Способ оценки иммунного ответа животных Советский патент 1992 года по МПК A61B5/00 A61D7/00 

(Л

С

Использование: селекционно-ветеринарная генетика. Сущность изобретения: для проведения иммунизации готовят суспензию антигена Суспензия включает. мас.%: физиологический раствор 49,5; яичный альбумин 0,3; неполный адьювант Фрейнда50,2. Суспензию вводят внутримышечно. Иммунизацию проводят три раза. Ведут контроль наличия антител в сыворотке крови посредством иммуноферментного анализа, Через 14 дн. после проведения третьей иммунизации по оптической плотности сыворотки определяют силу иммунного ответа у животных и оставляют для дальнейшего разделения особе й с силой иммунного ответа не менее, чем X + 0,5 а, по сравнению со средним по группе. 1 табл

Изобретение относится к области биологии, в частности к селекционно-ветеринарной генетике, и может быть использовано при создании популяций животных с высоким иммунным ответом и следовательно, устойчивых к заболеваниям.

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому объекту является способ установления различной сочетаемости родительских пар по иммунному ответу, включающий 4-5- кратное введение антигена подкожно реципиенту другого вида и контроль наличия антигена подкожно реципиенту другого вида и контроль наличия антител в крови животных после каждой иммунизации через 5 дн. Однако известный способ имеет следующие недостатки. Во- первых, для получения иммунной сыворотки используется реципиент другого вида, что не позволяет получить моноспецифическую

сыворотку, обеспечивающую реальный контроль наличия антител, и, следовательно, не возможно установить пик иммунного ответа и класс иммуноглобулинов (антител), поэтому невозможно точно оценить генотип, являющийся лучшим продуцентом того или иного класса иммуноглобулинов. Кроме того, 4-5-кратная иммунизация является биологически неоправданной, так как многократное введение антигена (более 4 раз) вызывает гиперсенсибилизацию организма, а четвертная иммунизация не ведет к нарастанию антител. Использование в качестве антигена эритроцитов крови ведет к дополнительному стрессу у доноров и является трудоемким по технике выполнения.

Целью изобретения является повышение точности оценки.

Поставленная цель достигается тем, что в способе оценки иммунного ответа живо Ч

ел го GJ

4

тных, включающем введение антигена, антиген вводят внутримышечно трехкратно с интервалом нарастания иммунного ответа, причем в качестве антигена используют суспензию, содержащую физиологический рас- твор, неполный адьювант Фрейнда, яичный альбумин при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Физиологический

раствор49,5

Неполный адъювант

Фрейнда 50,2

Яичный альбумин0,3,

а оценку проводят по оптической плотности сыворотки крови, при этом к животным с высоким иммунным ответом относят особей с величиной оптической плотности сыворот- ки крови выше, чем X + 0,5 а.

Способ осуществляют следующим образом.

Общепринятым в разведении способом определяют генетическую принадлежность животных к линии, семейству, родственной группе и т.д. Затем формируют группы животных с заведомо известным происхожде- нием в количестве, обеспечивающем получение статическим достоверных результатов. Как известие, стаТнюб/ГеШе основных иммунных реакций организма жвачных животных происходит к 2-3-месяч- ному возрасту и поэтому необходимо формировать группы из молодняков указанного (возврата.

Для проведения иммунизаТДШ готовят суспензию антигена включающую следую- щие компоненты1 физиологический раствор 1 мл (49,5%); яичный альбумин фирма Sigma (США) с концентрацией белка 99% б мг (0,3%); неполный адъювант Фрейнда 1 мл().

6 мг яичного альбумина растворяют в 1 мл физиологического раствора, а затем полученную суспензию смешивают с 1 мл адь- юванта Фрейнда и смесь гомогенизируют гомогенизатором в течение 2-3 мин. Затем, перед началом иммунизации у животных берут кровь для контроля на наличие антител. После этого каждому животному вводят внутримышечно 2 мл приготовленной суспензии антигена. Через 14 дн. (цикл нара- стания иммунного ответа) у животных разного происхождения берут кровь для контроля уровня антител и повторяют цикл иммунизации. Иммунизацию проводят три раза и проводят оценку по оптической плот- ности сыворотки крови. Через 14 дн. после проведения третьей иммунизации по значениям, полученным в результате иммунофер- ментного анализа (оптическая плотность сыворотки), определяют силу иммунного ответа у животных разного происхождения и оставляют для дальнейшего разведения особей с силой иммунного ответа выше, чем X + 0,5 сг, по сравнению со средним по группе. Одновременно осуществляется оценка генотипа быков-прой зводителей по генетической детерминации иммунологической реактивности потомства.

