Способ определения периодов гипертонической болезни Советский патент 1993 года по МПК G01N33/483 A61B10/00 

Изобретение относится к медицине, в частности к кардиологии, преимущественной областью его использования является диагностика различных периодов клинического течения гипертонической болезни (ГБ) - гипертонического криза и внекризового периода.

Цель изобретения - упрощение способа диагностики различных клинических периодов течения ГБ за счет сокращения трудоемких операций путем определения у больных ГБ активности каталазы и супероксиддисмутазы (СОД) эритроцитов.

Способ осуществляется следующим образом.

Из локтевой вены больного в пробирку с раствором цитрата натрия отбирают 5 мл крови, центрифугируют 10 мин (4000 об/мин) и затем отделяют эритромассу от плазмы. Эритромассу дважды промывают физиологическим раствором (перемешиванием и центрифугированием по 5, мин при 2000 об/мин). После второго центрифугирования надосадок сливается. Для определения активности каталазы 0,1 мл промытой эритромассы гемолизируют дистиллированной водой и получают гемолизат разведения

1:2000.0,1 мл полученного гемолизата переносится в пробирку, доводится 0,05 М Трис- HCI буфером рН 7,4 до 1 мл, прибавляется 2 мл 0,03% Н202 и инкубируется в термостате при 25°С в течение 10 мин. После инкубации вносится 2 мл 4% раствора молибдата аммония. Полученную пробу спектрофотометри- руют при длине волны 410 нм. Экстинцию Опытной пробы сравнивают с экстинцией контрольной пробы, которую получают таким же образом, только 0,1 мл гемолизата добавляется в пробирку после инкубации в термостате, непосредственно перед добавлением молибдата аммония. По разнице между экстинциями контрольной и опытной проб судят о величине катализной активности. Расчеты производят, исходя из коэффициента миллимолярнойзкстинции перекиси водорода, и результаты выражают в мМ инактивированной Н202 1 л эритромассы за 1 секунду. Для определения активности СОД брали 0,1 мл отмытой эритромассы, как это рекомендовано Е.Ё Дубининой и соавт, при подготовке эритроцитов для исследования СОД в системе феназинметасульфат- НАД н-нитросиний тетразолий (Лаб. дело, 1983, 10, 30-33). Эти 0,1 мл отмытой эритро в

Ё

С

СО

о

со

00 Os sO

.массы гемолизируют и разбавляют 0,9 мл 5 мМ трис-HCI буфера (рН 7,4), переносят в центрифужную пробирку, добавляют 0,25 мл этанола, 0,15 мл хлороформа и 0,6 г кристаллического КН2Р04. Все это перемешивается стеклянной палочкой в течении 15 мин, выдерживается в холодильнике при 4°С 30 мин и центрифугируется при 5000 об/мин 15 мин. Затем отбирается надоса- дочная жидкость. В пробирку последовательно вносят 1,7 мл фосфатного буфера (0,15 М, рН 7,8), 2 мл раствора нитросинего тетразолия (0,01 г на 100 мл 0,15 М фосфатного буфера, рН 7,8), 0,5 мл раствора фена- зинметасульфата (0,003 г на 150 мл 0,15 М фосфатного буфера, рН 7,8). 0,1 мл надоса- дочной жидкости И 0,9 мл раствора НАД Н (0,01 г на 24 мл 0,15 М фосфатного буфера, рН 7,8). Содержимое перемешивали стеклянной палочкой, и пробирку помещали в темноту и термостатирвали при 25°С в течении 10 мин. После чего, сразу на фотоэлек- троколориметре при длине волны 450 нм определяли величину зкстинции и сравнивали с экстинцией контрольной пробы, которую получали таким же образом, только в пробирку не вносили надосадочную жидкость. О величине активности СОД судят по разнице экстинций контрольной и опытной проб и выражают в процентах (от экстинций контрольной пробы).

При рассмотрении изучаемых показателей в исследуемых группах было выявлено, что у 90% больных 1Б во время криза активность каталазы составила от 165 мМ Н202/л.с до 235 мМ Н202/Л.С, тогда как во внекризовом периоде у 90% больных этот показатель находился в пределах 240-314 мМН202/л.с. Активность СОД от 32% до 44% отмечена у 90,5% больных ГБ во время криза, а от 47- до 64% - у 90,5% больных во внекризовом периоде.

П р и м е р 1. Больная Г,, 50 лет, была госпитализирована в терапевтическое отделение предварительным диагнозом: гипертоническая болезнь II стадии.

При исследовании антиоксидантных ферментов обнаружено: активность каталазы составила 165 мМ Н202/л«с, активность СОД - 34%. Был сдален вывод о наличии у больной гипертонического криза.

В дальнейшем комплексное клинико- лабораторное исследование и наблюдение за течением болезни подтвердили предположение о наличии у больной гипертонического криза.

П. р и м ё р 2. Больной М., 47 лет, был впервые госпитализирован в терапевтическое отделение по поводу повышения АД с

диагнозом: гипертоническая болезнь II стадии.

При исследовании антиоксидантных ферментов обнаружено: активность каталазы составила 183 мМ НзОа/л.с., активность СОД-32%, На основании этих данных было высказано мнение о наличии у больного гипертонического криза.

Детальное изучение анамнеза, клиникоО лабораторные данные, наблюдение за динамикой процесса и эффективностью терапии подтвердили данное предположение.

