Способ определения функционального состояния иммунокомпетентных клеток Советский патент 1993 года по МПК G01N33/533 

Изобретение относится к медицине, в частности, к иммунологии и аллергологии, может быть использовано в целях диагностики и контроля эффективности терапевтического воздействия при различных иммунопатологических состояниях.

Цель изобретения - упрощение способа при сокращении травматичности.

Указанная цель достигается тем, что у больного забирают кровь из пальца, инкубируют ее в иммунологичёских планшетах с неспецифическими митогенами или специфическими аллергенами, флюоресцентным зондом - раствором тетрациклина, переносят на предметные стекла, готовят мазки и подсчитывают число флюоресцирующих клеток.

Способ осуществляют.следующим образом.

Кровь пациента, взятую из пальца, вносят в лунки планшета по 0.025 мл. В лунки

вносят раствор митогёна или аллергена и инкубируют планшет при 37°С в течение 1 ч. Затем в лунки вносят раствор тетрациклина гидрохлорида в конечной концентрации 1,0-2, г/л и инкубируют при 37°С в течение 5-15 мин и переносят суспензию клеток из лунок на предметные стекла..

Проводят учет результатов, определяя спонтанную, митоген- и аллергенезависи- мую флюоресцентную клетку с определением индекса стимуляции.

П р и м е р. У больного Н. (исследование N; 88/431) отбираем из пальца 0,1 мл крови в капилляр; предварительно обработанный раствором гепарина в обычной концентрации. Кровь вносим по 0,025 мл в лунки планшета для иммунологичёских исследований. Вносим в контрольную лунку 0,025 мл забу- ференного раствора Хенкса) рН 7,4 (в опытную соответственно 0,025 мл раствора ФГА в концентрации 20 мкг/мл, а также 0.025 мл

00

о

СП

со о

раствора кортизола (II опыт) и 0,025 мл раствора ст афилоантигена (III опыт). Планшет инкубируем в течение 60 мин при 37°С, после чего вносим в опытные и контрольные лунки по 0,02 мл раствора тетрациклина концентрации 5, г/л. Планшет инкубируем 10 мин. при 37°С, после чего каплю суспензии переносим на предметное стекло, приготавливаем мазки. Учет результатов проводим, на флюоресцентном микроскопе Л ЮМАМ P-5 или аналогичном с использованием длины волны возбуждающего света 380 нм (фильтры ФС-1-2, БС-8-3, СЭЗ-24.4) и света флюоресценции 540 нм (запирающие фильтры ЖС-18, ЖЗС-19). Определяем число флюоресцирующих зеленым светом лейкоцитов в опытных пробах, по отношению к контрольной и вычисляем индексы стимуляции - контроль 3%, ФГА - 23,5%, кортизол - 2,6%, стафилоантиген - 14,1%, соответственно индексы стимуляции-7,83, 0,87,4,70.. --.. Способ был применен при исследовании больных, подвергшихся воздействию

0

5

0

ионизирующей радиации при аварии на Чернобыльской АЭС (таблица).

Обнаруженная корреляция способа реакцией бласт-трансформации с +3Н-тими- диновой меткой и реакцией торможения миграции лейкоцитов позволяет рекомендовать способ для ранней оценки иммунного статуса при различных нарушениях иммунитета./

Формула изобретения Способ определения функционального состояния иммунокомпетентиых клеток путем инкубации крови больного с неспецифическими митогенами или специфическими аллергенами, последующей регистрации результатов и подсчета индекса стимуляции по отношению к спонтанному уровню активности, отличающийся тем, что, с целью упрощения и снижения травматичности способа, перед регистрацией в среду вносят Тетрациклин гидрохлорида в концентрации (1,0-2,0) г/л и регистрируют число флуоресцирующих лейкоцитов.

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии и аллергологии, и может быть использовано при контроле эффективности терапии при различных иммунных нарушениях. Цель изобретения - упрощение и снижение травматичности способа. Цель достигается тем, что пробу цельной крови пациента инкубируют в им-% мунологических планшетах с неспецифиче- екими митогенами или специфическими аллергенами, добавляют раствор тетрациклин гидрохлорида. После инкубации переносят суспензию клеток из лунок планшета на предметные стекла и подсчитывают в флюоресцентном микроскопе число флуоресцирующих клеток по отношению к контрольным пробам. 1 табл.

Функциональное состояние иммунокомпетентных клеток у больных, пострадавших

при аварии Чернобыльской АЭС .

г - коэффициент корреляции по отношению к предлагаемому способу.

Продолжение таблицы