Установлено на опытной группе животных (40 голов), что нарастание иммунного ответа идет интенсивно до третьей иммунизации и его сила не изменяется после четвертой и пятой иммунизации, что подтверждается следующими показателями

Иммунизация Концентрация антилел/ оптическая плотность

До иммунизации0,033

1иммунизация0,485

2иммунизация1,031

3иммунизация1,467

4иммунизация1,475

5иммунизация1,452

В качестве средства для проведения иммунизации предлагается суспензия антигена в строго определенных соотношениях компонентов. Это обусловлено тем, что было проведено несколько экспериментов с различным соотношением компонентов указанной суспензии.

Пример 1. Берут рекомендуемое соотношение компонентов, представленных втаблице. Суспензию вводят внутримышечно трем животным различного генотипа. Результаты таблицы свидетельствуют о том, что нарастание иммунного ответа шло интенсивно до третьей иммунизации и одновременно выявлена существенная индивидуальная гетерогенность у животных различного происхождения в уровне иммунного ответа. Так, животное № 4882 превосходило после третьей иммунизации животных №Ns 4884 и 4885 на 181,5 и 120И % соответственно. Животное N° 4885 превосходило животное №4884 на 156,2%. Четвертая иммунизация не повлияла на дальнейшее нарастание антител в крови.

П р и м е р 2. Берут минимальную дозу яичного альбумина - 0,05% (1 мг), при этом соотношение других компонентов также изменяют (см. таблицу). Результаты показали, что тенденция нарастания иммунного ответа сохранялась, но в то же время его сила была очень низкой, что не позволило выявить каких-либо значительных различий между животными разного генотипа. Такие результаты мало эффективны для использования в селекционном процессе.

П р и м е р 3. Берут максимальную дозу антигена 0,5% (10 мг), при этом соотношение других компонентов изменяют (табл. 2). Сила нарастания иммунного ответа была даже несколько выше, чем с рекомендуемой дозой антигена. Но высокое нарастание уровня антигена в крови также не позволило выявить различий между животными различного происхождения, так как высокая доза антигена вызывает гиперсенсибилизацию организма, что не позволяет реально оценить его защитные способности и может привести к анафилаксическому шоку.

Во всех приведенных примерах нарастание антител в крови животных наблюдалось до третьей иммунизации, но с большей или меньшей силой.

Использование предлагаемого способа в результате трехкратной внутримышечной иммунизации животных различного происхождения предлагаемой суспензии антигена и контроля на наличие антител посредством иммуноферментного анализа позволяет точно оценить генотип животного по иммунологической реактивности с учетом, как общего количества специфических антител, так и отдельных их классов IgGi, lgG2, IgA, IgM, что позволяет судить о генетической детерминированности данного феномена.

Предложенный способ отвечает требованиям, предъявляемым к методам диагностики иммунного ответа и принципам селекции животных. Способ обладает дифВлияние различного соотношения компонентов е сусулензии

для иммунизации на силу иммунного ответа у животных

различного происхождения (оптическая плотность)

ференцирующей способностью, присутствие в способе количественного критерия учета позволяет определить достоверность оценки Это придает способу точность, объ- ективность, комплексность, так как объединяет ветеринарный и селекционный подходы, Способ технически может быть осуществлен в любом научно-исследовательском учреждении. Формула изобретения

Способ оценки иммунного ответа животных, включающий введение антигена, о т- личающийся тем, что, с целью повышения точности, антиген вводят внутримышечно трехкратно с интервалом нарастания иммунного ответа, причем в качестве антигена используют суспензию, содержащую физиологический раствор, неполный адъювант Фрейнда, яичный аль- бумин при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Физиологический

раствор49,5

Неполный адъювант Фрейнда50,2

Яичный альбумин0,3

а оценку проводят по оптической плотности сыворотки крови при этом к животным с высоким иммунным ответом относят особей с величиной оптической плотности сбйзорот- ки крови выше, чем X + 0,5 о

Продолжение таблицы