ГИДРОХЛОРИД-8-АМИНО-3-(2-МОРФОЛИНОЭТИЛТИО)-1,2,4-ТРИАЗИНО [5,6-B] ИНДОЛА, ЗАЩИЩАЮЩИЙ ПЕЧЕНЬ ОТ ОТРАВЛЕНИЯ ЧЕТЫРЕХХЛОРИСТЫМ УГЛЕРОДОМ И УСКОРЯЮЩИЙ ПРОЦЕССЫ ВОССТАНОВЛЕНИЯ ПОСЛЕ ФИЗИЧЕСКИХ НАГРУЗОК Советский патент 1996 года по МПК C07D487/04 A61K31/33 C07D487/04 C07D253/07 C07D295/03 C07D207/30 

Изобретение относится к новым производным 1,2,4-триазино[5,6-b]индола, конкретно к новому соединению гидрохлориду 8-амино-3-(2-морфолиноэтилтио-(1,2,4-триазино[5,6-b]индола формулы I

защищающему печень от отравления четыреххлористым углеродом и ускоряющему процессы восстановления после физических нагрузок.

Целью изобретения является новое производное триазиноиндола, обладающее по сравнению со структурным аналогом более высокой способностью защищать печень от отравления четыреххлористым углеродом в плане нормализации процесса билирубинообразования, обладающее более высокой активностью в качестве средства, ускоряющего восстановление физической выносливости в ранние сроки после нагрузки по сравнению со структурным аналогом и, кроме того, обладающие одновременно обоими указанными видами активности.

П р и м е р. Смешивают 92 г (0,3915 моль) 3-тиосемикарбазона 5-аминоизатина с 718 мл 1 н. раствора едкого натра и кипятят 3,5 ч. Мелкий оранжевый осадок, который образуется в незначительном количестве к концу выдержки, отфильтровывают в горячем состоянии и отбрасывают. К фильтрату при 50^oC прибавляют 2,5 н. соляную кислоту до рН 6 (≈ 47 мл). При этом вследствие побочных реакций обнаруживается слабое выделение сероводорода. Оставляют на 15 ч, выпавший осадок отфильтровывают, промывают кипящей водой (2х50 мл) и сушат при 100^oC. Получают 8-амино-2,3-дигидро-1,2,4-триазино[5,6-b]индол-3-тион в виде мелких коричневых кристаллов, т.пл. > 300^oC, выход 72,5 г (85,4%). Вещество трудно растворяется в большинстве органических растворителей, не растворяется при кипении в бутаноле-1, ледяной уксусной кислоте, диметилформамиде, диметилацетамиде и формамиде. При нагревании с разбавленной соляной кислотой (1:1) изменяет окраску до желтой.

УФ-спектр в спирте, λ_макс, нм (lg ε): 300 (4,44), 316 (4,41). Для метоксианалога 298 (4,45), 312 (4,50).

К раствору 6,52 г (30 ммоль) полученного тиона в 66 мл 1 н. раствора едкого натра при интенсивном перемешивании постепенно прибавляют раствор 8,69 г (31,6 ммоль) гидробромида 2-морфолиноэтилбромида в 27 мл воды, встряхивают 3,5 ч при комнатной температуре и оставляют на ночь в холодильнике. По окончании добавления алкилбромида уже через несколько секунд начинают выделяться мелкие кристаллы продукта реакции, окраска суспензии из темно-коричневой переходит в светлую коричнево-красную. Осадок отфильтровывают, промывают ледяной водой (3х5 мл) и сушат в вакууме над фосфорным ангидридом. Получают основание 8-амино-3-(2-морфолиноэтилтио)-1,2,4-триазино[5,6-b] индола, выход 7,83 г (79% ), темно-красные кристаллы. В отличие от исходного тиона, вещество легко растворяется на холоду в 0,1 н. соляной кислоте. Кроме того, оно легко растворяется при кипении в ледяной уксусной кислоте, кристаллизуется из смеси диметилформамида с н-бутиловым спиртом, 2:1. Для превращения в гидрохлорид полученное основание (3,9 г, 11 ммоль) смешивают с 20 мл изопропилового спирта, нагревают до кипения, прибавляют 1,12 мл конц. HCl и продолжают нагревание 2 мин. После остывания до комнатной температуры осадок отфильтровывают, при этом комки вещества растирают в ступке для завершения кристаллизации. Осадок промывают изопропиловым спиртом (2х2 мл) и эфиром (4х8 мл), сушат при 80^oC. Получают новое соединение в виде красно-коричневых кристаллов, т.пл. 165^oC со вспениванием. Выход 4,05 г (93,8% по отношению к основанию).

