерий.

Формула изобретения Способ определения микобактерий М. bovis и М. tuberculosis в биологической про0

бе путем посева биологической пробы на твердую яичную среду, инкубации с последующим проведением газохроматографиче- ского анализа препарата культуры клеток и регистрациией маркерного вещества, отличающийся тем, что, с целью повышения специфичности и упрощения способа, в качестве маркерного вещества используют гексакозановую и тетракозановую кислоты и при соотношении их содержания в препарате больше 1 определяют наличие микобактерий М. bovis или М. tuberculosis в биологической пробе.

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, в частности к лабораторным способам определения микроорганизмов, и может быть использовано для определения микробактерий туберкулеза. Цель изобретения - повышение специфичности и упрощение способа достигается за счет проведения газохроматографического анализа и определения содержания гексакозановой и тет- ракозановой кислот и при их соотношении больше единицы определяют наличие мико- бактерий в патологическом материале.