П р и м е р 3. Больная К,, 48 лет, поступила в терапевтическое отделение в плано5 вом порядке при отсутствии значительных жалоб с умеренно повышенным АД (170- 175/100-105 мм рт.ст.). Диагноз при поступлении: гипертоническая болезнь Н.стэдии. При исследовании антиоксидантных

0 ферментов обнаружено: активность каталазы составила 221 мМ Н202/л.с, активность СОД - 41 %. На основании этих данных был сделан вывод о наличии у больной гипертонического криза.

5 Тщательное изучение анамнеза, эффективность терапии и динамика реабилитации больной подтвердили наличие у нее гипертонического криза.

П р и м е р 4. Больная Л., 43 года, посту0 пила в терапевтическое отделение по пово-- ду повышенного АД. Диагноз при поступлении: гипертоническая болезнь II стадии, криз.

При исследовании антиоксидантных

5 ферментов обнаружено: активность каталазы составила 235 мМ Н202/л.с., активность СОД - 40%. Полученные данные позволили сделать вывод о наличии у больной гипертонического криза.

0 В дальнейшем данный клинический диагноз изменен не был.

П р и м е р 5. Больной С., 50 fleTk был впервые госпитализирован в терапевтическое отделение по поводу повышения АД.

5 Диагноз при поступлении: гипертоническая болезнь II стадии, криз.

При исследовании антиоксидантных ферментов обнаружено: активность каталазы составила 230 мМ НаОз/л с, активность

0 4%. Был сделан вывод 6 наличии у больного гипертонического криза.

Дополнительное изучение анамнеза, наблюдение за динамикой процесса, эффективностью терапии и реабилитации под5 твердили первоначальный диагноз.

Примерб. Больной В., 50 лет, поступил в терапевтическое отделение с резким повышением АД на фоне эмоционального стресса. Диагноз при поступлении: гипертоническая болезнь II стадии, криз.

При исследовании антиоксидантных ферментов обнаружено: активность катала- зы составила 240 мМ Н202/л.с., активность СОД - 47%. Н А основании этих данных был сделан вывод об отсутствии у больного гипертонического криза.

В дальнейшем динамика состояния больного, быстрая нормализация АД при поддерживающей терапии позволили отказаться от предварительного диагноза наличия у больного гипертонического криза.

Пример. Больная Ф„ 45 лет, обследована амбулаторно по поводу повышения АД. Диагноз: гипертоническая болезнь II стадии,

При исследовании антиоксидантных ферментов обнаружено: активность катэла- зы составила 259 мМ с, активность СОД - 52 %. Был сделан вывод об отсутствии у ббльной гипертонического криза.

В дальнейшем при динамическом наблюдении данное предположение было подтверждено.

П р и м е р 8. Больной С., 53 гида, поступил в терапевтическое отделение с диагнозом: гипертоническая болезнь II стадии, криз.

При исследовании антиоксидантных ферментов обнаружено: активность катала- зы составила 314 мМ Н202/Л с, активность СОД - 60%. На основании этих данных было высказано мнение об отсутствии у больного .гипертонического криза.

В, дальнейшем, наблюдение за больным, быстрая нормализация его состояния с переходом на поддерживающую гипотен- зивную терапию, а также выписка больного на 8-й день подтвердили предположение об отсутствии гипертонического криза у данного больного.

П р и м е р 9. Больная Н., 40 лет, находится на диспансерном учете по поводу гипертонической болезни II стадии в течении 4 лет. При профилактическом осмотре обследована.

Активность каталазы составила 297 мМ Н202/Л с, активность СОД - 64%.

Отсутствие гипертонического криза и стабильное течение гипертонической болезни было подтвержено.

П р и м е р 10. У служащей Е,. 37 лет, при проведении профосмотра какой-либо патологии обнаружено не было.

Исследование антиоксидантных ферментов показало: активность каталазы составила 322 мМ Н202/Л с, активность СОД - 67%.

Таким образом было подтверждено, что обследуемая практически здорова.

Предлагаемый способ диагностики различных периодов клинического течения ГБ позволяет сократить (по сравнению с прототипом) время проведения методики в 11,3 раза при определении активности каталэзы и - В 3,8 раза при определении активности

СОД. Значительно сокращается количество трудоемких операций, таких как получение мембран, экстрагирование липидов. Кроме того, устраняется влияние токсичных веществ (гептан, серная кислота по Савалю) и

необходимость дополнительных рассчетов (вычисление ди агностического коэффициента). Разработанный способ является простым, надежным и доступным для обычной клиникобирхимической лаборатории, при

этом точность диагностики различных периодов клинического течения ГБ в сравнении с известным способом не снижается.

30

Формула изобретения

Способ определения периодов гипертонической болезни, включающий отбор венозной крови, получение эритроцитов и последующий их бихимический анализ, о тличающийся тем, что, с целью упрощения способа за счет сокращения трудоемких операций,проводят гемолиз эритроцитов, в гемолизате определяют активность каталазы или супероксиддисмутазы и при активности каталазы 165-235 ммолей Н202/Л хс или активности супероксиддисмутэзы 32 - 44% ступени ингибирования восстановления нитросинего тетразолиевого определяют наличие гипертонического криза а при активности каталазы 240-313 ммолей Н202/Л- с или активности супероксиддисмутазы 47- 64% определяют внекризовый период гипертонической болезни.

Использование:.медицина, диагностика периодов (криз, вне криза) течения гипертонической болезни (ГБ). Сущность изобретения: измеряют величину активности каталазы или супероксиддисмутазы эритроцитов. Способ позволяет упростить, ускорить и обезопасить процесс диагностики различных периодов течения ГБ, не снижая точность и надежность диагностики-.