Способ определения активности церулоплазмина в сыворотке крови Советский патент 1992 года по МПК G01N33/48 C12Q1/26 

Изобретение относится к биохимии, в частности к лабораторной практике и клиническим лабораторным исследованиям,

Известен способ определения активности церулоплазмина, недостатком которого является необходимость каждый раз при определении активности церулоплазмина готовить свежий ацетатный буфер.

Целью изобретения является упрощение способа за счет использования консервантабромистого2-трифен и л фосфон пометил нафталина (БТФН), который растворяют в ацетатном, буфере, а исследуемую пробу вносят непосредственно в полученный раствор.

Способ осуществляется следующим образом.

В две опытные и одну контрольную пробирки вносят по 2 мл ацетатного буфера, содержащего 0,5-1,25 г/л БТФН и 0,1 мл исследуемой биологической жидкости. Пробы взбалтывают, закрывают резиновыми пробками и помещают на хранение в холодильник при 5-10°С. В последующие 30 дней

аналогично подготовленные пробы накап- ЛИРЯЮТ в холодильнике. На 30-ый день или в любой удобный для работника день, но не позже 30-го дня, определяют активность церулоплазмина во всех пробах, на что затрачивается значительно меньше рабочего времени.

П р и м е р. В две опытные и одну контрольную пробирки вносят по 2 мл ацетатного буфера, содержащего 0,75 г/л БТФН, и по 0,1 мл исследуемой биологической жидкости. Пробы взбалтывают, закрывают резиновыми пробками и помещают на хранение в холодильник при 5-10°С. В последующие 30-и дней аналогично подготов- ленные пробы накапливают в холодильнике. На 30-й или в любой удобный для работника день, но не позже 30-го дня, определяют активность церулоплазмина во всех накопившихся пробах, для чего в контрольные пробирки добавляют 1 мл раствора сульфита натрия и взбалтывают их содержимое. Во все пробирки вносят по 1 мл п-фе- нилендиамина, встряхивают и помещают их

сл

с

-ч XI

00

о ю сл

в водяной ультратермостат с температурой 37°С на 60 мин., взбалтывая их через каждые 3-5 мин. При этом царулоплазмин взаимодействует с п-фенилендиамином и превращает его в продукт синего цвета. Че- рез 1 ч во все пробирки приливают по 7 мо н-бутилового спирта, в результате чего останавливается ферментативная реакция в опытных пробирках. Пробирки закрывают пробками, интенсивновстряхивают

30-40 с., помещают в ледяную баню на 10 минут, после чего центрифугируют со скоростью 1,500 об/мин в течение 10 мин, отсасывают верхнюю бутаноловую фазу, переносят ее в кювету с толщиной рабочего слоя 10 мм и колор иметрируют на ФЭК при длине световой полны 582 нм (фильтр № 7). Для выражения активности церулоплазми- на в условных единицах среднюю арифметическую величину экстмнкции, полученную при колориметрии двух параллельных опытных проб против контроля, умножают на 100 и делят на количество миллиграммов белка, содержащегося в 0,1 мл биологической жидкости. Содержание белка опреде- ляют по одной из известных методик.

В таблице приведены экстинкции, полученные по предлагаемому способу в разные сроки хранения проб, состоящих из 2 мл ацетатного буфера, содержащего 0,25- 1,5 г/л БТФН и 0,1 мл сыворотки крови.

Экстинкции активности церулоплаз

Проведенные эксперименты в процессе испытаний предлагаемого способа подтверждают его экономический эффект, выражающийся в значительном снижении себестоимости одного анализа на активность церулоплазмина. Использование предлагаемого способа существенно экономит рабочее время сотрудника, а также затраты электроэнергии, химреактивов и облегчает выполнение научной и практической работы.

Формула изобретения Способ определения активности церулоплазмина в сыворотке крови, включающий смешивание исследуемой пробы, консерванта и ацетатного буфера, добавление к смеси раствора сульфата натрия, вне- сениеп-фенилендиамина.

термостатирование ее с последующим добавлением н-бутанола, выдерживанием на холоде, отделением бутаноловой фазы, измерением ее спектра поглощения и оценкой результатов, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, в качестве консерванта используют бромистый 2-трифе- нилфосфониометилнафталин, который предварительно растворяют в ацетатном буфере из расчета 0,5-1,25 г/л буфера, а исследуемую пробу вносят непосредственно в полученный раствор консерванта.

полученные по заявляемому способу

Использование: биология и медицина. Сущность изобретения: в ацетатный буфер в качестве консерванта вносят бромистый 2-трифенилфосфонио метил нафталин из расчета 0,5-1,25 г/л буфера. Исследуемую сыворотку смешивают с подготовленным заранее буфером. К анализируемой пробе последовательно добавляют сулофат натрия и n-фенилендиамин, термостатируют ее. Затем вносят в нее н-бутанол и выдерживают на холоде. Измеряют спектр поглощения в бутаноловой фракции, по которому оценивают результаты. Используемый консервант одновременно сохраняет срок годности буфера и активность церулоплаз- мина. 1 табл