Способ размножения чая @ @ Советский патент 1987 года по МПК A01H3/00 

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции и семеноводстве, в исследованиях по фитопатологии и морфогенезу растений.

Цель изобретения - оздоровление исходного материала для размножения при сохранении его жизнеспособности.

Пример. Проводится размножение и оздоровление чая сорта Грузинский № 6, Неодревесневшие побеги стерилизуют 12 с в растворе, содержащем по объему 1,5% перекиси водорода и 50% этанола (остальное вода), а затем 6 мин в 0,1%-ном водном растворе диоцида. При этом от 1000 фрагментов с почками получают 937 эксплантаПоложительный эффект достигается только при последовательном применении двух стерилизующихся растворов: перекиси водорода с этанолом и диоцида. При этом оптимальные концентрации составляют для перекиси водорода 1,5-2,0%, этанола 50-60%, диоцида 0,05-0,2%, а экспозиция для первого стерилизующего раствора составляет 10-15 с, для второго 5-10 мин или 300- 600 с (табл. 2). При уменьшении концентрации стерилентов выход асептического материала значительно снижается, а жизнетов, свободных от фитопатогенной инфекции, т. е. инфицированность составляет всего 6,3%. Жизнеспособность неинфицированных эксплантатов, которая определяется по отсутствию повреждений, вызванных стерилен- тами, и способности к пролиферации, составляет 92,7% (из 937 эксплантатов 869 жизнеспособны). При стерилизации черенков отдельными стерилентами (перекисью

водорода, этанолом и диоцидом) в рекомендуемых дозах и экспозициях получить достаточное количество неинфицированного жизнеспособного материала не удается.

Данные о влиянии отдельных стерилен- тов на инфицированность и жизнеспособность эксплантатов чая приведена в табл. I.

Таблица 1

способность эксплантатов практически не увеличивается. Повыщение концентрации

стерилентов или увеличение времени выдерживания черенков в стерилизующих растворах приводит к резкому снижению и изне- способности эксплантатов без существенного увеличения выхода асептического мате- риала.

Данные о влиянии концентрации и экспозиции двух стерилизующих растворов на инфицированность и жизнеспособность эксплантатов чая приведены в табл. 2.

Стерильные эксплантаты культивируют в пробирках с агаризованными средами MS, 85, SN, в которых концентрацию сахарозы доводят до 30 г/л, а рН до 5,5. В среды BS и SH, не содержащие нитрата аммония, добавляют его в количестве 0,25 г/л. В качестве фитогормона используют БАП в концентрации 1 мг/л. При снижении его конСрок образования розеток из почек, сут

Среднее количество побегов на 1 эксплантат

Таблица 2

центрации увеличиваются сроки образования адвентивных почек и уменьшается их количество (табл. 3). Увеличение концент- рации БАП приводит к ингибированию развития побегов из почек.

Данные о влиянии различных концентраций БАП на морфогенез в культуре чая приведена в табл. 3.

Таблица 3

2220

45

2А

30

1,6 5,1 5,7 5,2

.1

Эксплантаты культивируют при люминесцентном освещении 3000 лк. При освещении ниже 2000 лк почкование замедляется на 2-3 недели, а при освещенности выще 4000 лк развитие побегов из,почек ингиби- руется. Эксплантаты культивируют при 16- часовом фотопериоде (8 ч темнота). При 12-14 ч/сут. фотопериоде образование почек и развитие из них побегов замедляется на 15-20 дней, а при фотопериоде более 18 ч/сут различий в почковании и развитии побегов по сравнению с 16-18 ч/сут фотопериодом не отмечается, однако расход электРасход исходных чере;.:- -ков на получение 1000 саженцов

Коэффициент размножеФрагмент ы с почками помещают для дальнейшего размножения на питательные среды того же состава. Во втором цикле выращивания (50 сут) каждый эксплантат также образует по 3-6 побегов. Всего за 100 дней культивирования от каждого исходного эксплантата получают в среднем по 162 побега. Не выявляются существенные различия в почковании и развитии побегов при использовании питательных сред различного состава (В., MS, SH).

Для получения растений побеги пересаживают на питательные среды без БАП, где они в течение 3 недель укореняются и образуют по 4-5 листьев. Затем полученные растения высаживают в почву, укрывают на 2 педели полиэтиленовой пленкой и после этого выращивают в обычных условиях.

Составитель С. Куваева

Редактор О. Ьугир Техред И. ВересКорректор М. Шароши

Заказ 1833/2Тираж 630Подписное

ВЯИИПИ Государственно1-о комитета СССР по делам изобретений и открытий

1 13035, Д1осква, Ж -35, Раушская .наб., д. 4/5 Производстве 1но-1|о. 1Играфическое предприятие, г. Ужгород, у.п. Проектная, 4

роэнергии существенно повьипается. Эксплантаты инкубируют при 24±1°С. При температуре ниже 22 С развитие почек и побегов замедляется на 10-14 дней, а при тем- нературе ниже 6°С полностью прекращается. Температура выше 28°С ингибирует развитие почек н побегов,-а при 32-34°С эксплантаты погибают.

Сравнительная характеристика эффек- тивности размножения чая традиционным и предлагаемым способом (в расчете на 1000 саженцев) приведена в табл. 4.

т а Г) л и ц а l

Растения нор.мально растут и развиваются, свободны от фитопатогенной инфекции и морфологически не отличаются от исходного клона.

Формула изобретения

Способ размножения чая in vitro, включающий вычленение эксплантатов, их стери-.

лизацию и культивирование на питательной среде, отличающийся тем, что, с целью оздоровления исходного материала для размножения при сохранении его жизнеспособности стерилизацию эксплантатов осуплествляют FiyTCM их помещения в водный раствор, содержащий 1,5-2,0% перекиси водорода н 50-60% этанола, на 10-15 с, а затем в 0,05-0,20%-ный раствор диоцида на 5 10 мин.

Изобретение относится к сельскому хозяйству. Целью изобретения является оздоровление исходного материала для размножения при сохранении его жизнеспособности. Вычленяют эксплантанты и их в водный раствор, содержащий 1,5-2,0% переки-си водорода и 50-60% этанола на с. Затем эксплантанты помещают в 0,05-0,20%-нык водный раствор диоцида на 5-10 мин. Эксплантанты культивируют при люминесцентном освещении 3000 лк, 16-часовом фотопериоде и . 4 табл. со Ч СО