Способ криоконсервирования эритроцитов Советский патент 1992 года по МПК A01N1/02 

Изобретение относится к области криобиологии.

Наиболее близким к заявляемому является способ криоконсервпрсвания эритроцитов, согласно которому к эритроцитам добавляют 30%-ный криопротектср ПЭО- 1500 до конечной концентрации 15%, а затем замораживают путем погружения в жидкий азот. Отогревают на водяной бане (Бродихина Л.П. - Функциональная сохранность эритроцитов при низкотемпературном консервировании в растворах полиэтиленоксида. Авт.дисс. 1983),

Этот способ не обеспечивает достаточно высокой сохранности эритроцитов, что обусловлено перепадом осмотических давлений между внутри - и внеклеточной средой при добавлении довольно высокой концентрации криопротектора.

Целью изобретения является повышение сохранности функциональной полноценности эритроцитов.

Пример.К 90 мл эритромассы, полученной путем спонтанного осаждения из крови донора, сначала добавляли тонкой

струей 30 мл 10%-ного, а затем 60 мл 40%- ного раствора ПЭО-1500, растворы ПЭО- 1500 готовили на основе 2%-ного раствора среднего цитрата натрия. Полученную эрит- ровзвесь переливали в гофрированный контейнер и замораживали путем погружения в жидкий азот. Отогрев осуществляли ча водяной бане при температуре 42 - 45°С. Сохранность эритроцитов определяли по гемолизу и осмотической хрупкости. Результаты представлены в таблице.

П р и м е р 2. К 90 мл эритромассы добавляли тонкой струей сначала 22 мл 1 %-ного, а затем 68 мл 35%-ного раствора ПЭО-1500 Полученную эритровзвесь переливали в гофрированный контейнер и замораживали путем погружения в жидкий азот. Отогрев осуществляли на водяной бане (42 - 45°С). Результаты представлены в таблице.

П р и м е р 3. К 90 мл эритромассы добавляли тонкой струей сначала 15 мл 5%- ного, а затем 75 мл 35%-ного раствора ПЭО- 1500. Полученную зритровзвесь переливали в гофрированный контейнер и замораживаfc/

1C

VI

2s Ј

;сл

ли путем погружения в жидкий азот. Отогрев осуществляли на водяной бане при 42 -45°С. Результаты представлены в таблице.

П р и м е р 4. К 90 мл эритромассы добавляли сначала 45 мл 20%-ного, а затем 45 мл 40%-ного раствора ПЭО-1500. Полученную эритровзвесь переливали в гофрированный контейнер и Замораживали путем погружения в жидТсий азот. Отогрев осуще- стЪляли на водяной бане при 42 - 45°С. PestyTiftaS-bi представлены в таблице.

П р и м е р 5 К 90 мл эритромассы добавляли по каплям 90 мл 30%-ного раствора ПЭО-1500. Полученную эритровзвесь переливали в гофрированный контейнер и замораживали путем погружения в жидкий азот. Отогревали на водяной бане при 42 - 45°С. Результаты представлены в таблице.

1/1з таблицы следует, что высокая сохранность эритроцитов отмечается при добавлении криопротектора ПЭО-1500 на первом этапе в концентрации 10 - 15%, на втором-35-40%.

При добавлении ПЭО в концентрациях выше или ниже заявляемых наблюдается снижение сохранности эритроцитов. При введении на II этапе ПЭО в концентрации выше 40% происходит эгрегация эритроцитов, в связи с чем эту концентрацию не исследовали

По сравнению с прототипом сохранность увеличивается на 25 - 30%.

Для подтверждения функциональной полноценности эритроцитов после крио- консервирования приводится расчет процента гемолиза по формуле

100 - Н ) . свободный Н ( мг % )

общий Н (мг % )

Процент гемолиза криоконсервирован- ных эритроцитов в зависимости от способа добавления криопротектора

п 5 представлен в таблице Гематокритная величина эритромассы до смешивания с криопротектором составляла от 0,7 до 0,8, т.к. получалась путем спонтанного осаждения, РН эритромассы был в пределах 7,05 - 7,2.

Изменение криоскопическим методом осмолярности надстоя после смешивания с криопротектором не дает достоверных ре- зультатов. Это связано с высокой концентрацией полимера, при которой раствор не кристаллизуется, а переходит в аморфное состояние. Определить осмотичность удается лишь в разбавленных растворах полиме- ров.

Осмотичность 5%-ного раствора ПЭО- 1500, приготовленного на основе 2%-ного раствора среднего цитрата натрия, составляет 100 мосм/л при определении криоско- пическим методом на осмометре ОМКА 1Ц-01.

Формула изобретения Способ криоконсервирования эритроцитов, включающий добавление к эритро- массе криопротектора полиэтиленоксида мол. м, 1500 до конечной концентрации 15% с последующим замораживанием, отличающийся тем, что, с целью повышения сохранности функциональной полноценно- сти эритроцитов, добавление криопротектора осуществляют в два этапа - сначала в концентрации 10 - 15%, затем 35 - 40%.

Таблица1

Таблица2

Изобретение относится к криобилогии. Цель изобретения - повышение функциональной полноценности сохранности крио- консервированных эритроцитов. К эритромассе добавляют криопротектор по- лиэтиленоксид молекулярной массы 1500 в два этапа: сначала в концентрации 10-15%, затем 35 - 40%. Конечная концентрация 15%. После этого клетки замораживают до -196°С л/тем погружения в жидкий азот. Отогрев осуществляют на водяной бане при 42 - 45°С.

Способ добавления ПЭО-1500

I этап 10%

II этап 40%

I этап 15%

II этап 35%

I этап5%

II этап 35%

I этап 20%

II этап 40%

Одноэтапное добавление (прототип)

Гемолиз, %

1,16+0,07 1,13 ±0,09 1,92+0,16

1,65+0,11 1,58+0,13