Способ обнаружения дикаина Советский патент 1979 года по МПК G01N21/06 

рами брома, нитритом натрия и хинозолом в присутствии гидроксида натрия. Наличие Дикаина в биологическом материале определяют не по молекуле дикаина, а по его метаболиту - ге-бутнламинобензойной кислоте, являющейся более устойчивым соединением и сохраняющейся более длительное время. Кроме того, с целью экономии времени на химико-токсикологический анализ обработку анализируемой пробы проводят ири одновременной гомогенизации биологического материала в микроразмельчителе тканей РТ-2 водой, подкисленной соляной кислотой. Очищают вытяжку от соэкстрактивных веществ нагреванием на кипящей водяной бане с последующими центрифугированием и экстракцией хлороформом при рН 11. Предварительно очищенную вытяжку подкисляют до рН 4,0-4,5 ,и экстрагируют хлороформом tt-бутиламинобензойную кислоту. Хлороформное извлечение очищают электрофо резом на бумаге. Электрофореграммы высущивают при комнатной температуре и проявляют реакцией азосочетания. Для этюго от электрофореграммы (i26x2 cAi) отрезают продольную полосу щириной 0,5 см, которую опрыскивают 1 н. раствором соляной кислоты и подвергают воздействию паров брома в течение 5 мин. Затем последовательно опрыскивают 3%ным раствором нитрита натрия и через 3 мин 0,3%-ным раствором хинозола в 8%ном растворе гидроксида натрия. Пример. 10 г печени трупа, содержащей 1000 мкг дикаина, после 24 ч инкубирования гомогенизируют в присутствии 25 мл разбавленной соляной кислоты с последующим центрифугированием при 6000 об/мин. Операцию повторяют 3 раза. Центрифугаты объединяют, подщелачивают 25%-ным раствором аммиака до рН 11 и экстрагируют хлороформом дикаин 4 раза. При однократной экстракции хлороформом при рН И экстрагируется 93% дикаина. Основной метаболит дикаина - я-бутиламинобензойная кислота (п-БАБК) при рН И практически не экстрагируется. При экстракции дикаина в хлороформный слой переходит основная масса соэкстрактов. Определение п-БАБК. Вытяжку после экстракции дикаина подкисляют концентрио«от т ч рованнои соляной кислотой до рН 1 и нагревают в течение 1 ч при 100° С с целью гидролиза связанной п-БАБК и отделяют центрифугированием коагулирующие при нагревании биокомпоненты. Центрифугат подщелачивают 25%-ным раствором аммиака до рН 4,0-4,5 и экстрагируют хлороформом л-БАБК 4 раза. При однократной экстракции хлороформом при рН 4,0-4,5 жстрагируется 97% п-БАБК. Хлороформiibie экстракты (рН 4,0-4,5) объединяют и раствор,тель испаряют. Сухой остаток растворяют в 96%-ном этаноле. Обнаружение я-БАБК проводят по следующей методике. На полоску фильтровальной бумаги наносят в несколько приемов аликвоту полученного раствора экстракта. Место внесения обрабатывают 1 н. раствором соляной кислоты и затем парами брома до образования устойчивой желтой окраски на месте нанесения раствора экстракта. Далее последовательно обрабатывают 3%-ным раствором нитрита натрия и через 3 мин. 0,3%-иым раствором хинозола в 8%-ном растворе гидрооксида натрия. Образуется кирпично-красное окращивание, интенсивность которого зависит от количества гг-БАБК в пробе. Интенсивность окраски сохраняется более двух лет. Чувствительность окраски (реакции) 0,5 мкг д-БАБК в пробе. Очистку раствора экстракта (рН 4,0- 4,5) проводят электрофорезом на бумаге по следующей методике. Аликвоту раствора экстракта наносят в виде сплошной полосы на электрофореграммы (2x26 см, хроматографическая бумага ФП 15) и проводят электрофорез в течение 1 ч при напряжении 400 В. Начальная температура электролита 20° С. Одновременно проводят электрофорез свидетеля - /г-БАБК. I На проведение анализа биологического материала предлагаемым способом необходимо 10-12 ч на полный анализ. Использование гомогенизации сокращает время изолирования н повышает выход изолируемых веществ вследствие резкого увеличения поверхности контакта клеток ткани с извлекателем. Чувствительность определения данным способом выще, чем известным, в 25 раз. Формула изобретения Способ обнаружения дикаина путем обработки анализируемой пробы раствором минеральной кислоты, центрифугированием и отделением примесей, обработкой полученного при этом водного раствора хлороформом, очисткой хлороформенного экстракта, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и сокращения времени определения, после обработки кислотой с одновременной гомогенизацией анализируемую пробу нагревают, полученный водный раствор после отделения примесей подкисляют до рН 4,0-4,5 и очистку хлороформенного экстракта осуществляют электрофорезом с последующей обработкой электрофореграммы последоваельно соляной кислотой, парами брома, нитритом натрия и хинозолом в присутствии гидроксида иатрия. 56

Источники информации, принятые во2. Роговский Д. Ю. Исследование дивннмание при экспертизе:каина и ксикаина в судебно-химическом

1. Государственная фармакопея СССР,анализе. Автореферат кандидатской диссеризд. X, М., 1968, с. 244.тации, № 792, Львов, 1968.

682798