Дифференциально-диагностическая питательная среда для выделения иерсиний Советский патент 1992 года по МПК C12N1/20 C12Q1/04 

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к бактериологической диагностике иерсиний.

Известна дифференциально-диагнос- тическпя среда Серова для выделения иерсиний энтероколитика и псевдотуберкулеза (1, 2, 3).

Однако известная среда имеет следующие недостатки:

выросиие колонии темно-красного цвета (полиморфные по форме и консистенции) трудно дифференцируются с другими энтеробактериями, окрашиваются в красный цвет,

некоторые компоненты среды отечественной промышленностью не выпускаются.

Цель изобретения - создание среды, обеспечивающей рост колоний иерсиний однородных По цвету и форме.

Сущность изобретения заключается в следующем: в среду, включающую глюкозу, мочевину и сухой питательный агар, вводят медицинскую желчь, спир- товый раствор бромтимолового синего, водопроводную воду при их соотношении, г/л:

Глюкоза9,0-10,0

Мочевина4,5-5,0

Медицинская желчь 19,0-20,0 1,6%-ный спиртовый раствор бромтимолового синего 7,5-8,0 Сухой питательный

VJ

VI

00 00

ю

агар33,0-35,0

Водопроводная вода До 1,0л

Способ приготовления.

В 0,9 л водопроводной воды раство- ряют нагреванием сухой питательный агар и медицинскую желчь, автоклави- руют 20 мин при 0,5 атм. После охлаждения (незначительного - до 80 С) добавляют глюкозу, мочевину, бромти- моловый синий и водопроводную воду до 1,0 л. Среду перемешивают и разливают в чашки Петри. рН среды 7,8. Среду хранят при 10°С 7-10 суток.

На среде с указанным составом ко- лонии иерсиний различных видов через 48 ч растут однородными по форме и цвету - голубые или голубые с желтоватым краем на синем фоне среды, сухие, матовые, сдвигающиеся по поверх ности агара петлей. Они легко дифференцируются визуально от бактерий кишечной группы (не разлагающих мочевину) , приобретающих на среде с бром тимоловым синим желтую оьраску с ха- рактерной морфологией (выпуклость, сочность).

Среда готовится из отечественных ингредиентов, отличается простотой изготовления, дешевизной (стоимость 1 л в 8 раз дешевле среды Серова),

Результаты испытаний образцов среды с различными количественными соотношениями компонентов представлены в примерах.

Пример 1. Компоненты, сое- тавляющие rain концентрации в среде (глюкоза - 9,0 г, мочевина - 4,5 г, медицинская желчь - 19,0 г, 1,6%-ный раствор бромтимолового синего - 7,5 г, сухой питательный агар-,- ; 33,0 г, водопроводная вода - до 1л) использовали для приготовления среды по способу,описанному выше. В ходе проведенных исследований изучено 42 штамма иерсиний и 9 штаммов дру- гих энтеробактерий (2 штамма Shigel- la sonnei, Sh. flexneri, E. coli, 3 Salmonella, 1 штамм Klebsiella pneumonia), которые параллельно за- . севали на среду с бромтимоловым си- ним в дозе 102 микробных клеток на каждую чашку в нескольких вариантах; иерсинии псевдотуберкулеза и иерсини Знтероколитика - монокультуры и иер- синий в смеси с другими энтеро- бактериями. В результате проведенных исследований установлено, что на предлагаемой среде иерсинии псевдотуберкулеза через 48 ч растут в виде

мелких голубых колоний (1-2 мм) с фестончатым краем, выпуклые с приподнятым центром и суховатой матовой поверхностью на синем фоне среды. (Через 24 ч края колоний могут иметь слегка желтоватый оттенок). Колонии иерсиний энтероколитика через 48 ч крупнее (2-4 мм), выпуклые, сухие с матовым налетом, голубого цвета.

Колонии других энтеробактерий (не разлагающих мочевину - шигелл, сальмонелл, эшерихий и др.) изменяют цвет среды, приобретая желтый цвет, выпуклые, сочные, легко дифференцируются от иерсиний.

