Способ получения аналога соматостатина Советский патент 1993 года по МПК C07K1/04 A61K37/02 

Изобретение относится к усовершен- стшваннному способу получения аналога со- мапгостатина - гептапептиду формулы I

,СН(СН3)-ОН : hD-Phe-ujs-Pht-D-Trp-bjs -Thi-Cys-NH-CH

СНг-ОН

который может найти применение в медицине.

Известен способ получения соединения I гутем фрагментной конденсации в растворе.

Недостатком известного способа является сложность процесса, необходимость выделения промежуточных продуктов на кг ждой стадии и невозможность его автома- тузации.

Цель изобретения -упрощение процессе получения соединения I.

Поставленная цель достигается описываемым способом, который заключается в том, что синтез соединения 1 осуществляют твердофазным методом путем ступенчатого наращивания пептидной цепи; начиная с С- концевого цистеина, связанного с полимерной матрицей формулы

(CHJK1

-снг-о-

где Р - аминометилированный полистирол, с использованием соответствующих N- флуоренилоксикарбониламинскиелот в присутствии конденсирующего агента с. последующей обработкой полученного защищенного ггептидилполимера формулы:

Fmoc-D-Phe-CystBu -Phe-D-Trp- -1у8(Вос)-Тпг-Суз(Ви1)-Х (|||),

S

со

&

где Fmoc - флуоренилоксикарбонил, Вос- трет.-бутилоксикарбонил, Ви -трет.-бутил, Xх- -мн-сн-сн(сн5)-о .

нг-о-сн ©..

деблокирующими агентами, окисляющим агентом и трифторуксусной кислотой в среде органического растворителя.

Стадия 1. Получение треонинол-ацеталь п-формилфеноксиуксусной кислоты (На).

К 105 г (1 мрль) L-треонинола в 200 мл метанола в атмосфере азота прикалывают при 0°С 200 мл метилового эфира трифторуксусной кислоты в 250 мл метанола. Реакционную смесь перемешивают 1,5 ч при ТО°С и упаривают при 40°С. Полученный белый кристаллический остаток растворяют в 200 мл этилацетата при 70°С и переосаждают добавлением 100 мл гексана. Осадок отфильтровывают при 0°С, промывают гек- саном и сушат при комнатной температуре, 50,3 г (0,25 моля) полученного продукта растворяют в атмосфере азота в 1250 мл тетра- гйдрофурана и к полученному раствору прикалывают последовательно 75 мл три- мётилхлорсилана и 70 мл триэтиламина в 250 мл тетрагидрофурана. Через 4 ч отфильтровывают образовавшийся осадок, фильтрат упаривают при 40°С, остаток растворяют в 1500. мл метиленхлорйда. Полу- ченный раствор порциями смешивают с 90,4 г п-формил-феноксиуксусной кислоты, а затем добавляют 9 мл триметилсилилово- го эфира трифторметансульфокислоты. Реакционную смесь перемешивают 24 ч, образовавшийся осадок отфильтровывают, тщательно промывают метиленхлоридом, фильтрат упаривают при 40°С, остаток очищают с помощью хроматографии на силика- геле с использованием в качестве элюента зтилацетата. Чистоту полученного соединения На определяют с помощью жидкостной хроматографии высокого давления.

Стадия 2. Получение соединения II,

17.2 г Аминометилированного поли- стирола (0,7 вес.%, 11, что соответствует 0,50 ммоль/г) суспендируют в 80 мл смеси метиленхлорида с диметилформамидом (4:1). К полученной суспензии последовательно добавляют 4,17 г На, 1,6 гоксибензот- риазола и 4 г дициклогексилкарбодиимида, перемешивают 2 ч при комнатной температуре, смолу отфильтровывают, промывают и суспендируют в 100 мл смеси тетрагидрофурана с метанолом (3:1). Полученную суспен- зию порциями смешивают с 10,4 г боргидрэта натрия, перемешивают 6 ч при комнатной температуре, отфильтровывают и промывают.

Стадия 3. Получение гептапептида 1.

Полученную на стадии 2 смолу дируют в смеси метиленхлорида с диметилформамидом и добавляют последовательно 5,57 г N-флуоренилоксикарбонил, 5-трет.- бутил-Ь-цистеина, 1,74 гоксибензотриазола и 3,6 г дициклогексилкарбодиимида. После отщепления флуоренилоксикарбонильной защитной группы обработкой смолы пиперидином (2x20 мин), затем последовательно присоединяют с помощью дициклогексилкарбодиимида с добавкой оксибензотриа- зола 1 -флуоренилоксикарбонил-1 -треонин, N-флуорёнилоксикарбонил, N -бензилокси- карбонил-1 -лизин, N-флуоренилоксикарбо- нил-0-триптофан, N-флуоренилоксикар- бонил-1 -фенилаланин, N-флуоренилоксикарбонил, 3-трет,-бутил-1 -цистеин, и N-флу- оренилоксикарбонил-0-фенилаланин. В итоге получают пептидил-полимер формулы III.

Полученный пептидилполимер суспендируют в 100 мл смеси трифторэтанола с метиленхлоридом (1:1) и смешивают с 50 мл трибутилфосфина. Суспензию перемешивают 70 часов при комнатной температуре, смолу отфильтровывают и смешивают со 100 мл смеси тетрагидрофурана и 1 М раствора ацетата аммония (1:1). К полученной смеси добавляют 1,1 мл 30%-ной перекиси водорода и перемешивают 24 ч при комнатной температуре. Затем смолу промывают и смешивают со смесью 20 мл трифторуксусной кислоты, 80 мл метиленхлорида, 10 мл воды и 2 мл тиоанизола и перемешивают 2 ч. Затем смолу отфильтровывают, промывают трифторуксусной кислотой и метиленхлоридом, к фильтрату добавляют 200 мл диэтилового эфира, выпавший осадок отфильтровывают, растворяют в водном буфере. Полученный раствор обессоливают обработкой Дуолитом и подвергают лио- фильной сушке.

В итоге получают 2,1 г (70%) соединения 1; а|Р -42° (С 0,€: 95% АсОН).

Как видно из приведенного примера, предлагаемый способ получения гептапептида I позволяет существенно упростить процесс получения целевого продукта за счет исключения стадий выделения и очистки промежуточных соединений и за счет простой процедуры выделения конечного продукта путем фильтрования и обессоли- вания. Кроме того, предлагаемый способ может быть автоматизирован при проведении процесса на пептидном синтезаторе.

Формула изобретения Способ получения аналога соматостати- на формулы

H-D-frne-Cas-Pbe-D-Trp -Lys ... CH(CH3)-OH -Thc-tijs-NH-CH

CHj-OH

путем наращивания пептидной цепи с ис- поЛьзованием N-защищенных аминокислот, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса, синтез ведут путем ступенчатого наращивания пептидной цепи, начиная с С-концевого цистеина, свя- зайного с полимерной матрицей формулы

HjN ИЙСШЬН 0®. -снг-сг

где Р - аминометилированный полистирол, с использованием соответствующих М-флу- оренилоксикарбон иламинокислот в

присутствии конденсирующего агента с последующей обработкой полученного защищенного пептидилполимера формулы

Fmoc-D-Phe-CysCBu j-Pne-D-Trp- LysCBocKThr-CystBuVx. где Fmoc - флуоренилоксикарбонил; Вое - трет.-бутилоксикарбонил; Виг-трет.-бутил;

х- -NH-cH-crtcHjVo

. Чснг-о-сн-О-®,

последовательно деблокирующими аген- 15 та ми, окисляющим агентом и трифторук- сусной кислотой в среде органического растворителя.