Способ определения аденозинтрифосфорной и 2,3-дифосфоглицериновой кислот в крови человека Советский патент 1992 года по МПК G01N33/50 

Изобретение относится к медицине и биологии, а именно к фотометрическим ла- бораторно-клиническим исследованиям крови человека, и может применяться для диагностики различных заболеваний, при которых изменяются концентрации АТФ и 2,3-дифосфоглицерата (2,3-ДФГ) в эритроцитах.

Целью изобретения является упрощение способа.

Способ осуществляется следующим образом

Из пальца обследуемого берут 0,1 мл крови в пробирку с 0,5 мл 0,9%-ного раствора хлорида натрия (пробирка № 1) и 0,1 мл крови в пробирку с 0,9 мл 5%-ной трихлорук- сусной кислоты (пробирка №2). Пробирку N° 1 ставят в термостат на 24 ч при 37°С. После инкубации добавляют в нее 0,4 мл 10%-ной трихлоруксусной кислоты, тщательно перемешивают и центрифугируют вместе с пробиркой № 2 15 мин при 3 тыс. оборотах в мин Отбирают 0,2 мл супернатанта из пробирки № 2 в пробирку с 0,2 мл 2 н HCI (пробирка № 3) и кипятят ее на водяной бане 7 мин с целью гидролиза АТФ до АМФ. Затем нейтрализуют содержимое пробирки Ms 3 добавлением в нее 0,2 мл 2 н раствора NAOH. Определяют неорганический фосфор в супернатанте из каждой пробирки. Для этого к 0,5 мл супернатанта из пробирок № 2 и № 3 (к 0,25 мл супернатанта из пробирки № 1) добавляют 1 мл 5%-ного раствора молибдата аммония на 5 н серной кислоте и 1 мл 1 %-ного раствора аскорбиновой кислоты на 0,1 н соляной кислоте. Через 15 мин измеряют оптические плотности всех проб на фотоэлектроколориметре при длине волны 670 нм против контроля на реактивы. Концентрации фосфора во всех пробах рассчитывают по калибровочной кривой и выражают в ммолях на литр.

Расчет концентраций АТФ и 2,3-ДФГ (ммоль/л крови):

АТФ (30 Рз - Ю Р2)/2;

2,3-ДФГ(20Р1-ЗОРз)/2,

сл

с

vi

СА) VI CJ СО VI

где Pi,P2, РЗ концентрации фосфора в су- пернатанте из пробирок №1, №2, №3, соответственно.

Определив гематокрит, можно рассчитать концентрацию АТФи2,3-ДФГв эритроцитах путем деления полученных значений их концентраций в крови на величину гематокрита в системе СИ.

П р и м е р. У практически здоровых людей (20 человек) определены концентрации АТФ и 2,3-ДФГ в эритроцитах по пред- ложенному способу и прототипу. Полученные данные представлены в таблице.

Как видно из полученных данных, различия между средними значениями показателей, определенных по предложенному способу и по прототипу, несущественны (р 0,1). Коэффициенты корреляции между значе- ниями показателей, определенными разными методами, составили для АТФ 0,87 (р 0,01) и для 2,3-ДФГ 0,81 (р 0,01), что свидетельствует о хорошем совпадении результатов, полученных по предложенному способу и прототипу.

0

5

0 5

Предложенный способ позволяет определять концентрации АТФ и 2,3-ДФГ в эритроцитах из небольшого объема крови, взятой из пальца. Способ отличается от аналогичных упрощением методики, снижением ее трудоемкости без потери точности и может быть реализован в любой клинической лаборатории для диагностики различных заболеваний.

Формула изобретения Способ определения аденозинтрифос- форной и 2,3-дифосфоглицериновой кислот в крови человека путем прибавления к пробе крови трихлоруксусной кислоты, перемешивания, добавления к надосадочной жидкости 2 N HCI, инкубации в течение 7 мин на кипящей водяной бане, нейтрализации с последующим определением неорганического фосфора для расчета концентраций аденозинтрифосфорной и 2,3-дифосфоглицериновой кислот, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, вторую пробу крови инкубируют в термостате в течение 24 ч при 37°С для дефосфорилирова- ния органических фосфатов под действием собственных ферментов эритроцитов.

Изобретение относится к области медицины и биологии, а именно к области фотометрических лабораторно-клинических исследований крови человека, и может применяться для диагностики различных заболеваний, при которых изменяются концентрации АТФ и 2,3-дифосфоглицерино- вой кислот в эритроцитах. Целью изобретения является упрощение способа определения. Для этого образцы крови обрабатывают при комнатной температуре, а пробу крови перед добавлением трихлорук- сусной кислоты инкубируют в физиологическом растворе в течение 24 ч при 37°С с последующим определением 2,3-дифосфог- лицериновой кислоты. 1 табл.