ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА Российский патент 2010 года по МПК C12N1/20 C12R1/32 

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и может быть использовано для лабораторной диагностики туберкулеза.

Известна плотная питательная среда Левенштейна-Йенсена, содержащая в своем составе яйца куриные, желтки яиц, картофельную муку, малахитовый зеленый, раствор минеральных солей, включающий глицерин двойной перегонки и аспарагин [1, 2].

Однако известная среда не позволяет выявить микобактерий с измененными морфологическими, культуральными свойствами и ослабленной жизнеспособностью.

Задача изобретения. - сокращение сроков роста и повышение выделяемости микобактерий туберкулеза из биоматериалов животных.

Это достигается путем добавления к среде Левенштейна-Йенсена в качестве стимулятора роста фитопрепарата 10% экстракта полыни в дозе 0,2-0,3 мл, при следующем соотношении компонентов.

яйца (16 целых и 6 желтков) 1000 мл 2% раствор малахитовой зелени 20 мл картофельная мука 30 г Солевая основа:   одноосновной фосфорнокислый калий 2,4 г сернокислая магнезия 0,34 г лимоннокислая магнезия 0,6 г аспарагин 3,6 г глицерин х.ч. 12 мл вода дистиллированная до 600 мл 10% раствор водного   экстракта полыни по 0,2-0,3 мл на пробирку

Фитопрепарат представляет собой 10% стерильный водный экстракт, приготовленный из сухих растений, собранных во время цветения, относящихся к роду полыней - Artemisia, семейству астровых Asteraceae Dumort.

Химический состав полыней изучен достаточно хорошо [3] и содержит широкий набор биологически активных соединений: каучук, фенолкарболовые кислоты и их производные, эфирное масло и др., которые в определенной дозе обладают стимулирующим действием на рост микроорганизмов.

Пример 1

Было испытано влияние различных доз водного экстракта полыни на скорость роста музейных культур М. bovis шт.8, М. bovis шт.14. Для этого были приготовлены питательные среды при следующем соотношении компонентов:

яйца (16 целых и 6 желтков) 1000 мл 2% раствор малахитовой зелени 20 мл картофельная мука 30 г Солевая основа:   одноосновной фосфорнокислый калий 2,4 г сернокислая магнезия 0,34 г лимоннокислая магнезия 0,6 г аспарагин 3,6 г глицерин х.ч. 3,6 г вода дистиллированная до 600 мл 10% раствор водного   экстракта полыни по 0,1; 0,2; 0,3 мл на пробирку

Суспензии, приготовленные из музейных культур, в разведении 10^-3 засевали по 0,2 мл на испытуемую питательную среду с фитопрепаратом (10% водный экстракт полыни) и контрольную (среда Левенштейна-Иенсена без фитопрепарата). Результаты исследований приведены в таблице 1, из которой следует, что добавление фитопрепарата в дозе 0,1 мл на пробирку не влияет на сроки роста культур М. bovis, в дозе 0,2-0,3 мл наблюдается рост единичных белых колоний на 4-5 дней раньше, чем на контрольной среде, в последующем на средах с фитопрепаратом отмечалось интенсивное накопление бакмассы.

Таблица 1. Влияние различных доз фитопрепарата 10% раствора водного экстракта полыни на скорость роста музейных культур микобактерий (сутки) Исследуемые культуры Рост на питательной среде Левенштейна-Иенсена (сутки) контроль с добавлением фитодобавки 0,1 мл 0,2 мл 0,3 мл 1. М. bovis шт.8 10-12 10-11 6-7 6-8 2. М. bovis шт.14 8-12 8-10 4-7 4-7

Таким образом, предлагаемый фитопрепарат в дозе 0,2-0,3 мл способствует ускорению и интенсивности роста микобактерий в 2 раза по сравнению с контролем.

Пример 2

Для изучения диагностических качеств испытуемой питательной среды исследовали 79 проб биоматериалов от крупного рогатого скота с туберкулезными поражениями и 25 проб без туберкулезных поражений из хозяйств неблагополучных по туберкулезу. После проведения предпосевной обработки биоматериала по методу Гона-Сумиоши суспензии высевали на среду Левенштейна-Йенсена в оригинальной прописи (контроль) и на испытуемые среды с фитопрепаратом по 0,2 мл и 0,3 мл на пробирку. Результаты исследований представлены в таблице 2.

