Способ стерилизации растительных эксплантов Советский патент 1993 года по МПК A01H4/00 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в селекции и семеноводстве для ускоренного размножения гибридного материала, а также в лесном хозяйстве при микроклональном размножении элитного посадочного материала в лесных и плодовых питомниках.

Цель изобретения снижение токсичности стерилизации и повышение жизнеспособности эксплантов.

Пример 1. Стерилизация эксплантов летнего периода отбора

Полуодревесневшие побеги робинии с удаленными листьями моют трижды горячей водой с мылом, ополаскивают и переносят в кювету с дистиллированной водой, которую помещают в стерильный бокс, где в течение часа облучают бактерицидной лампой. Затем побеги режут на сегменты длиной 15-20 мм с одной пазушной почкой и помещают в растворстерилента. В качествестерилентов испытывались растворы тексанита. хлорной извести и этанол. а также испытывался вариант стерилизации сначала в этаноле, а затем в растворе хлорной извести.

Данные об эффективности г.терилентов приведены в табл. 1.

Полученные данные свидетельствуют о том. что стерилизация в растворе тексанита обеспечивает высокий выход стерильных эксплантов с сохранением их жизнеспособности.

Пример 2. Стерилизация эксплантов зимне-весеннего периода отбора.

Однолетние побеги перед основной стерилизацией готовят аналогичным образом. Подготовленные сегменты погружают на 10 с в 96%-ный этанол. после чего в течение 60 мин выдерживают и 0,1 1.0%-ном раствор беномила. а затем помещают на 1F--30 мин в 10%-ный раствор тексанита.

Данные об эффективности стерилизации приведены в табл. 2.

Испытания показали, что обеззараживание в три ступени, описанное в примере 2 (этанол-беномил-тексанит) дает хорошие результаты при стерилизации яксплантов.

СП

С

ч|

8

;со

СЛ

°

со

вычлененных в растущих в открытом грунте маточных деревьев, контаминированность которых в зимне-весенний период значительно возрастает. При этом уничтожаются источники эндогенной и экзогенной инфекции.

При стерилизации эксплантов, вычлененных с растущих в закрытом грунте оздоровленных маточников (стационарные теп/зицы регулярными фитосанитарными обработками), созданных из суперэлитных растений, размноженных в культуре in vitro, достаточно обработки только тексанитом (пример 1).

После стерилизации по одному из приведенных примеров сегменты культивируют на питательной среде Мурасиге-Скуга. В качестве индукторов морфогенеза использовали 6-БАП и ИМК. Положительный эффект был получен в летний период при посадке полуодревесневших сегментов на питательную среду с 6-БАП - 0.4-0,5 мг/л в сочетании с ИМК - 0,05 мг/л и 6-БАП-0.6 мг/л с добавлением 0,5% активированного угля.

Побеги-регенераты пассировали на питательной среде Мурасиге-Скуга с 6-БАП- 0.1-0.2 мг/л. Работп по пролиферации побегов велась круглогодично. Коэффициент размножения в зимний период был около единицы, в летний период - 2,7-4,1. Образовавшиеся побеги при пересадках решали на черенки или при небольших размерах делили на одиночные побеги либо группы побегов из 2- 3 тт. Побеги, имеющие

длину более 20 мм. сажали для укоренения на среды Мурасиге-Скуга и Гресхофф-Доя, содержащие ауксины - ИМК - 0.3-0.5 мг/л и НУК - 0,1-0,2 мг/л. Наибольшее число

побегов (до 95%) укоренилось на средах Гресхофф-Доя с 0.3 мг/л ИМК и 0.1 мг/л НУК.

Укоренившиеся пробирочные растения переносили в торфоперегнойные горшочки

с субстратом, состоящим из смеси торфа и перлита в соотношении 1:1. Субстрат увлажняли половинным раствором солей по Мура- сиге-Скугу. Сразу после посадки горшочки с растениями переносили в нестационарную

теплицу с мелкокапельным орошением на период акклиматизации. Пересадку растений в открытый грунт производили после того, как корни, разрастаясь, проникали через стенку торфоперегнойного горшочка.

После посадки в открытый грунт растения притеняли деревянными щитами. Приживаемость в теплице и открытом грунте слета- вила 100%.

При обработке по предлагаемому способу высокая стерильность вводимого в культуру материала достигается за счет уничтожения экзогенной инфекции составом тексанит и лечебным действием сиг/п-.-.- ного препарата беномил. прониклнпим о

внутрь растительных тканей и униччожмну щего эндогенную инфекцию, которой ь большой степени инфицирован исходный материал, вычисленный из растущих р. естественных условиях растрчий.

Использование: сельское хозяйство и биотехнология, для культивирования растительных тканей. Сущность: стерилизацию растительных эксплантое осуществляют путем обработки их 96%-ным этанолом. после чего в течение 30-60 мин выдерживают в 0.1-1,0%-ном растворе беномила и дополнительно обрабатывают 6-10%-ным раствором тексанита в течение 15-30 мин. 1 з. п. ф-лы, 2 табл.

Формула изобретения 1. Способ стерилизации растительных эксплантов, включающий обработку раствором бактерицида, отличающийся тем, что, с целью снижения токсичности стерилизации и повышения жизнеспособноти .эксплантов. обработку осуществляют 6- 10%-ным раствором гекг.анита в течение

15-30 мин или 96%-ным этанолом в течение 10-15 с. затем выдерживают в 0.1 -1,0%-ном растворе беномила в течение 30 -60 с и в 6-10%-ном растворе тексанита 15-30 мин.

Таблица 1