Пример 2. Компоненты, составляющие максимальные концентрации в среде (глюкоза - 10,0 г, мочевина - 5,0 г, медицинская желчь - 20,0 г, 1,6%-ный спиртовый раствор бромтимолового синего - 8,0 г, сухой питательный агар - 35,0 г, водопроводная вода - до 1,0 л). Среду готовили аналогично примеру 1, испытывали культуры бактерий, приведенные в примере 1.

В этой серии опытов при посеве иерсиний псевдотуберкулеза и иерсиний энтероколитика через 48 ч отмечали рост мелких колоний,по форме и цвету заметно не отличающихся от роста, описанного в примере 1. При посеве иерсиний в смеси с энтеробактерия- ми отмечали четкую дифференциацию колоний иерсиний по цвету, размерам и форме от других энтеробактерий. Проведенные испытания позволили сделать вывод, что указанные концентрации min и max содержания компонентов в заявляемой среде обеспечивают достижение цели , существенных различий между ними не установлено. Поэтому , приведенные соотношения компонентов в среде являются оптимальными.

В серии опытов испытаны также образцы среды, в которые вводили компоненты, отличающиеся от заявляемого состава тем, что их концентрация была меньше минимальной ( min) и больше максимальной (тах). Среду готовили аналогично примеру 1, испытывали культуры, приведенные в примере 1.

П р и м е р 3. Состав среды с 4min концентрацией компонентов, г: Глюкоза7,0

Мочевиназ О

Медицинская желчь 17,0 1,6%-ный спиртовый раствор бромтимоло-„

вого синего Сухой питательный агар Водопроводная вода

5,0

33,0

До 1,0 л

7,5-8,0

17781826

Полученные результаты свидетельств вуют о том, что при содержании компонентов, указанных в примерах 3 и k, предлагаемая среда не обладает дифференциально-диагностическими свойстНа среде с oin концентрацией ком вами

понентов отмечали замедленный ростформула изобретения иерсинии, через to ч иерсинии псевдотуберкулеза вырастали в виде мелкихДифференциально-диагностическая точечных колоний (1-1,5 мм) серовато- 0 питательная среда для выделения иер- . желтоватого цвета. Колонии иерсиниисиний, содержащая глюкозу, мочевину, энтероколитика - крупнее (2-3 мм) ижелчь, сухой питательный агар, инди- имели тот же цвет (табл.1).катор и воду, отлимающаяПри посеве иерсинии в смешаннойс я тем что, с целью повышения дифкультуре (шигеллы, сальмонеллы и др.)фере нциально-диагностических свойств

иерсинии трудно дифференцируются посреды, она содержит в качестве индицвету.катора 1,6%-ный спиртовой раствор

Пример 1. Состав среды сбромтимолового синего при следующем гаах содержанием компонентов, г (табл.2) :20 соотношении компонентов, г/л:

Глюкоза 13,0Глюкоза 9,0-10,0

Мочевина 8,0Мочевина .S-S.O

Медицинская желчь 23,0Желчь 19,0-20,0

1,63-ный спиртовый1,6%-ный спиртовой

раствор бромтимоло-25 Раств°Р бромтимопог.

вого синего 11,0вого синего

Сухой питательныйСУХОЙ питательный

агар 35,0агаР 33,0-35,0

Водопроводная вода До 1,0 л Вода До 1 л.

Таблица

Характеристика колоний иерсинии на среде с inin содержанием компонентов при посеве иерсинии в дозе 102 микробных клеток на 1 чашку

Количество колонийМорфология колоний

размерформаI цвет

50-601 - 3 ммкруглыесероватовыпуклые желтоватый сочные

Таблица 2

Характеристика колоний иерсинии на среде с шах содержанием компонентов при посеве иерсинии 102 микробных

клеток на 1 чашкуКоличество колонийМорфология колоний

РазмерФормаI Цвет

7,5-8,0

Использование: медицинская микробиология, бактериологическая диагностика иерсиний. Сущность изобретения: для повышения дйфференциально- диагностических свойств в питательную среду для выделения иерсиний вводят в качестве индикатора 1,6%-ный спиртовой раствор бромтимолового синего при следующем соотношении компонентов, г/л: глюкоза 9,0-10,0, мочевина 4,5-5,0, желчь 19,0-20,0, 1,6%-ный спиртовой раствор бромтимолового синего 7,5-8,0, сухой питательный агар 33,0-35,0, вода до 1 л. 2 табл. (Л С