Таблица 2. Влияние фитодобавки на выделяемость культур микобактерий из биоматериалов крупного рогатого скота Исследуемый биоматериал Количест-
во проб (шт) Левенштейна-Иенсена - контроль Левенштейна-Иенсена + 0,2 мл Левенштейна-Иенсена + 0,3 мл скорость роста (сутки) коли чест во куль тур (шт) % скорость роста
(сутки) Количество куль тур (шт) % скорость роста
(сутки) Количество культур (шт) % Лимфатические узлы от крупного рогатого скота с тубекулезными поражениями 79 25-28 51 64,5 18-19 57 72,1 19-21 58 73,4 Лимфатические узлы от крупного рогатого скота без тубекулезных поражений 25 28-30 12 48,0 25-27 14 56,0 23-25 14 56,0 ИТОГО 104 26,5-29,0 63 60,5 21,5-23,0 71 68,2 21,0-23,0 72 69,2

Из таблицы видно, что из 79 проб с туберкулезными поражениями на контрольной среде Левенштейна-Йенсена выделены 51 культура на 25-28 сутки, что составило 64,5% от исследованных проб. При внесении фитопрепарата (10% водного экстракта полыни) в дозе 0,2 мл рост культур отмечали в 57 случаях (72,1%) и в более ранние сроки - на 18-19 сутки. При добавлении 0,3 мл также увеличивалось число выделенных культур - 58 (73,4%), а рост отмечался на 19-21 сутки.

При посеве 25 проб биоматериалов без туберкулезных поражений на контрольных пробирках выделено 12 культур, что составило 48,0% от исследованных проб, а на средах с фитодобавкой в дозе 0,2 мл и 0,3 мл выделено по 14 культур (56%) на 25-27 сутки и 23-25 сутки соответственно.

Таким образом, предлагаемая питательная среда, которая дополнительно содержит фитопрепарат в дозе 0,2-0,3 мл на пробирку, способствует сокращению сроков роста в среднем на 3-4 дня и повышает выделяемость микобактерий из биоматериалов животных на 8-10%, что позволяет сделать вывод о соответствии заявленного решения критериям новизна, изобретательский уровень, промышленная применяемость.

Источники информации

1. Наставление по диагностики туберкулеза. Москва, 2002. С.44-47.

2. Василев В.Н. Микобактериозы и микозы легких // «Медицина и физкультура». София, 1971. С.146-147.

3. Лавренов В.К., Лавренова Г.В. Полная энциклопедия лекарственных растений. Т.II/СПб.: Издательский дом «Нева»; М.: «Олма-ПРЕСС», 1999. С.242-266.

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии. Сущность изобретения сводится к тому, что в состав среды Левенштейна-Йенсена дополнительно вводят в качестве стимулятора роста фитопрепарат - 10%-ный экстракт полыни в дозе 0,2-0,3 мл на объем среды следующего состава: 1000 мл яйца (16 целых и 6 желтков), 20 мл 2%-ного раствора малахитовой зелени, 30 г картофельной муки, 2,4 г одноосновного фосфорнокислого калия, 0,34 г сернокислой магнезии, 0,6 г лимоннокислой магнезии, 3,6 г аспарагина, 12 мл глицерина х.ч. и 600 мл воды дистиллированной. Экстракт полыни наслаивают на поверхность готовой среды. Использование изобретения позволит сократить сроки культивирования и повысить выделяемость культур микобактерий из биоматериалов на 8-10%. 2 табл.

Питательная среда для культивирования микобактерий туберкулеза, содержащая яйца куриные, желтки куриных яиц, картофельную муку, калий одноосновной фосфорно-кислый, магнезию серно-кислую, аспарагин, глицерин, воду дистиллированную, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит 10%-ный раствор водного экстракта полыни в дозе 0,2-0,3 мл на поверхности среды при следующем соотношении компонентов:
яйца (16 целых и 6 желтков) 1000 мл 2%-ный раствор малахитовой зелени 20 мл картофельная мука 30 г Солевая основа:   одноосновной фосфорно-кислый калий 2,4 г серно-кислая магнезия 0,34 г лимонно-кислая магнезия 0,6 г аспарагин 3,6 г глицерин х.ч. 12 мл вода дистиллированная до 600 мл 10%-ный раствор водного   экстракта полыни на пробирку 0,2-0,3 мл