Способ определения антигенсвязывающих лимфоцитов Советский патент 1992 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для диагностики различных заболеваний и оценки вакцинального процесса. Появление антигенсвязывающих лимфоцитов является одним из признаков иммунного ответа.

Известен способ определения антигенсвязывающих лимфоцитов путем розетко- образования с эритроцитами (обычно бычьими), нагруженными соответствующим антигеном. Способ сопровождается контролем, при котором реакцию проводят с ненаг- руженными эритроцитами Способ позволяет определять содержание антигенсвязывающих лимфоцитов

Недостатком способа является его неточность, обусловленная невозможностью определения антигенсвязывающих лимфоцитов отдельных субпопуляций и удельного

содержания антигенсвязывающих клеток в субпопуляциях лимфоцитов

Цель изобретения - повышение точности способа за счет выявления антигенсвя- зывающих лимфоцитов в Т,В,Д и О субпопуляциях лимфоцитов

Способ осуществляется проведением смешанного розеткообразования, в котором участвуют одновременно эритроциты барана, частицы зимозана, нагруженные комплементом, и нагруженные соответствующим антигеном эритроциты кур. В контрольном смешанном розеткообразовании вместо сенсибилизированных антигенов применяют несенсибилизированные куриные эритроциты Лимфоциты, связавшие только сенсибилизированные куриные эритроциты (не менее 3), относятся к нулевым (0) антигенсвязывающим, связавшие, кроме того, эритроциты барана (не менее 3)

4 Ч 00

О

сл

- к Т-антигенсвязывающим; связпвшие не менее 3 сенсибилизированных эритроцитов кур и не менее 3 частиц зимозана - к В-ан- тигенсвязывающим; связавшие не менее 3 бараньих эритроцитов, 3 частиц зимозана и 3 сенсибилизированных эритроцитов кур - двойным (Д) антигенсвязывающим лимфоцитам, Лимфоциты, связавшие ке более двух индикаторных частиц каждого вида (эритроциты барана, эритроциты кур, зимо- зан), относят к нулевым, не связывающим антиген; связавшие только эритроциты барана (не менее 3) - к Т, антиген не связывающим; лимфоциты, связавшие только частицы зимозана (не менее 3), - к В, анти- ген не связывающим; лимфоциты, связавшие не менее 3 эритроцитов барана и 3 частиц зимозана, - к Д-, антиген не связывающим. Антигенсвязывающие лимфоциты определенных субпопуляций считают выяв- ленными, если их содержание достоверно превышает содержание клеток тех же субпопуляций, связавших в контрольном смешанном розеткообразовании ненагруженные куриные эритроциты. Удельное со- держание антигенсвязывающих клеток в определенной субпопуляции лимфоцитов определяют по отношению антигенсвязывающих клеток и всех лимфоцитов той же субпопуляции. Распределение антигенсвя- зывающих лимфоцитов по субпопуляциям рассчитывают, принимая общее количество &нтигенсвязывающих лимфоцитов за 100%.

П р и м е р 1. По предлагаемому способу смешали 0,1 мл взвеси в растворе Хенкса лимфоцитов (2-106 кл/мл) больной Г, с диагнозом мастит, выделенных из крови во 2 и в 9 дни заболевания, и 0,3 мл смеси, содержащей 0,3 Ю7 эритроцитов барана, 0,08% сенсибилизированных частиц зимозана и 0,3х хЮ нагруженных тейхоевой кислотой золотистого стафилококка (в контроле - ненагруженных) эритроцитов кур в 1 мл. Смесь выдерживают 5 мин при 37°С, центрифугировали 5 мин при 1500 об/мин и дополни- тельно в течение 1 ч выдерживали при 4°С. Клеточную суспензию наносили на обезжиренное предметное стекло. Готовили мазок. Мазок высушивали на воздухе, фиксировали метиловым спиртом 15 мин и окрашивали по Романовскому-Гимза.

Процентное содержание (средняя и ее средняя квадратическая ошибка) антигенсвязывающих лимфоцитов каждой субпопуляции определяли подсчетом 7 сотен лимфоцитов порознь. Антигенсвязывающие лимфоциты данной популяции считали выявленными только в случае достоверного (,05) превышения их содержания над содержанием лимфоцитов той же субпопуляции, связавших ненагруженные эритроциты кур.

