СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИКАРБОНОВЫХ КИСЛОТ Советский патент 1966 года по МПК G01N27/26 

Общеизвестны способы количественного определения бикарбоновых кислот и их амидов в продуктах свеклосахарного производства.

Согласно одному из известных способов для определения следующих бикарбоновых кислот и их амидов - аспарагина, глютамина, аспарагиновой, глютаминовой и пирролидонкарбоновой кислот - из отобранной для анализа пробы вначале удаляют соли и сахара, а затем проводят хроматографию с последующими электрофорезом при напряжении 280 в и силе тока 10 ма и фотоэлектроколориметрией. Этот способ длительный, для его проведения требуется сложное оборудование. Кроме того, вместе с солями и сахарами удаляется часть определяемых веществ, что уменьшает точность анализа.

Предлагаемый способ проще известных, так как он предусматривает определение бикарбоновых солей и их амидов одновременно из одной отобранной для анализа пробы без предварительного удаления солей и Сахаров.

Это достигается тем, что электрофорез испытуемого образца проводят при пониженном напряжении и силе тока, после чего электрофореграмму разделяют по стартовой линии и определяют бикарбоновые кислоты и амиды из соответствующей половины бумаги известными приемами. Электрофорез следует вести

при напряжении 180-200 в и силе тока 0,8 ма.

В качестве навески можно использовать те же фильтраты, что и для определения сахарозы в продуктах свеклосахарного производства.

Предлагаемый способ заключается в следующем.

Берут 140-160 мкл фильтрата, полученного при определении сахарозы в жидких продуктах, или 40-60 мкл фильтрата, полученного при определении сахарозы в густых продуктах свеклосахарного производства, и наносят микропипеткой при подогреве теплым воздухом на хроматографическую бумагу. Пробу наносят в виде полосы длиной 15 мм и шириной 5 мм на поперечную стартовую линию, находящуюся на середине листа. Расстояние между пробами на стартовой линии 15 мм. Затем хроматографнческую бумагу с нанесенными несколькими, например семью- восемью, пробами помещают в прибор для электрофореза на 2,5 час при напряжении 180-200 в и силе тока 0,8 ма на каждый сантиметр поперечного разреза бумажной полосы. Через 2,5 час бумагу вынимают из прибора для электрофореза и сушат при 60° С. Полученную электрофореграмму разрезают на две части по стартовой линии. Половину бумаги, расположенную ближе к положителы1ОД1у полюсу, опрыскивают раствором нннгпдрина и прояи.чяют при 60°С в течение 20 мин. На этой полопине бумаги четко проявляются пятна, соответствующие аспарагиновой и глютаминовой кислотам.

По окрашенным пятнам с помощью известного способа фотоэлектроколориметрировапия определяют аспарагиновую и глютаминовз о кислоты в нанесенных пробах, а затем н в исходной навеске.

Из второй ноловины электрофореграммы, расположенной ближе к отрицательному полюсу и ие опрысканной раствором нингидрина, определяют аснарагин и глютамии. Для этого нз половины электрофореграммы вырезают участки бумаги шириной 15 мм и длипой 30 мм. Количество полосочек бумаги равно числу нанесенных проб. Ширина нолосочек 15 М.М установлена в связи с тем, что верхней границей их является стартовая липня, а нижняя находится в 15 мм от нее.

11з полосочек элюируют 8 н. солягюй кислотой аспарагпн и глютамин непосредственно в коническую пробирку. На элюирование, которое длится 4-5 мин, требуется 4 мл соляпой кислоты. Коиические пробирки закрывают пришлифованны.ми крышками, соединенными с воздушными холодильниками стеклянными трубками длиной 60-70 см и диаметро.м 0,6 см. Пробирки помещают пучком на 3 час в кипящую водяную баню или в сущильный шкаф, в верхней части которого имеется отверстие для воздушных холодильников. В течение 3 час при температуре 100°С происходит иолный гндролиз аепарагина и глютамипа в соответствующие кислоты.

Отсоединив пробирки от холодильников, производят выпаривание до тех пор, пока в них не останется приблизительно две капли раствора. Этот остаток наносят в виде одной пробы па хроматографическую бумагу при подогреве теплым воздухом для вторичного электрофореза, который проводят при таких же условиях, как н первый.

После вторичного электрофореза асиарагин и глютамии определяют так же, как аспарагииовую и глютаминовую кислоты. По полученным новым величинам узнают путем пересчета о содержании каждого амида в исходной навеске.

Пирролндонкарбоновую кислоту определяют по разности между количеством общей глютаминовой кислоты и количеством гидролизованного глютамина вместе с количеством собственно глютаминовой кислоты, определенной носле первого электрофореза. Гидролиз фильтрата для определения общего количества глютаминовой кислоты проводят в то время, когда происходит первый электрофорез н гидролиз амидов. Фильтрат для гидролиза берут Б таком же количестве, как и для первого электрофореза. Гидролиз проводят в конических пробирках в присутствии 4 мл 3 н. соляной кислоты при тех же условиях, что и гндролиз амидов.

Остаток носле выпаривания гидролизованного фильтрата наносят в виде одной пробы при подсушивании теплым воздухом на хроматографическую бумагу рядом с пробой гидролизованных амидов для вторичного электрофореза. После вторичного электрофореза определяют количество общей глютаминовой кислоты и путем пересчета - количество пирролидонкарбоновой кислоты в исследуемом продукте. То жость способа +50/0.

Предмет изобретения

1.Способ определения бикарбоновых кислот и их амидов в продуктах свеклосахарного производства нри помощи хроматографии с электрофорезом и электрофотоколориметрированием, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа путем определения их из одной отобранной пробы без предварительного удаления солей и Сахаров, электрофорез проводят при пониженном напряжении и силе тока с последующим разделением электрофореграммы по стартовой линии и определением бикарбоновых кислот и амидов известпыми приемами.

2.Способ по п. 1, отличающийся тем, что электрофорез проводят при следующих параметрах тока: напряжение 180-200 в и сила тока 0,8 ма.