ДИГИДРОХЛОРИД МОНОГИДРАТ 8-БРОМ-3-(2-МОРФОЛИНОЭТИЛТИО)-1,2,4-ТРИАЗИНО /5,6-B/ ИНДОЛА, ОБЛАДАЮЩИЙ СТРЕСС-ПРОТЕКТИВНОЙ АКТИВНОСТЬЮ И ПОВЫШАЮЩИЙ ФИЗИЧЕСКУЮ ВЫНОСЛИВОСТЬ Советский патент 1996 года по МПК C07D295/12 C07D487/04 A61K31/53 A61K31/535 

Изобретение относится к области органической химии, а именно к новому биологически активному соединению дигидрохлориду моногидрату 8-бром-3-(2-морфолиноэтилтио)-1,2,4-триазино[5,6-b] индола, обладающему стресс-протективной активностью и повышающему физическую выносливость, которое может найти применение в медицине.

Целью изобретения является усиление стресс-протективной активности в ряду производных 1,2,4-триазино[5,6-b] индола.

П р и м е р. Получение дигидрохлорида моногидрата 8-бром-3-(морфолинэтилтио)-1,2,4-триазино [5,6-b] индола (соединение 1).

К раствору 30 г (0,108 моль) 8-бром-3-меркапто-1,2,4-триазино [5,6-b] индола в 255 мл 1 н. водного раствора едкого натра прибавляют раствор 30,85 г (0,112 моль) гидробромида 2-морфолиноэтилбромида в 85 мл воды. При том в первый момент выпадают красно-оранжевые хлопья, но уже через 2 мин они исчезают и выделяются мелкие желтые кристаллы продукта реакции. Перемешивают 20 мин и оставляют на ночь. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают водой (2х20 мл) и сушат при 20^oС под вакуумом над фосфорным ангидридом. Получают сырой продукт реакции в виде светло-желтых кристаллов, выход 33-38 г (76,7-88,3% ) температура плавления 250^oС. Полученное основание при кипении не растворяется в этиловом спирте, трудно растворяется в бутиловом спирте, легко растворяется в этилцеллозольве, кристаллизуется из большого объема бутилового спирта. Трудно растворяется на холоду в циклогексиловом спирте, очень легко растворяется в нем при нагревании.

32 г измельченного в порошок основания растворяют при кипении в 714 мл разбавленной соляной кислоты (конец. HCl-вода 1: 2 по объему) и быстро фильтруют в горячем состоянии через фильтр, состоящий из двух слоев фильтровальной бумаги, чередующейся с двумя слоями стеклоткани. Фильтрат после остывания превращается в густую кашу золотисто-желтых ватообразных кристаллов. Фильтруют, осадок промывают 2 н. соляной кислотой (2х10 мл), абсолютным этиловым спиртом (2х10 мл) и эфиром, сушат в вакууме при 20^oС над фосфорным ангидридом. Получают дигидрохлорид 8-бром-3-(2-морфолиноэтилтио)-1,2,4-триазино [5,6-b] индола, выход 26 г (66,7% ), ярко-желтые легкие хлопья, температура плавления 278-279^oС.

Вещество легко растворяется в воде. Оно однородно по данным ТСХ. Условия ТСХ: растворитель для нанесения вода (сушат 5 мин при 110^oС), адсорбент силуфол, подвижный растворитель хлороформ-спирт-концентрированный водный аммиак, 100:5:1 по объему. При просматривании в УФ свете на хроматограмме обнаруживается единственное темно-синее пятно, Rf 0,37.

Строение вещества подтверждается данными элементного анализа, УФ спектров и потенциометрического титрования щелочью.

Найдено, C 36,71, 36,75; H 4,65, 4,47; Br 16,47, 16,35; Cl 14,69, 14,49; N 14,17, 14,38; S 6,50, 6,54; M 489 (потенциометрическое титрование).

C₁₅H₂₀BrCl₂N₅O₂.

Вычислено, C 37,12; H 4,15; Br 16,47; Cl 14,61; N 14,43; S 6,60; M 485,2.

УФ спектр в воде, λ_макс, м(lg E): 203(4,342), 22,5(4,321), 272(4,518), 342(4,067). Спектр снят на приборе СФ-20. Положение двух длинноволновых полос поглощения характерно для 3-S-аминоалкильных производных (1,2,4-триазино[5,6-b] индола.

Исследование стресс-протективной активности.

В качестве модели длительного стресса используют методику лишения мышей сна, пищи и воды в медленно вращающемся барабане (0,2 км/ч). Опыты выполняют на 50 мышах-самцах. Одновременно исследуют две группы животных. После суточного пребывания в барабане животным дают суточный отдых, пищу и воду, после чего их снова помещают в барабан. Указанная последовательность сохраняется до гибели большинства животных контрольной группы. Исследуемый препарат (предлагаемое соединение) вводят на протяжении всего эксперимента два раза в сутки, подкожно, в дозе 10 мг/кг. Контрольные животные получают в те же сроки физиологический раствор. Статическая обработка результатов производится по точному критерию Фишера.

Результаты испытаний представлены в табл. 1.

Полученные данные свидетельствуют, что профилактическое введение соединения 1 в условиях длительного стресса в 4 раза увеличивает выживаемость животных в этих условиях.

Исследование влияния соединения I на физическую выносливость.

Первую серию экспериментов выполняют на мышах. Предельную физическую выносливость определяют по тесту плавания животных с грузом, равным 5% от массы тела. Температура воды 25-25^oС. Препарат (соединение I) вводят внутрибрюшинно, однократно за 1 ч до плавания в дозах 20,40,80 мг/кг. Результаты (% ) изменения работоспособности по сравнению с контрольной группой, данные которой принимают за 100% представлены в табл.2.

Полученные данные свидетельствуют, что соединение I существенно повышает физическую выносливость во всех исследованных дозах.

Вторая серия экспериментов проводится на крысах, выполняющих бег на третбане "до отказа". После физической нагрузки животные в течение трех суток отдыхают, затем им вводят препарат (20 мг на 1 кг массы, однократно) и они вновь совершают бег на третбане через 1, 2, 24 и 48 ч после его введения. Контрольные животные получают физиологический раствор. Оценивают продолжительность бега до и на фоне введения препаратов (табл.3).

Из представленных данных следует, что соединение I достоверно увеличивает длительность бега на третбане "до отказа" при предварительном введении.

Определение острой токсичности.

Острая токсичность вещества определялась на самцах белых мышей. ЛД₅₀ при внутрибрюшинном введении 1007 мг/кг.

Дигидрохлорид моногидрат 8-бром-3-(2-морфолиноэтилтио)-1,2,4-триазино/5,6 b/индола формулы I

обладающий стресс-протективной активностью и повышающий физическую выносливость. 3 табл.

Дигидрохлорид моногидрат 8-бром-3-(2-морфолиноэтилтио)-1,2,4-триазино(5,6-b)индола формулы

обладающий стресс-протективной активностью и повышающий физическую выносливость.