Способ серологической диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота Советский патент 1992 года по МПК A61K39/10 

(Л

с

Использование: ветеринария, диагностические исследования сыворотки крови установление диагноза на бруцеллез. Сущность изобретения; для диагностики используют реакцию связывания комплемента. Однако в отличие от стандартной постановки к единому бруцеллезному антигену добавляют вытяжку из Mycobacterium bovls. При постановке реакции расчетное количество единого бруцеллезного антигена смешивают с вытяжкой из микобактерий в соотношении 1 0,5. После этого готовят рабочее разведение и добавляют полученную смесь антигенов в реакцию в объеме 0,2 мл. Способ позволяет повысить чувствительность реакции связывания комплемента. 2 табл.

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к диагностике инфекционных болезней животных.

Известно несколько способов серологической диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота. Это такие как реакция агглютинации (РА), реакция связывания комплемента (РСК), реакция длительного связывания комплемента (РДСК), реакция непрямой гемагглютинации (РИГА) и другие.

Наиболее близким техническим решением, выбранным в качестве прототипа, является РСК, при котором к инактиви- рованной испытуемой сыворотке добавляют антиген и комплемент, а после выдержки при температуре 37-38°С в течение 20 мин - взвесь сенсибилизированных гемолизином эритроцитов барана. О наличии антител против бруцелл в испытуемой сыворотке

крови судят по степени гемолиза эритроцитов. Так, реакцию считают положительной при задержке гемолиза на 2-4 креста в одном или 2-х разведениях (1:5, 1.10} и при полном гемолизе эритроцитов в контрольной пробирке (без антигена)

Недостатком этого способа является низкая чувствительность, что обуславливает необходимость многократного и кбмплекс- ного исследования животных для полного выявления всех заболевших.

Целью изобретения является повышение чувствительности РСК при диагностике бруцеллеза крупного рогатого скота

Указанная цель достигается тем, что при осуществлении способа серологической диагностики бруцеллеза по РСК, пре- дуематривающий титрование комплемента и гемолизина, инактивацию испытуемой и контрольных (позитивной и негативной) сыVJ

сл о о

00 4

вороток путем прогревания при 60-61°С 30 мин, подготовку антигена (единый бруцеллезный антиген перед использованием смешивается с вытяжкой из микобактерий бовис в соотношении 1 ;0,5), после чего готовят рабочее разведение и добавляется в реакцию в количестве 0,2 мл. Затем добавляют комплемент (в установленном титре) в объеме 0,2 мл и смесь выдерживают в водяной бане при 37-38°С в течение 20 мин, После инкубации к смеси разведенной сыворотки и комплемента добавляют гемолитическую систему и повторно выдерживают в водяной бане при 37-38°С в течение 20 мин. После выдержки при комнатной температуре 16- 18 ч проводят учет и оценку реакции.

Опыты по отработке эффективного соотношения бруцеллезного антигена и вытяжки из микобактерий бовис пок азали, что чувствительность реакции была наиболее высокой при их соотношении 1:0,5 и введения в реакцию этой смеси (в титре единого бруцеллезного антигена - 1:75) в объеме 0,2 мл. Использование в предлагаемой смеси вытяжки из микобактерий бовис в иных соотношениях приводило к снижению чувствительности реакции или же к ее перерасходу.

Предлагаемый способ отличается от прототипа тем, что при постановке РСК используется смешанный с микобактериаль- ной вытяжкой антиген, который готовится путем добавления к единому бруцеллезному антигену в установленном титре половинного объема вытяжки из макобактерий бовис. Перед использованием расчетное количество единого бруцеллезного антигена смешивается с вытяжкой из микобактерий в соотношении 1:0,5. После этого готовят рабочее разведение и добавляют в реакцию в объеме 0,2 Мл.

