Способ определения концентрации белка в молоке Советский патент 1992 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, в частности : акушерству и медицинской биохимии, и может быть использовано для определения концентрации белка в женском и коровьем молоке.

Известен способ определения концентрации белка в молоке путем изучения флуоресценции при 540 нм пробы молока, разбавленной дистиллированной водой в соотношении 1:20.

Однако данный способ недостаточно точен.

Наиболее близок к предлагаемому способ определения белка, жира и углеводов, заключающийся в том, что пробу молока обрабатывают смесью хлороформа и метанола (реактив Фолча), подвергают центрифугированию и к полученному осадку добавляют биуретовый реактив. После перемешивания смесь оставляют на 30 мин при комнатной температуре для образования комплекса сине-фиолетового цвета, после чего проводят фотометрию против биуретового реактива на фотоэлектроколориметре (ФЭК) при зеленом светофильтре.

Недостатками известного способа являются сложность и продолжительность вы- полнения.

Цель изобретения - упрощение и сокращение времени исследования.

Способ осуществляют следующим образом.

Для проведения исследования молока (женского или от сельскохозяйственных животных) пробу молока в количестве 0,1 мл помещают в кварцевую ккТвету и разбавляют 2 мл водного раствора бромфенолового синего (БФС) в концентрации 0,001%. Затем кювету с полученным раствЪром устанавливают в держатель флуоресцентной установки, состоящей из источника лазерного излучения (ЛГИ-21) и детектора флуоресценции. Возбуждение флуоресценции осуществляют лазерным светом с длиной волны 337,1 нм, мощностью 3 мВт в течение 60 с. Одновременно с помощью автоматического электронного самописца типа КПС-4 или стрелочного индикатора регистрируют интенсивность флуоресценции в области длины волны 540 нм. Пик интенсивности на

Xi

сл ся

J

о

длине волны 540 нм указывает на относительное содержание белка в пробе молока.

Для выражения количественного содержания белка в молоке в весовых единицах или процентном отношении строят стан- дартную (калибровочную) кривую, показывающую зависимость интенсивности флуоресценции, например, альбумина от его концентрации в водном растворе в пределах 1-10 г%. .

Пример1.В кварцевую кювету помещают каплю женского молока объемом 0,1 мл и добавляют 2 мл 0,001 %-ного водного раствора БФС. Далее проводят облучение полученной смеси лгзерным излучением (длина волны 337, 1 нм, мощность 3 мВт) в течение 60 с и одновременно регистрируют интенсивность флуоресценции при длине волны 540 нм. Полученные значения интенсивности флуоресценции переносят на ка- либровочную кривую, построенную для альбумина (см. чертеже). По калибровочной кривой установлено содержание белка в исследуемой пробе молока 3,1 %.

Пример 2. В кварцевую кювету поме- щают каплю коровьего молока, поставляемого на молочную кухню, и добавляют к ней 2 мл 0,001 %-ного водного раствора БФС, проводят облучение полученной смеси лазерным излучением (длина волны 337,1 нм, мощность 3 мВт) в течение 60 с и одновременно регистрируют интенсивность флуоресценции при длине волны 540 нм. По калибровочной кривой определяют концентрацию белка в коровьем молоке, она равна 2,2 г%.

Данные, полученные предлагаемым способом, совпадают с результатами биохимического анализа исследуемых проб на белок и с данными по известному способу. Они представлены в таблице.

Однако время, затрачиваемое на определение концентрации белка в молоке известными методами,составляет около 60 мин, тогда как при использовании предлагаемого способа подобное исследование занимает до 2 мин.

Всего проведено 150 исследований проб женского и коровьего молока, показавших высокую достоверность полученных результатов при минимальных затратах времени на, исследование. Это позволяет с высокой производительностью проводить определение концентрации белка в молоке при массовом обследовании рожениц или в условиях домашней кухни для оценки рациона питания новорожденных, а также в молочной промышленности на поточной системе.

Формула изобретения

Способ определения концентрации белка в молоке путем исследования пробы молока с последующим расчетом содержания белка по калибровочной кривой, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и сокращения времени исследования, пробу молока разбавляют 0,01%-ным водным раствором бромфенолового синего, воздействуют на пробу лазерным лучом с длиной волны 337- 1 нм и мощностью 2-3 мВт, регистрируют интенсивность флуоресценции при длине волны 540 нм и проводят расчет концентрации белка по калибровочной кривой.

(am eЈ) 100

Ю(г%)

Использование: в медицине, в частности в акушерстве и медицинской биохимии для определения концентрации белка в молоке. Сущность изобретения: молоко разбавляют раствором бромфенолоього синего, затем измеряют интенсивность флуоресценции в области 540 нм, индуцированной лазерным излучением длиной волны 337,1 нм, мощностью 2-3 мВт, строят калибровочную кривую, по кбторой определяют концентрацию белка в молоке. Способ позволяет проводить исследование в течение 2 мин. 1 табл., 1 ил.