СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СТРЕПТОКОККОВОЙ ГИАЛУРОНИДАЗЫ Советский патент 1965 года по МПК A61K38/46 

Известны способы получения стрептококковой гиалуронидазы путем выраш,ивания штамма-продуцента с последующим фракционированием микробного фильтрата сернокислым аммонием и очисткой препарата. Однако они не позволяют получить п-репарат достаточной чистоты с высокой активностью.

По предлагаемому способу для улучшения качества и повышения активности препарата штамм «Китанин культивируют на среде А. П. Конликова, а очистку диализата ведуг холестерином; получают высокоактивную стрептококковую гиалуронидазу, практически свободную от примесей. Для этого штамм «Китапин гемолитического стрептококка группы А, серотипа Гриффите 4 выраш,ивают на .питательной среде А. П. Конникова, содерл ащей на 1 л пептона Хоттингера I л мясной воды, 3 л -водопроводпой воды, 30 мл насыщенного раствора поваренной соли, 15 г двузамешенного фосфата натрия и 10 г глюкозы (рН среды 7,4). Материалом для засева колб служит бульон шестичасового роста культуры на скошенном кровяном агаре, для получения которого цробирки со скошенным кровяным агаром заливают 5 мл бульона и ставят в термостат на 6 час. Колбы с 500 мл бульона засевают 10 мл шестичасового посевного материала и помещают в термостат на 18 час (температура 37°С).

Для выделения гиалуронидазы бульон микробной культуры освобождают от клеток центрифугированием или фильтрованием через слой асбеста и производят фракционирование сульфатом а-ммония. добавляемым в три стадии соответственно в количестве 35, 50 и 75з/о от насыщения. Соль добавляют медленно, ори энергичном перемешивании. Фильтраты с сернокислым аммонием оставляют на

ночь, после чего осадок отделяют центрифугированием и добавляют к надосадочной жидкости очередную порцию сульфата аммония. К полученным диализатам добавляют 2-3 г холестерина на каждые 100 мл раствора и в

течение 15-30 мин встряхивают на шуттельаппарате. Достигается полная инактивация стреитолизина-О и, кроме того, в растворе значительно уменьшается количество стрептокиназы. Диализаты, обработанные холестерином, фильтруют и высушивают (из замороженного состояния) в вакуумном аппарате. Сухой вес всех фракций, выделяемых из 1 л фильтрата, составляет от 335 до 422 мг.

25

Предмет изобретения 3 Микробного фильтрата сернокислым аммо,нием и очисткой препарата, отличающийся тем, что, с целью улучшения качества и поеы4 активности препарата, штамм «Китаннн культивируют на среде А. П. Конникова, а очистку диализата ведут холестери.ном.