Штамм вируса иммунодефицита человека 1-типа для приготовления диагностических препаратов Советский патент 1992 года по МПК C12N7/00 

Изобретение относится к области вирусологии и биотехнологии.

Известны штаммы ВИЧ-I/IIIB (США), BH4-1/CBL-4/85 (Великобритания), депонированные в Государственную коллекцию вирусов СССР. В связи с их коммерческим использованием в странах выделения вируса они недоступны для применения. Подобные отечественные штаммы вирусов в литературе не описаны (1, 2).

Проблема диагностики СПИД чрезвычайно актуальна для советского здравоохранения. Для проведения массового обследования населения требуется значительное количество диагностических тест- систем различных типов. Главным компонентом большинства используемых тест-систем является вирусный антиген. Именно поэтому от свойств штамма вируса во многом зависит чувствительность и специфичность выпускаемых диагностикумов. В связи с этим особую важность приобретает применение в отечественных тест-системах штаммов вирусов, эндемичных для территории СССР.

Предлагается новый оригинальный штамм вируса иммунодефицита человека ВИЧ-1/СССР. ИВ/ИВ-17/89, изолированный на территории СССР и предназначенный для приготовления диагностических препаратов для выявления ВИЧ-инфекции среди населения.

Штамм вируса хранится в Государственной коллекции вирусов Института вирусологии им. Д. И. Ивановского АМН СССР.

Целью настоящего изобретения является оригинальный штамм вируса иммунодефицита человека, обладающий высокой инфекционной и антигенной активностью, позволяющей использовать его для приготовления диагностических препаратов с целью выявления ВИЧ-инфицированных лиц среди населения.

Идентификация штамма ВИЧ-1/СССР, ИВ/ИВ-17/89 осуществлена рядом независимых методов.

(Л

с

4 О 00 О СА 4

Штамм вируса выделен из лимфоцитов периферической крови бйльной СПИД. При получении штамма использованы методы со- культивации лимфоцитов больной с лимфоцитами крови здорового донора, стимулированных митогеном, а также счелове- ческими перевиваемыми клеточными линиями.

Репродукция, Штамм, вируса реплицируется в лимфоцитах периферической крови, лимфобластоидных клеточных культурах МТ-4, СЕМ, Jurksttat3, V-937. Репродукция вируса сопровождалась характерным: цито- патичесхим действием и синцитиеобразо- ванием. Инфекционный титр вируса определяли по 50% тканевой цитопатиче- ской дозе вируса на модели вышеуказанных клеточных культур (табл. 1).

Морфология. Методом электронной микроскопии выявлены вирионы размером 100-120 нм с типичной для вирусов иммунодефицита человека 1 типа морфологией.

Анализ антигенов.

Иммунофлюоресценция. Исследование методом непрямой иммунофлюоресценции с использованием сыворотки больного СПИД, содержащей антитела к ВИЧ-1, показало наличие антигенов ВИЧ-1 в 50-60% инфицированных клеток.

Электрофорез, иммуноблот, Электро- форетический профиль белков штамма соответствует белковому спектру ВИЧ-1.

Исследование в иммуноблоте позволило заключить, что вирус обладает антигенными детерминантами, характерными для ВИЧ-1: 120-160, 53/55, 41, 31, 24, 17 кД.

Идентификация штамма осуществлена также методами точечной гибридизации и определения обратнотранскриптазной активности.

П р и м е р 1. Диагностика антител в ВИЧ-1 методом иммуноферментного анализа

Материал для исследования: Сыворотки ВИЧ-1-инфицироаанмых лиц, больных СПИД и фракции иммуноглобулинов из сывороток ВИЧ-инфицированных лиц. В качестве антигена использовали три штамма.

ВИЧ-1 эталонные штаммы 1MB, штамм ВИЧ-1/ИВ/17. Реакцию иммуноферментного анализа проводили по стандартной методике (1). .

Результаты иммуноферментного анализа представлены в табл. 2.

Полученные результаты показывают,

что препарат антигена, приготовленный из предлагаемого штамма ВИЧ-1/СССР, ИВ/ИВ-17, обладает необходимыми антигенными детерминантами для выявления,

вирусспецифических антител из сыворотки ВИЧ-1-инфицированных лиц.

Сравнительный анализ данного штамма с двумя эталонными в иммуноферментноМ анализе свидетельствует о его сходной активности.

Предлагаемый оригинальный штамм вируса ВИЧ-1/СССР, ИВ/ИВ-17 и приготовленные на его основе диагностические препараты должны найти применение в

вирусологической практике для детекции антител в сыворотках ВИЧ-инфицированных лиц.

П р и м е р 2. Диагностика антител к ВИЧ-1 методом иммуноблота,

Материал для исследования антител к ВИЧ-1 представлен 4 сыворотками, содержащими данные антитела и предварительно охарактеризованные в коммерческих тест- системах фирм Дюпон и Биорад. В качестве антигена использован штамм ВИЧ-1/ИВ-17 и эталонный штамм ВИЧ- 1/IIIB, очищенные по стандартной методике. Полосы иммуноблота готовили также по стандартной методике (2).

Результаты исследований представлен ны в таблицей.

В результате проведенных исследований установлено, что антиген штамма ВИЧ- 1/ИВ-17 позволяет выявлять антитела ко

всем полипептидам ВИЧ-1 и может быть, следовательно, использован для изучения серо- конверсии лиц,инфицированных ВИЧ-1, Формула изобретения Штамм вируса иммунодефицита человека I-типа ГКВ № 4022 для приготовления

диагностических препаратов.

Использование: биогехноложя, вирусология. Сущность изобретения: новый оригинальный штамм вируса иммунодефицита человека ВИЧ-1/СССР. ИВ/ИВ-17/89, предназначенный для приготовления диагностических препаратов при выявлении ВИ- Чинфекции среди населения. Штамм депонирован в ГКВ под номером 4022. Репликация штамма вируса сопровохдается образованием характерных синцитиев в чувствительных клеточных культурах. Инфекционный титр 5-6,0 Ig ТЦД 50. 3 табл.

Исследование инфекционной активности штаммов ВИЧ на модели клеток Jurkat tat 3

Т а б л и ц а 1

Анализ антигенов ВИЧ-t методом иммуноферментного анализа

- Обратная величина титра антител

Исследование антител к ВИЧ-1 методом иммуноблота

Та б л и ц а 2

Таблица 3