Способ определения количества ионов аммония в растворе Советский патент 1992 года по МПК C12N9/02 

Изобретение относится к способам определения количества аммиака и солей аммония в растворе и может быть применено в сельском хозяйстве, аналитической химии, биохимии и медицине.

Известен способ определения количества аммиака и солей аммония в растворе посредством смешения их с фенолгипохло- ритным реагентом и колориметрического определения продукта реакции.

Способ имеет следующие недостатки: невысокая чувствительность, длительность и неспецифичность.

Известен способ определения аммиака и количества ионов аммония в растворе посредством их смешения с ферментом глута- матдегидрогеназой, ее субстратами - а-кетоглуторатом и НАДН, и последующего спектрофотометрического измерения уменьшения концентрации НАДН.

Способ характеризуется недостаточной чувствительностью, длительностью и узким диапазоном измерений.

Известен способ определения аммиака и количества ионов аммония в растворе посредством смешения их с растворами высо- коочищенной люциферазы из Photobacterium flscherl, глутаматдегидроге- назы, ее субстратов - НАДН и а -кетоглу- тората и субстратов люциферазы - ФМН и тетрадеканаля в калий-фосфатном буфере со стабилизатором ферментов - ft -мер- каптоэтанолом и последующего измерения на жидкостном сцинтилляционном спектрофотометре интегрального свечения смеси, который целесообразно взять за прототип.

Недостатками известного способа являются длительность, недостаточная чувствительность, узкий диапазон измерений и неэкономичность.

Целью изобретения является ускорение, повышение чувствительности, расширение границ измерений и достижение экономичности способа.

Способ заключается в том, что готовят смесь следующего состава (мас.%): ФМН

Ё

VJ

СЛ Ю VI О О

(4,1 -5,1) тетрадеканаль (1,15-1,25) о-кетоглуторат 0,11-0.50: активатор ГЛУГ таматдегидрогеназы АДФ (2,91-3,91) И глутаматдегидрогеназа (1,5-4.0) 10 ; источник бактериальной люциферазы - белковый экстракт из клеток люминесцентных бактерий Photobacterlum flscherl(4-8) стаб- дилизатор ферментов - ft -меркаптоэтанол (5,36-6,36). исследуемый образец, содержащий ионы аммония 1-10 об.%: до конечного объема (1-1,1 мл) доводят калий-фосфатным буфером 0,9-2,0 мас.%, рН 7,55-7,65. Затем впрыскивают в смесь раствор НАДН с одновременным перемешиванием до содержания (1,96-2,00) 10 мас.%, причем объем добавки составляет 4-5% от объема реакционной смеси. Концентрации подобраны путем постановки серийного эксперимента, исходя из максимально достигаемого положительного эффекта. Затем измеряют на люминомет- ре скорость спада биолюминесценции смеси, по которой судят о количестве ионов аммония в растворе.

В таблице показано, что способ ускорен по сравнению с известным в 10 раз и чувст

5

0

5

0

вительнее его в 25 раз, причем диапазон измерений шире на А порядка, т.е. границы измерений расширены в Ю4 раз.

Экономичность способа достигается применением белкового экстракта Photobacterlum ftscherl вместо высокоочищенной люциферазы.

Формула изобретения Способ определения количества ионов аммония в растворе, предусматривающий смешение анализируемой пробы с растворами, содержащими глутаматдегидрогеназу и люциферазу, а также субстраты этих ферментов, с последующей регистрацией биолюминесценции реакционной смеси, отличающийся тем, что, с целью ускорения и повышения чувствительности способа, в качестве раствора, содержащего люциферазу, используют белковый экстракт клеток Photobacterlum fished, при этом в реакционную смесь вводят аденозиндифосфат в кон- центрае.ии (2,9-3,9) - мас.%, биолюминесценцию смеси регистрируют на люминометре, а о количестве ионов аммония судят по скорости падения уровня биолюминесценции смеси.

Использование: сельское хозяйство, физиология растений, медицина. Сущность изобретения: определение количества ионов аммония в растворе проводят путем смешения анализируемой пробы с растворами, содержащими глутаматдегидрогеназу и люциферазу, а также субстраты этих ферментов, с последующей регистрацией биолюминесценции реакционной смеси, причем в качестве раствора, содержащего люциферазу, используют белковый экстракт клеток Photobacterium flsherl, в реакционную смесь вводят аденозиндифосфат в концентрации (2,,.%, регистрируют на люминометре биолюминесценцию смеси, а о количестве ионов аммония судят по серости падения уровня биолюминесценции смеси, 1 табл.