Штамм бактерий BacILLUS тнURINGIеNSIS для изготовления энтомопатогенного препарата Советский патент 1993 года по МПК A01N63/00 C12N1/20 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и представляет собой новый штамм бактерий, который может быть использован для производства препарата, применяемого для борьбы с кровососущими комарами и саранчовыми.

Для борьбы с вредителями сельского и левого хозяйства широко применяют штаммы Bacillus thuringiensls. Известны штаммы В. thuringlensis, обладающие лар- вицидными свойствами для личинок кровососущих комаров.

Однако среди большого числа вредных насекомых, поражаемых всеми известными штаммами В, thuringiensis нет представителей прямокрылых - саранчи, вредоносное значение которых нет необходимости доказывать..

Прототипом предлагаемого изобретения может служить штамм В. thuringiensis (Н-14) № 71, являющийся основой для изготовления препарата бактокулицида, эффективного против личинок кровососущих комаров.

Однако этот штамм действует только на одну группу насекомых.

Целью изобретения является штамм В. thuringiensis,обладающий высокой энтомо- цидной активностью по отношению к кровососущим комарам и к таким злостным вредителям сельского хозяйства как саранчовые.

Штамм Л.БК-145 выделен в 1988 г, из погибшей личинки комара Culex pipiens.

Штамм Bacillus thuringiensis ЛБК-145 депонирован в коллекции Центрального музея промышленных микроорганизмов ВНИИ генетика под номером В-5383 и характеризуется следующими морфологическими и физиолого-биохимическими свойствами.

Вегетативные клетки палочковидной формы, подвижные, одиночные или в цепочках, размером (3,0-5.5) х (0,8-1,2), перитри- хи, споры овальные, размером (1,2-1,7) х

о)

ч

4 Ы

х(0,7-1,1), спорангии не расширяют. При споруляции образуются параспоральные включения различной формы - ромбовидные, кубические, неправильные четырехгранники. Преобладают .кристаллы ромбовидной формы.

Хорошо растет на мясопептонном агаре (МПА), рыбопептонном агаре (РПА) и других питательных средах с добавлением пептона и дрожжевого или кукурузного экстракта.

| На РПА образует матово-белые плоские колонии с изрезанными краями пастообразной консистенции. На рыбопептонном агаре образует пленку. Факультативный анаэроб. На желточной среде, ломтиках картофеля и среде с добавлением БВК пигмент не образует. Растет на РПА с добавлением 7% NaCI. Оптимальная температура роста 28-30°С.

Штамм продуцирует каталазу, гидроли- зует казеин, крахмал, тирозин и разжижает желатину. Уреазоположительный. Образует ацетилметилкарбинол и лецитиназу. Усваивает эскулин, салицин, глюкозу с образованием кислоты без газа. Не образует кислоты и газа из мальтозы, целлобиозы, маннозы, лактозы, галактозы, рамнозы, сахарозы.

Сероводород и индол не образует.

Не агглютинируется типовыми антисыворотками 27 серотипов В. thufingiensis, полученными из Института Пастера (Париж).

Не чувствителен к пенициллину, пол- имиксину, чувствителен к эритромицину, стрептомицину, мономицину, неомицину, левомицитину..

Вызывает 100% гибель личинок комаров Aedes aegypti, Culex pipiens, Anopheles Stephens при использовании суспензии бактериальной культуры в концентрации 2,3 103 спор/мл. Вызывает 100% гибель саранчи Chorthippus apricarius, Chorthippus dichrous при использовании суспензии бактериальной культуры в концентрации 1.0 спор/мл.

По физиологическим свойствам отличается от В. thuringiensis H-14 тем, что усваивает салицин и эскулин, не образует пигмент. По инсектицидной активности отличается тем, что заявляемый штамм действует не только на личинок кровососущих комаров, но и на саранчовых.

Пример. Штамм В, thuringiensis ЛБК-145 культивировали на суэеде следующего состава: кормовые дрожжи 2 (мас.%); пептон 5; кукурузная мука 1; NaCI 0,5; К2НР040,1; вода до 1000 мл. Конечная реакция среды рН-7,2.

В качестве посевного материала использовали водную суспензию споровой 3- дневной культуры, которую вносили в 0,5 л колбы, содержащие 50 мл среды. Культивировали на круговой качалке при 220 об/мин и + 28°С в течение 28-30 ч. Титр спор, подсчитанный с помощью камеры Горяева. находился в пределах 2,3 10 спор/мл.

Отношение к источникам азота. Исполь- зуетаммонийные и нитратные формы азота. Нитраты восстанавливает. Усваивает азотные соединения, входящие в состав кукурузного экстракта, мясной воды, пептона.

Условия хранения - в виде лиофильно

высушенной культуры в запаянных ампулах.

Патогенность для личинок комаров изучалась на H-III стадии Culex pipiens, Aedes aeglpty, Anophetes Stephens. В 100 мл воды помещали 25 личинок и вносили суспензию клеток и спор испытуемого штамма. Результаты гибели отмечали через 24 и 48 ч.

Патогенность штамма для саранчи проверялась на насекомых IV стадии, помещенных в проволочные садки по 5 особей. Листья растений обрабатывали суспензией клеток и спор бактериальной культуры и

скармливали саранче. Затем обрабатывали, подкармливали необработанными растени-. ями. Наблюдения проводили в течение 7 суток..

Штамм, выбранный в качестве прототипа, эффективен только против личинок комаров.. Предлагаемый штамм вызывает гибель и личинок комаров и саранчи.

Использование: микробиологическая промышленность, производство энтомопатогенных препаратов для борьбы с кровососущими комарами и саранчовыми и касается нового штамма бактерий для производства вышеуказанных препаратов, Сущность изобретения: штамм бактерий Bacillus thuringiensis выделен из погибшей личинки комара Culex pipiens, депонирован в ВКМ генетики под № В-5383. Для изготовления препарата штамм выращивают на среде (мае. %): кормовые дрожжи 2; пептон 5; кукурузная мука 1; хлористый натрий 0,5; однозамещенный фосфорнокислый калий 0,1; вода до 100%, при 28°С в течение 28-30 ч, титр спор после культивирования 2,3-109 спор/мл. :