Способ подготовки парафиновых срезов для гистологического выявления клеток крови и соединительной ткани Советский патент 1993 года по МПК G01N33/48 

в) объемные соотношения стандартного красителя и ацетатного буфера, используемых для приготовления рабочего раствора красителя;

г) объемные соотношения ацетата натрия и уксусной кислоты в буферной смеси.

Ни стандартный краситель Мая-Грюн- вальда, ни ацетатный буфер в предлагаемых соотношениях никогда и ни.кем не применялись для выявления клеток крови и соединительной ткани в парафиновых срезах, поэтому предлагаемый способ обладает новизной.

Сущность предлагаемого способа отражена в схеме гистологической отработки,

1). Депарафинирование и проведение по батарее спиртов от 100°С до 70° проводится точно так же, как в известном способе,

2). Дистиллированная.вода не менее 2 минут.

3). Окраска рабочим раствором красителя от 30 мин до 1,5 ч в термостате при температуре 45-55°С.

4), Дифференцировка в 96° спирте от 2 до 5 мин,

5). Обезвоживание в ацетоне 1,5-2 мин.

6), Просветление в двух порциях ксилола 3-5 мин в каждой,

7). Заключение в полистирол.

Составы различных вариантов рабочих растворов красителей приведены в таблице.

Для работы пригоден любой вариант.

Проведенные испытания на парафиновых срезах красного костного мозга кролика показали, что очень четко выявляются псев- доэозинофильные и эозинофильные грану- лоциты на различных стадиях созревания, лимфоциты, плазматические клетки, фиб- робласты, макрофаги, эндотелиальные клетки, гладкомышечные и жировые клетки, базофильные, полихроматофильные и окси- фильные нормоциты (нормобласты). Колла- геновые волокна и эритроциты окрашивались в розовый цвет.

Проведенными испытаниями было установлено, что красящие свойства рабочих красителей № 2 и № 4 с различной молярной концентрацией ацетатного буфера (0,1 Ми 0,05 М) одинаковы, поэтому они одинаково пригодны. Изменение соотношения ацетата натрия и уксусной кислоты от 30:1 до 10:1 (№2,5, 6 и 7, 8,9),не приводило к существенным изменениям качества окраски препаратов, значит все эти варианты применимы. Испытания рабочих растворов красителей № 1, 2, 3 с различной концентрацией красителя Мая-Грюнвальда показали, что качество окраски одинаково, однако оптимальное время окраски отличается: оно короче у раствора № 3 и продолжительнее у раствора № 1, однако, как правило, у всех трех растворов колеблется в пределах 0,5-1,5 ч, что гораздо меньше, чем в известном способе (12-24 ч).

По сравнению с прототипом, заявляемый способ имеет следующие преимущества: обеспечение надежности и воспроизводимости результатов, повышение устойчивости рабочего раствора красителя и многократного его использования и ускорение процесса окраски. Использование рабочего красителя, содержащего вод- но-метанольную смесь с наличием ацетатного буфера обеспечивает резкое повышение устойчивости рабочего раствора красителя после приготовления, обеспечивающее возможность его многократного использования в течение 2-4 недель. В прототипе краситель используется лишь однократно, причем нередко хлопьевидный осадок образуется в момент его приготовления, что требует повторного его приготовления. В отличие от капризного по мнению гистологов прототипа, предлагаемый способ надежный, дает воспроизводимые результаты и не требует чрезвычайно чистой

посуды из стекла особого качества. Время окраски в предлагаемом способе в 8-24 раза меньше по сравнению с прототипом, Формула изобретения Способ подготовки парафиновых срезов для гистологического выявления клеток крови и соединительной ткани, включающий его депарафинирование, проведение по батарее спиртов от 100°С до 70°С и затем в воде, окраску смесью растворов основного и кислого красителей, дифференцировку в 96° спирте до появления красной окраски эритроцитов с последующим обезвоживанием, просветлением и заключением в бальзам или полистирол, о тличающийся

тем, что, с целью повышения экономичности и ускорения способа, окраску среза проводят смесью стандартного раствора красителя Мая-Грюнвэльда и ацетатного буфера при следующем соотношении компонентов,

об,%: .

Стандартный раствор красителя Мая-Грюнвальда 10-25 Ацетатный буфер75-90 5 при этом ацетатный буфер содержит 0,05- 0,1 М раствор ацетата натрия и 0,05-0,1 М раствор уксусной кислоты, взятых в соотношении 10:1-30:1.