Штамм стрептомицета SтRертомYсеS VIRIDoVULGaRIS - продуцент виридоцина Советский патент 1992 года по МПК C12N1/00 

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к получению штамма - продуцента антибиотического препарата, предназначенного для использования в сельском хозяйстве при лечении аскосфероза пчел.

Известен антибиотик - нистатин, получаемый в результате жизнедеятельности стрептомицета Streptomyces noursei, который находит применение для лечения пчел от аскосфероза 1 и 2.

Однако возможность его применения ограничена ввиду того, что он является антибиотиком медицинского назначения, ис- пользование которого в пчеловодстве крайне нежелательно. Кроме того, недостатком нистатина является его сравнительно низкая эффективность: применение нистатина для лечения аскосфероза обеспечивает

оздоровление только 60 - 70% пчелосемей из числа подвергнутых обработке.

Цель изобретения - получение нового штамма - продуцента антибиотического препарата виридоцина, обладающего высоким фунгицидным действием на Ascosphaera apis - возбудителя аскосфероза пчел, не токсичного по отношению к теплокровным животным, медоносным пчелам и экологически чистого.

Для достижения цели предложен штамм Streptomyces viridovulgaris № BKM Ас-1294Д, полученный путем селекции из популяции исходной культуры актиномице- та, выделенной из почвенного образца. Предлагаемый штамм образует вещество, обладающее фунгицидным действием в отношении Ascosphaera apis - возбудителя аскосфероза пчел. Виридоцином назван сухой остаток (после отгонки растворителя) хлороформенного экстракта лиофильно высушенной культуральной жидкости, полученной при выращивании S.vlrldovulgarls ВКМ АС-1294Д при 28°С в течение 5 сут на жидкой среде, содержащей, г/л: кукурузный экстракт 1,0, глюкозу 0,5, хлористый натрий 0,5, сернокислый аммоний 0,35, технический мел 0,5, крахмал 1,5. Виридоцин обеспечивает высокое фунгицидное действие в отношении Ascosphaera apis, превышающее аналогичное действие нистатина более чем в 2 раза.

Полученный штамм Streptomyces vlrldovulgaris ВКМ АС-1294Д имеет следующие культурально-морфологические и физи- олого-биохимические характеристики.

Морфологические признаки:

Спороносцы прямые, длинные, расположены моноподиально. Споры овальные с гладкой оболочкой,

Культуральные признаки.

Цвет воздушного мицелия на средах: СР1 с глюкозой, Гаузе 1 - беловатый, на средах кукурузной № 2, овсяной, картофельном агаре, сусло-агаре - желтовато-серый; цвет субстратного мицелия на СР1 с глюкозой, Гаузе 1 - бледно-песочный, на кукурузной № 2, овсяной от коричневого до темно- коричневого; на картофельном агаре - каштановый; на сусло-агаре - желтовато-буроватый до темно-коричневого, растворимый пигмент на СР1 с глюкозой и Гаузе 1 - бледно- песочный; кукурузной № 2 - коричневый, овсяной - желтовато-бурый, на картофельном агаре - бледно-малиновый, на сусло-агаре растворимый пигмент не образуется.

Физиолого-биохимические признаки:

Крахмал гидролизует, желатину разжижает, молоко пептонизирует. Потребляет, глюкозу, арабинозу, сахарозу, галактозу, маннит, рамнозу; не усваивает раффинозу, инозит. Меланоидного пигмента не образует. Обладает антагонистическими свойствами по отношению к дрожжам, грибам, в том числе и Ascosphaera apis.

Штамм получают следующим образом.

В конические колбы емкостью 250 мл вносят по 50 мл посевной среды следующего состава, г/л: кукурузный экстракт 1,0, глюкоза 0,05, хлористый натрий 0,5, сернокислый аммоний 0,35, технический мел 0,5, крахмал 1,5, вода водопроводная, рН 7,0 После стерилизации среды при 0,8 атм в течение 30 мин производят засев ее агаровым блоком двухнедельной культуры S.viridovulgaris. Колбы помещают на круговые качалки, скорость вращения которых 200 об/мин, и инкубируют 48 ч при 28 С. Затем 50 мл выращенного вегетативного мицелия используют для инокуляции 500 мл ферментационной среды аналогичного состава в 2-литровых колбах, которые помещают на круговые качалки (200 об/мин) и инкубируют в течение 5 сут при 28°G. Полученную культуральную жидкость высушивают в сублимационной камере, антибиотик экстрагируют хлороформом. После отгонки хлороформа антибиотическую активность препарата определяют методом диффузии в

агар. На поверхность питательного агара в чашках Петри, содержащего суспензию спор тест-культуры A.apis, расставляют металлические цилиндры (с внешним диаметром 8 мм, внутренним - 6 мм и высотой 10

мм), в которые вносят в объеме i 0,1 мл испытуемых растворов экстракта в концентрациях 1,0; 0,1 и 0,01%. Для сравнения в качестве положительного контроля используют нистатин (4000 ед/мг) в этих же концентрациях. После инкубации при 28 - 30°С через 72 - 96ч при наличии выраженного развития мицелия A,apis измеряют зоны задержки роста тест-культуры в опытных и контрольных чашках. Величина зон задержки роста представлена в таблице.

Предлагаемый штамм Streptomyces vlridovulgaris образует высокоэффективный антибиотический препарат Виридоцин, который обладает фунгицидным действием в

отношении Ascosphaera apis, превышающим действие нистатина более чем в 2 раза.

Отсутствие токсического и инфекционного действия по отношению к теплокровным животным и медоносным пчелам

позволит использовать виридоцин в условиях пчеловодческих хозяйств без специальных ограничений.

Формула изобретения Штамм стрептомицета Streptomyces

viridovulgaris ВКМ Ас-1294Д - продуцент виридоцина.

Использование: микробиологическая промышленность для получения штамма - продуцента антибиотического препарата, применяемого в сельском хозяйстве при лечении аскосфероза пчел. Культуру Strep.viridovulgaris BKM Ас-1294Д выращивают при 28°С в течение 5 сут на жидкой среде, содержащей, г/л: кукурузный экстракт 1,0, глюкозу 0,5, хлористый натрий 0,5, сернокислый аммоний 0,35, технический мел 0,5, крахмал 1,5. Виридоцин обеспечивает высокое фунгицидное действие в отношении Ascosphaera apis, превышающее аналогичное действие нистатина более чем в 2 раза. 1 табл.