Вещество однородно по данным ТСХ на силуфоле. Его строение подтверждено данными элементного анализа, потенциометрическим титрованием щелочью в 70% водном спирте, а также его УФ-спектром. Полученное соединение растворимо в воде.

УФ-спектр в спирте, l_макс, нм (lg ε): 268 (4,19), 302 (4,34), 340 пл (3,87).

Найдено, C 49,15; H 5,09; N 23,04; S 8,78.

C₁₅H₁₈N₆OS•HCl.

Вычислено, C 49,11; H 5,22; N 22,91; S 8,74.

Исследование защитного действия соединения I при отравлении четыреххлористым углеродом.

Опыты выполнены на крысах-самцах массой 170-200 г. Четыреххлористый углерод вводили подкожно ежедневно в 50% масляном растворе в течение 4 дней подряд в количестве 0,4 мл на 100 г массы. Одновременно с CCl₄ вводили соединение 1 в дозе 50 мг/кг. Эффект нового соединения сравнивали с известными гепатопротекторами рибоксином-оротатом калия в дозах по 100 мг/кг и аналогом соединением II.

Известно, что клиническая картина отравления CCl₄ развивается медленно. Основные симптомы тяжелой интоксикации проявляются к концу 2 сут и через 4-7 сут приводят к летальному исходу. У всех больных наблюдается тяжелое поражение печени вплоть до жирового перерождения органа. Оценку защитного действия соединения I проводили, исследуя активность специфической для печени аланиновой трансферазы (АЛТ), билирубина и прироста массы тела. Изменение активности АЛТ, а также билирубина в сыворотке крови свидетельствует о повреждающем действии CCl₄ на клеточные мембраны и о нарушении процесса билирубинообразования. Динамика массы тела свидетельствует о более благоприятном течении обменных процессов в организме.

В табл.1 приведены изменения активности АЛТ, билирубина и прирост массы тела на седьмой день эксперимента.

Как видно из табл.1 новое соединение в 1,2 раза уменьшает уровень аланиновой трансферазы, в 3 раза уменьшает содержание билирубина, в 1,33 раза увеличивает прирост массы тела. Таким образом, оно активно по всем показателям, причем по влиянию на билирубинообразование превосходит аналог.

Исследование влияния заявляемого соединения на физическую работоспособность в восстановительном периоде после истощающих нагрузок.

Опыты выполняли на белых крысах-самцах массой 140-180 г. Крысы совершали бег на третбане "до отказа", после чего им вводили изучаемое вещество в дозе 40 мг/кг массы внутрибрюшинно однократно. В опыт брали 3 группы животных по 8 в каждой группе.

1 группа вводили соединение I.

2 группа вводили известный аналог соединение II.

3 группа вводили физиологический раствор (контроль).

Все группы животных повторно совершали бег на третбане "до отказа" через 1, 2, 24 и 48 ч после исходного пробега, причем каждый временной интервал тестировали на отдельной группе животных.

Длительность повторного бега выражалась в от исходного бега.

Результаты опытов представлены в табл.2.

Таким образом, соединение I превосходит структурный аналог в качестве средства, ускоряющего восстановление физической работоспособности.

Острую токсичность нового соединения определяли на мышах при внутрибрюшинном введении. Величина ЛД₅₀ равна 2240 мг/кг, т.е. оно обладает достаточной фармакологической широтой.

Сущность изобретения: продукт гидрохлорид 8-амино-3-(2-морфолиноэтилтио)-1,2,4-триазино[5,6-b]индола формулы

БФ: C₁₅H₁₈N₆₀S•HCl, выход: 73%, т.пл. 165^oC. Реагент 1:3-тиосемикарбазон 5-аминоизатина. Реагент 2: раствор едкого натра. Реагент 3: гидробромид 2-морфолиноэтилбромид. Реагент 4: конц. HCl. 2 табл.

Гидрохлорид 8-амино-З-(2-морфолиноэтилтио)-1,2,4-триазино(5,6-b)индола

защищающий печень от отравления четыреххлористым углеродом и ускоряющий процессы восстановления после физических нагрузок.