Способ изготовления аллергена ВВИ для диагностики лептоспироза свиней Советский патент 1993 года по МПК A61K39/00 A61K39/118 

Изобретение относится к области ветеринарной иммунологии, в частности к способам получения биологических препаратов и может быть использовано при изготовлении аллергенов для постановки внутрикож- ной аллергической реакции у животных с целью определения специфической гиперчувствительности замедленного типа к возбудителю лептоспироза.

Известен способ серологической диагностики лептоспироза у свиней с помощью реакции микроагглютинации (РМА).

Недостатком известного метода является то, что он трудоемок, требует постоянного поддержания в лаборатории живых лептоспирозных культур, что представляет определенную угрозу здоровью лабораторных специалистов.

Известен также способ изготовления лёптоспирозного аллергена озвучиванием культур яептоспир 3 серогрупп и его примеел

с

нением для диагностики лептоспироза свиней.

Цель изобретения - повышение качества аллергена.

Способ осуществляется следующим образом.

Лептоспиры серогрупп помона, тарасо- ви, гриппотифоза, иктерогеморрагия, кани- кола и сакскебинг каждый отдельно, выращивают в бутылях с водно-сывороточной питательной средой рН в пределах 7,2- 7,4. Инкубирование посевов проводится в термостате при 28-30°С в течение 7-10 дней. Вначале макроскопически в проходящем свете, а затем микроскопически отбирают бутыли с нужной концентрацией лептоспир (50-100 микробных тел в поле зрения микроскопа). Отобранные культуры разных серогрупп смешивают в одной емкости. Полученную смесь лептоспирозных культур подвергают воздействию ультразвукового диспергатора УЗДП-1 при частоте 20 кГц,

XI

О

о

ю о

мощности 100 Вт/см3 ультразвуковых волн в течение 20 мин. После озвучивания леп- тоспирозный дезинтеграт подвергают авто- клавированию при 1 атм в течение 20 мин, затем его центрифугируют при 25000 об/мин в течение 30 мин, надостадочную часть фильтруют через стерилизующий фильтр, разливают в ампулы, запаивают и вновь автоклавируют.

Контроль аллергена проводят на стерильность, безвредность, активность и специфичность. .-

Для проверки на стерильность берут 5 ампул аллергена и из них делают высевы на МПА, МПБ, МППБ, среду Сабуро. За посевами наблюдают 15 дней, все они должны быть стерильными. Безвредность аллергена проверяют на пяти белых мышах, им вводят внутрибрюшинно по 0,3 см3 аллергена. За животными наблюдают 15 дней, в течение которых они должны оставаться живыми.

Сенсибилизирующие и антигенные свойства изучают на подсвинках, серонега- тивных к возбудителю лептоспироза.

Аллерген вводят внутрикожно в дозе 0,2 см в область наружной поверхности ушной раковины, Учет реакции проводят через 24 ч. У всех животных местная реакция дол0

5

0

5

жна быть отрицательной. Через 30 дней после начала опытов у данных животных исследуют сыворотку крови на наличие антител к возбудителю лептоспироза в Р МА и одновременно повторно производят внутрикож- ное введение аллергена в дозе 0,2 см3. При исследований результаты должны быть отрицательные.

Специфичность препарата проверяют на неиммунных подсвинках., зараженных за три недели до опыта внутрибрюшинно вирулентными культурами лептоспир и имеющим в сыворотке крови по РМА антитела к возбудителям лептоспироза в титре 1:100 и выше..

Аллерген вводят подопытным животным внутрикожно в дозе 0,2 см3 в области наружной поверхности ушной раковины. Реакцию учитывают через 24 ч, у подопытных животных положительная реакция в месте введения аллергена сопровождается образованием гиперемированной отечности величиной 2,0x2,0 - 2,5x2,5 см2.

У здоровых свиней аллергическая реакция отсутствует или может сопровождаться образованием плотного узелка величиной 0,3x0,3 - 0,5x0,5 см2.

Использование: ветеринарная иммунология. Сущность изобретения: изготовление аллергена ВВИ для диагностики лептоспи- роза заключается в выращивании лептос- пир серогрупп L.Pomona, L.Tarassoyl, L.lcterohacmorrhagiae, L.Canlcola, L.Saxkoebing, LGrippotyphosa на водно-сывороточной питательной среде. Дезинтеграцию проводят при частоте 20 кГц, мощности 100 Вт в течение 20 мин, дезинтеграт авто- клавируют при 1 атм в течение 20 мин. Отделение аллергена осуществляют центрифугированием при 25000 об/мин.в течение 30 мин, полученную надостадочную жидкость фильтруют.

Формула изобретения Способ изготовления аллергена ВВИ для диагностики лептоспироза свиней, включающий выращивание культур лептос- пир, их дезинтеграцию ультразвуком, отделение полученного аллергена от микробной массы, от л и ч а ю щийся тем, что, с целью повышения качества аллергена, проводят выращивание лептоспир, серогрупп L.Pomona,L.Tarassovi,

L.lcterohacmorrhaglae, L.Canicola, LSaxkoebing, L.Grlppotyphosa на водно-сывороточной питательной среде, дезинтеграцию проводят при частоте 20 кГц, мощности 100 Вт в течение 20 мин, дезинтеграт автоклавируют при 1 атм в течение 20 мин, отделение аллергена осуществляют центрифугированием при 25000 об/мин в течение 30 мин, полученную надосадочную жидкость фильтруют.