Способ электрофоретического разделения нуклеиновых кислот растений Советский патент 1992 года по МПК C12N15/01 

Изобретение относится к области биохимии и молекулярной биологии растений и может быть использовано в оценке исходного материала при селекции риса; в решении генно-инженерных задач: в лабораторной практике молекулярно-биологических исследований.

Известен способ электрофореза биологических макромолекул на бумаге, в крахмальных гелях (1), в полиакриламидных гелях (2).

Эти способы мало пригодны для электрофореза нуклеиновых кислот (НК), так как не позволяют эффективно разделять макромолекулы последних; в случае их использования затруднено выделение очищенных фрагментов нуклеиновых кислот из самого геля.

Известны также способы электрофоре- тического разделения нуклеиновых кислот с использованием полиакриламидно-агарозных, агаровых гелей (3), а также агарозных гелей (4).

Недостатками вышеуказанных способов являются:

-невозможность направленно регулировать скорость движения фрагментов нуклеиновых кислот в электрофоретической системе, которая вызвана низкой разрешающей способностью способа;

-дополнительные затраты времени и средств, связанные с повторными и последующими операциями по разделению близких по молекулярным характеристикам фрагментов нуклеиновых кислот.

Наиболее близким к предлагаемому является способ электрофоретического разде- ления нуклеиновых кислот (5). заключающийся в том, что исследуемый препарат НК вносят в лунку горизонтального подводного (затопленного трис-борат- ным буфером рН 8,0) агаризованного геля (концентрация агарозы 0.9%, толщина геля 2 мм, длина 20 см), после чего на электрофо- ретическую систему при помощи источника питания воздействуют в течение 5 часов

Ё

VI

М

Ю

;w

сл

iOO

электромагнитными полем с параметрами: сила тока - 194 мА, напряжение - 82 мВ. Затем процесс прекращают и изучают результаты на трансиллюминаторе.

Недостатками способа являются:

-низкая разрешающая способность относительно фрагментов, близких по молекулярной массе;

-невозможность направленного регулирования фрагментов НК в электромагнит- ном поле;

-дополнительные затраты времени и средств, связанных с повторными и последующими операциями по разделению близких по молекулярным характеристикам фрагментов НК.

Целью изобретения является увеличение разрешающей способности способа за счетснижения скорости движения фрагментов нуклеиновых кислот в электромагнит- ном поле.

Поставленная цель достигается тем, что в известном способе электрофоретического разделения нуклеиновых кислот, заключающемся в помещении препарата НК в затоп- ляемый буфером агарозный гель и воздействии на указанный преперат электромагнитным полем, перед внесением в гель препарат обрабатывают метасиликатом натрия в концентрации 10 - 10

М.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.

Исследуемый препарат дезоксирибо- нуклеиновой кислоты (ДНК) из 12-дневных проростков риса сорта Краснодарский 424 выдерживали врастворе , 10 М, М, М, 10 М метасиликата натрия, в зависимости от варианта опыта, в течение 24 часов, затем растворяли в 8% растворе сахарозы, содержащей 0,1% бромфеноло- гового синего, вносили в лунку горизонтального подводного агарозного геля. Гель

затоплен слоем трис-боратного буфера, рН 8,0. Концентрация агарозы в геле 0,9%, толщина геля 2 мм, длина 20 см. Затем в элек- трофоретическую систему при помощи источника питания воздействовали в течение 5 часов электромагнитным полем с параметрами: сила тока 194 мА, напряжение 82 мВ. За ходом электрофореза следили по движению бромфенолового синего. По окончании процесса гель прокрашивали в растворе этидиум бромида и просматривали на трансиллюминаторе. Результаты электролиза представлены в таблице. Как следует из приведенных данных, обработка НК ,10, 10 М раствором метасиликата натрия приводит к изменению электро- форетических показателей: уменьшению пройденного пути и снижению скорости движения фрагментов НК. Это, в свою очередь, позволяет разделять фрагменты НК, близкие по электрофоретическим свойствам (масса, заряд и т.д.); выделять из совокупности фрагментов тот, который необходим для биохимических и генноин- женерных целей.

Формула изобретения

Способ электрофоретического разделения нуклеиновых кислот растений, включающий внесение препарата нуклеиновых кислот в агарозный гель и воздействие на препарат электромагнитным полем, отличающийся тем, что, с целью увеличения разрешающей способности способа за счет снижения скорости движения фрагментов нуклеиновых кислот в электромагнитном поле, перед внесением в гель препарат нуклеиновых кислот обрабатывается метасиликатом натрия в концентрации - М.

Использование: биохимия и молекулярная биология. Сущность: с целью регулирования скорости движения фрагментов нуклеиновых кислот в электрофоретической системе, препарат перед внесением в гель обрабатывают соединением кремния, например метасиликатом натрия в концентрации - М. Следствием этого является уменьшение скорости движения фрагментов нуклеиновых кислот в электромагнитном поле на 20% по сравнению с контролем. 1 табл.