Способ определения церулоплазмина в сыворотке крови Советский патент 1986 года по МПК G01N33/48 

ю -j

со оо

1

Изобретение относится к биохимии, в частности к клиническим лабораторным исследованиям.

Целью изобретения является повышение точности способа при длительном хранении проб за счет добавления к пробе раствора этония в ацетатном буфере.

Способ осуществляется следующим образом.

В две опытные и одну контрольную пробирки вносят 2 мл ацетатного буфера 0,1 мл исследуемой биологической жидкости и 0,1 мл 0,4-1,2%-ного раствора этония в ацетатном буфере. Пробы взбалтывают, закрывают резиновыми пробками и помещают на хранение в холодильник при температуре 5-10°С. В последующие 120 дней аналогично подготовленные пробы накапливают в холодильнике. На 120-й день или в любой удобный для научного работника день, но не позже 120го дня, определяют активность церулоштазмина во всех пробах, на что затрачивается значительно меньше рабочего времени.

Пример. В две опытные и одну

контрольную пробирки вносят 2 МП

ацетатного буфера, 0,01 мл исследуемой биологической жидкости и 0,1 мл раствора этония. Пробы взбалтывают, закрываютрезиновыми пробками и помещают на хранение в холодильник при 5-10°С. В последующие 120 дней аналогично подготовленные пробы накапливают в холодильнике. На 120-й или в любой удобный для научного работника день, но не позже 120-го дня определяют активность церулоплазмина во всех накопившихся, пробах, для чего в контрольные пробирки добавляют 1 МП раствора сульфита натрия и взбалтывают их содержимое. Во все пробирки вносят по 1 МП п-фенилендиамина, встряхивают и помещают их в водяной ультратермостат с температурой 37°С на 60 мин, взбалтывая их через каждые 2-5 мин. При этом церулоплазмин взаимодействует с п-фенилендиамином и превращает его в продукт синего цвета. Через 1 ч во все пробирки приливают по 7 мп н-бутилового спирта, в результате чего останавливается ферментативная реакция в опытных пробирках. Пробирки закрывают пробками, интенсивно встряхивают

738002

30 с, помещают в ледяную баню на 10 минут, после чего центрифугируют со скоростью 1500 об/мин в течение 10 мин, отсасывают верхнюю бутаноло5 вую фазу, переносят ее в кювету с толщиной рабочего слоя 10 мм и колориметрируют на ФЭК при длине световой волны 582 нм (фильтр № 7). Для выражения активности церулоплазмина в

О условных единицах среднюю арифметическую величину экстинкции, полученную при колориметрии двух параллельных опытных проб против контроля, умножают на 100 и делят на количест5 во миллиграммов белка, содержащегося в 0,1 мл биологической жидкости. Содержание белка определяют по одной из известных методик.

В табл. 1 представлена зависи0 мость экстинкции проб при определении активности церулоплазмина по известному способу (сыворотка № 4) от сроков хранения проб, состоящих из 2 мл ацетатного буфера и О,1 мл сыворотки крови человека, в холодильнике при 5-10°С.

В табл. 2 приведены экстинкции, полученные по предлагаемому способу в разные сроки хранения, проб, состоя30 щих из 2 мл ацетатного буфера, 0,1 мл сыворотки крови и 0,4 мл этония.

Проведенные эксперименты в процессе испытаний предлагаемого способа подтверждают его экономический эффект, выражающийся в значительном снижении себестоимости одного анализа на активность церулоплазмина. Использование предлагаемого способа существенно экономит рабочее время научного сотрудника, а также затраты электроэнергии и облегчает вьтолнение

научной работы.

Формула изобретения

Способ определения церулоплазмина в сыворотке крови путем добавления к пробе раствора п-фенилендиамина, экстракции продукта реакции н-бутанолом с последующим фотометрическим измерением экстракта, отличающийся тем, что, с целью повышен11я точности способа при длительном хранении проб,к пробе предварительно добавляют 0,4-1,5%-ньй раствор этония в ацетатном буфере.

Изобретение относится к биохимии, в частности к клиническим лабораторным исследованиям. Цель изобретения - повышение точности способа при длительном хранении проб за счет добавления к пробе раствора этония в ацетатном буфере. Для этого в две опытные и одну контрольную пробирки вносят 2 МП ацетатного буфера, 0,1 мл исследуемой биологической жидкости и 0,1 мл 0,4-1,2%-ного раствора этония в ацетатном буфере. Пробы взбалтывают, закрывают резиновыми пробками и помещают на хранение в холодильник при . В последукицие 120 дней аналогично подготовленные пробы накапливают в холодильнике. Затем не позже 120-го дня определяют активность церулоплазмина во всех пробах, на что затрачивается значис тельно меньше рабочего времени. 2 табл. (Л