Пример 1. Сыворотки крови крупного рогатого скота больного бруцеллезом в количестве 40 проб исследовали в РСК. Для этого титровали комплемент и гемолизин, инактивировали испытуемую сыворотку путем прогревания при 60-61°С 30 мин, расчетное количество единого бруцеллезного антигена перед использованием смешивали с вытяжкой из микобактерий бовис в соотношении 1:0,5, после чего готовили рабочее разведение и добавляли гемолитическую систему, повторно инкубировали в водяной бане при этих же режимах. Учет и оценку реакции проводили после 16-18-часовой выдержки при комнатной температуре. При этом из исследованных 40 проб в 38 выявлены комплементсвязывающие антитела в диагностическом титре. Причем, предельные титры со смешанным антигеном в

предлагаемом соотношении почти в 2 раза превышали аналогичные показатели с единым бруцеллезным антигеном.

Пример 2 Расчетное количество

единого бруцеллезного антигена перед использованием смешивали с вытяжкой из микобактерий туберкулеза в соотношении 1:0,25, после чего готовили рабочее разведение и добавили в реакцию в количестве 0,2

мл. Затем добавляли разведенный в установленном титре комплемент и выдерживали в водяной бане при 37-38°С в течение 20 мин После этого добавляли гемолитическую систему и повторно инкубировали в

водяной бане при тех же режимах. Учет и оценку реакции проводили после 16-18-часовой выдержки при комнатной температуре. При этом, из исследованных 40 проб сывороток крови крупного рогатого скота

больного бруцеллезом в 35 выявлены комплементсвязывающие антитела в диагностическом титре. В РСК с единым бруцеллезным антигеном были выявлены 32 пробы сывороток с диагностическим титром

антител (контроль).

Пример 3. Сыворотки крови крупного рогатого скота больного бруцеллезом в количестве 40 проб исследовали в РСК. Для этого титровали комплемент и гемолизин,

инактивиробали испытуемую сыворотку путам ее прогревания при 60-61 °С 30 мин, расчетное количество единого бруцеллезного антигена перед использованием смешивали с вытяжкой из микобактерий бовис в соотношении 1-0,75, после чего готовили рабочее разведение и добавляли в реакцию в количестве 0,2 мл. Затем добавляли разведенный комплемент в установленном титре в объеме 0,2 мл и инкубировали 20 мин при

37°С, после чего заливали гемолитическую систему и повторно инкубировали в водяной бане при тех же режимах. Учет и оценку реакции проводили после 16-18-часовой выдержки при комнатной температуре. При

этом, из исследованных 40 проб в 38 выявлены комплементсвязывающие антитела в диагностическом титре, тогда как с единым бруцеллезным антигеном - в 32 (контроль). Результаты опытов по отработке оптимачльного соотношения компонентов смешанного антигена, используемого в РСК по предлагаемому способу приводятся в таЬл. 1.

Диагностика бруцеллеза крупного рогатого скота по предлагаемому способу (использование в РСК бруцеллезного антигена в смеси из микобактерий бовис в соотношении 1:0,5) позволяет выявлять на 13,3% больше больных животных по сравнению с

прототипом (РСК в классическом варианте с

единым бруцеллезным антигеном) и на 16,6% больше обнаруживаются комплемен- тсвязывающие антитела у вакцинированных против бруцеллеза животных (см. табл. 2).

Формула изобретения Способ серологической диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота, предусматривающий разведение исследуемой

Результаты опытов по отработке оптимального соотношения компонентов смешанного антигена используемого в РСК по предлагаемому способу

Показатели эффективности предлагаемого способа в сравнении с прототипом

0

сыворотки, инактивацию, добавление к ней комплемента, единого бруцеллезного антигена в дозе 0,2 мл и гемолитической системы с последующими инкубацией и учетом результатов, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, единый бруцеллезный антиген перед добавлением к сыворотке смешивают с вытяжкой из Mycobaterlum bovls в соотно - шении 1:0,5 соответственно.

Таблица 1

Таблица 2