При обследовании больной Г. с диагнозом мастит на второй день болезни выявлено 1,14±0,14% Т и 0,86±0,34% О антитенсвязывающих лимфоцитов, В и Д антигенсвязывающие лимфоциты не определены. Удельный вес антигенсвязывающих лимфоцитов в Т, В, Д и О субпопуляциях равен 2,8; 0; 0: 2,2% соответственно, а распределение антигенсвязывающих лимфоцитов по Т, В, Д и О субпопуляциям составило 57,0, О и 43% соответственно. На 9 день заболевания количество Т антигенсвязывающих лимфоцитов снизилось до 0,43±0,30%, содержание О антигенсвязывающих лимфоцитов практически не изменилось (0,43±0,20%), но появились В антигенсвязывающие лимфоциты (0,57± ±0,20%). Д антигенсвязывающие лимфоциты не выявлены. Удельный вес антигенсвязывающих лимфоцитов в. Т, В, Д и О субпопуляциях оказался равным 8,1; 3,3; 0 и 2,2% соответственно, а распределение антигенсвязывающих лимфоцитов по Т, В, Д и О субпопуляциям составило соответственно 30, 40, 0 и 30%. Полученные параметры повышают точность определения антигенсвязывающих лимфоцитов и диагностическое значение результатов, По способу-прототипу общее содержание антгенсвязывающих лимфоцитов оказалось тем же, что и сумма антигенсвязывающих лимфоцитов всех субпопуляций по предлагаемому способу, но по способу-прототипу антигенсвязывающие лимфоциты различных субпопуляций, удельное содержание антигенсвязывающих лимфоцитов в каждой субпопуляции и экстенсивное распределение антигенсвязывающих лимфоцитов по субпопуляциям определить невозможно.

Аналогичные данные получены при обследовании 10 больных маститом,

П р и м е р 2. Обследовали больную С. с диагнозом глаукомы открытоугольной 1 стадии, Эритроциты кур нагружены антигеном трабекулярной ткани, вовлекаемой в глау- комный процесс.

Предлагаемый и известный способы дали одинаковые значения (17,3%) содержания антигенсвязывающих лимфоцитов у больной. Но предлагаемый способ, в отличие от известного, позволил, кроме того, определить антигенсвязывающие лимфоциты различных субпопуляций. У обследованной больной 7,3% антигенсвязывающих лимфоцитов являлись Т, 1,0% - В, 8% - 0 и 1,0% - Д клетками, Кроме того, предлагаемый способ позволил оценить удельное

содержание антигенсвязывающих лимфоцитов в каждой субпопуляции 28, 19, 12 и 100% в Т, В, О и Д субпопуляциях. Обеспечена также возможность оценить распределение лимфоцитов по субпопуляциям: 42; 6, 46 и 6% антигенсвязывающих лимфоцитов относились соответственно к Т, В, О и Д субпопуляциям.

Аналогичные данные получены при обследовании 39 больных первичной глауко- мой.

П р и м е р 3. При обследовании 10 человек, иммунизированных протейной химической вакциной, обнаружены антигенс- вязывающие (к протею) лимфоциты Т, В и О субпопуляций, причем в динамике иммунного ответа с 5 по 17 день после начала вакцинации содержание В антигенсвязывающих лимфоцитов увеличилось больше (с 0,29 до 0,71 %). чем Т антигенсвязывающих лимфоцитов (с 0,71 до 1,00%).

Таким образом, предложенный способ дал возможность определить антигенсвязы- вающие лимфоциты в различных субпопуляциях лимфоцитов, удельное содержание их в каждой из таких субпопуляций и экстенсивное распределение антигенсвязыващих лимфоцитов по определенным субпопуляциям для уточнения стадии заболевание и иммунного ответа, что существенно важно для уточнения диагноза и оценки срока заболевания, назначения лечения и оценки давности вакцинации

Формула изобретения Способ определения антигенсвязывающих лимфоцитов путем проведения реакции розеткообразования лимфоцитов с эритроцитами, нагруженными соответствующим антигеном, с последующей регистрацией реакции, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа путем выявления антигенсвязывающих лимфоцитов в Т, В, Д и О субпопуляциях лимфоцитов, осуществляют смешанное розеткообразо- вание лимфоцитов с эритроцитами барана, частицами зимозана, нагруженными комплементом, и эритроцитами кур, нагруженными антигеном, и при связывании эритроцитов кур и барана определяют Т-ан- тигенсвязывающие лимфоциты, при связывании эритроцитов кур и зимозана - И-антигенсвязывающие лимфоциты, эритроцитов кур, барана и эимозана - Д-анти- генсвязывающие лимфоциты, а связывание эритроцитов кур - 0-антигенсвязывающие лимфоциты.

Использование медицина, иммунология, диагностика различных заболеваний и вакцинального процесса. Цель: повышение точности определения антигенсвязываю- щих лимфоцитов. Сущность изобретения определение антигенсвязывающих лимфоцитов Т, В, Д и О субпопуляций достигается проведением смешанного розеткообразо- вания с реагентами - эритроцитами кур, нагруженными соответствующим антигеном, частицами зимозана, нагруженными комплементом, и эритроцитами барана Лимфоциты, связавшие только эритроциты кур, являются О антигенсвязывающими, связавшие эритроциты кур и барана - Т антигенсвязывающими; связавшие эритроциты кур и частицы зимозана - В антигенсвязывающими, связавшие все три реагента - Д антигенсвязывающими. Ё