Способ определения муравьиной кислоты в биологических жидкостях Советский патент 1992 года по МПК G01N33/52 

Изобретение относится к области медицины и биохимии и предназначено для определения муравьиной кислоты в биологических жидкостях - крови, моче.

Известен способ количественного определения муравьиной кислоты и ее производных, включающий обработку анализируемой пробы избытком уксусного ангидрида в присутствии кислого катализатора (серной или хлорной кислоты) с последующим волюмо- метрическим измерением выделившейся при этом окиси углерода. Недостатком способа является длительность процесса.

Наиболее близким к предлагаемому изобретению является способ фотометрического определения муравьиной кислоты, основанный на извлечении ее из анализируемой пробы, восстановлении до формальдегида и дальнейшем определении по реакции с хромотроповой кислотой. Извлечение муравьиной кислоты из анализируемой жидкости проводится путем вакуумной дистилляции при пониженной температуре в среде сухого льда. Стадия дистилляции протекает со скоростью 0,5-1 мл/ч Кроме того, если в пробе имеются растворенные

газы, которые мешают определению, то требуется повторное замораживание и отгонка пробы, что еще больше увеличивает время анализа.

Недостатком способа является его длительность.

Цель изобретения - ускорение способа определения муравьиной кислоты в биологических жидкостях.

Поставленная цель достигается тем, что определение муравьиной кислоты в анализируемой биологической жидкости проводят фотокалориметрически, пробу предварительно подкисляют 20%-ным раствором трихлоруксусной кислоты и центрифугируют, после чего отгоняют кислоту из безбелкового фильтрата с нагреванием при атмосферном давлении.

Способ осуществляется следующим образом, при анализе крови в центрифужную пробирку вносят 4 мл 20%-ной трихлоруксусной кислоты, затем 0,5-1 мл анализируемой крови в 2 мл дистиллированной воды, центрифугируют в течение 5 мин, центрифу- гат сливают в аппарат для перегонки, отгоняют около 5 мл жидкости, затем в куб

Ё

VJ

СО (Л

VI

00

добавляют 1 мл дистиллированной воды и еще отгоняют до 6 мл дистиллята. 3,5 мл дистиллята переносят в пробирку с 100 мг магниевой стружки, добавляют 0,5 мл соляной кислоты в 10 приемов порциями по 0,05 мл в течение 10 мин. Затем приливают 3,5 мл хромотропной кислоты, кипятят на водяной бане 30 мин; добавляют дистиллированную воду до 9 мл и фотоколориметрируют в кювете с толщиной слоя 20 мм при длине волны 570 мкм.

При анализе мочи 2 мл пробы вносят в перегонный аппарат, добавляют 2 мл 20%- ной трихлоруксусной кислоты и 3 мл дистил- лированной воды; дальнейший анализ аналогичен анализу крови.

Для построения градуировочного графика отовят серию стандартных растворов муравьиной кислоты в 0,01 н.соляной кислоте в интервале концентраций 1-10 мкг/мл. Каждый раствор подвергают анализу, включая две стадии обработки пробы.

Существенным отличием способа является отгонка кислоты из подкисленного безбелкового фильтрата с нагреванием при атмосферном давлении.

Приводятся данные, показывающие, что точность предлагаемого способа не уступает известному.

Сравнение предлагаемого способа с известным проводили в области нижней границы концентраций в градуировочном графике, а именно на растворе муравьиной кислоты с концентрацией 1 мкг/мл, приготовленном на моче контрольных крыс.

Раствор указанной концентрации анализировали обоими предлагаемым и известным способами.

В таблице приведены статически обработанные результаты.

Из сравнения обоих способов следует, что точность анализа растворов муравьиной кислоты с концентрацией, равной нижнему а пределу обнаружения ее в биологических жидкостях (1 мкг-/мл) практически одинакова в обоих случаях.

Предлагаемый способ был применен при токсикологических исследованиях по изучению ингаляционного воздействия ме- тилметакрилата на организм белых крыс. Известно, что метаболитами метилметакри- ловой кислоты в организме является метанол и метакриловая кислота. Метанол окисляется до муравьиной кислоты.

Пример1.6 белых крыс подвергали ингаляционному воздействию метилметакриалата (ММА) (концентрация ММА в затравочной камере 12400 мг/м3). Через 3 ч после начала затравки у всех крыс была отобрана и проанализирована кровь на содержание

муравьиной кислоты по предлагаемому способу. Одновременно была проанализирована кровь 6 контрольных крыс, не подвергавшихся воздействию ММА. Содержание муравьиной кислоты в крови затравленных крыс, мкг/мл: 19,0; 28,7; 18,6; 29,9; 22,5; 28,7. Содержание муравьиной кислоты в крови контрольных крыс, мкг/мл; 25,0; 30,0; 10,6; 31,6; 21,4; 12,7.

На выполнение анализа 12 проб крови

на содержание муравьиной кислоты было затрачено 6 ч, т.е. в среднем на один анализ по предлагаемому способу затрачивается 25-30 мин, в то время, как на один анализ муравьиной кислоты по известному способу

- не менее 4 ч.

Пример 2. У6 крыс, подвергшихся трехчасовому воздействию ММА в условиях, аналогичных примеру 1, была собрана суточная моча. Одновременно собиралась суточная моча контрольных крыс. Моча каждой крысы была проанализирована на содержание муравьиной кислоты по предлагаемому и известному способам. Содержание муравьиной кислоты в моче

затравленных крыс, мкг/мл: 7,3; 19,5; 43,6; 34,7; 25,8; 18,7. Содержание муравьиной кислоты в моче контрольных крыс, мкг/мл: отс., 0,91; отс., 4,7; 0,6; 2,35. Следует отметить, что 12 проб мочи были проанализированы в течение 6 ч (25-30 мин на один анализ) по предлагаемому способу. По известному способу на проведение 1 анализа было затрачено не менее 4 ч.

Таким образом, предлагаемый способ

извлечения муравьиной кислоты из биологических жидкостей значительно сокращает время анализа, не ухудшая его качества. Предлагаемый способ может быть применен при анализе биологических жидкостей

на содержание муравьиной кислоты.

Формула изобретения Способ определения муравьиной кислоты в биологических жидкостях путем взятия

пробы, осаждения белка, центрифугирования, удаления кислоты из безбелкового субстрата с последующей фотометрией, отличающийся тем, что, с целью ускорения способа, удаление кислоты проводят путем

дистилляции с нагреванием при атмосферном давлении.

Использование: медицина, лабораторный анализ, аналитическая химия. Сущность изобретения: муравьиную кислоту из безбелкового субстрата удаляют путем дистилляции с нагреванием при атмосферном давлении. 1 табл.