Способ получения S(+) анантиомера 2-арилалкановой кислоты Советский патент 1993 года по МПК C12P7/40 C12P41/00 C12P7/40 C12R1/13 

Изобретение относится к биотехнологии и касается способа получения S/+/ активных 2-арилалкановых кислот общей формулы:

К

;АГ-СН-СООН (о

путем анантиоселективного гидролиза соответствующих рацемических амидов.

В общей формуле (I) Аг означает фенил, возможно замещенный атом талона, a R означает этил, пропил или изопропил-ради- кал.

Цель изобретения - повышение оптической чистоты целевого продукта и выхода анантиомера.

Сущность изобретения заключается в том. что рацемический 2-(4-хлорфенил)-3- метилбутирамид/гидролизуют Brevlbacterium P312/CBS 713.73/, продуцирующей нестереоспецифическую амида- зу.

Селекцию микроорганизмов, позволяющих осуществлять анантиоселективный гидролиз, осуществляют в зависимости от их способности к селективному гидролизу рацемического 2-/4-хлорфенил/-3-метилбу- тирамид в а -метилбутановую кислоту в соответствующей среде до преобразования 20% продукта с последующим измерением анантиомёрного избытка и отбирают микроорганизмы с анантиомерным выходом, превышающим 65%.

Согласно настоящему изобретению, способ обычно осуществляется в водной или однородной или неоднородной водно- органической среде в определенных условиях температуры и рН в зависимости от вида микроорганизма путем перемешивания суспензии клеток или клеточных экстрактов микроорганизма и амида рацемической 2- арилалкановой кислоты.

Способ приводит к получению смеси 2- арилалкановой кислоты S и амида 2-арилалЁ

00

CN К 00 sJ

СО

кановой кислоты R, причем последний может рацемизироваться по известной технологии в амид рацемической 2-арилалкановой кислоты, который может снова гид ревизоваться в 2-арилалкановую кислоту S в вышеприведенных условиях.

Например, рацемизацию осуществляют путем нагрева с гидратом окиси аммония при температуре от 80 до 160°С.

П р и м е р 1. Штамм Brevlbacterlum R 312/CBS 717.73/ культивируют в колбе с перемешиванием при 28°С в течение 14 ч в среде со следующим составом, г:

Глюкоза10

NH4)2S045 КН2Р04 1,01

Na2HP04-12H201,64 К2НРО4 0,82 СаС12 2Н20 0,012 ZnCl2 0,0012 FeS04-7H20 0,0012 MnSO4.H2O 0.0012 MgS04-7H20 0,5 Хлоргидрат тиамина 0,002 Вода в количестве, достаточном до см3 1000 Эту предварительную культуру используют для затравки культуральной среды, имеющей тот же самый состав, но содержащий, кроме того, N-метилацетамид с концентрацией 20 мм. Культивирование осуществляют в колбе с перемешиванием в течение 24 часов при 28°С. Полученную биомассу отделяют путем центрифугирования, затем ее промывают два раза раствором хлорида натрия при 9 г/л.

Осадок центрифугирования, содержащий 320 мг клеток Brevlbacterlum R312 в расчете на сухое вещество, переводят в суспензию с 5 см3 буферного раствора (50 мМ) при рН 7,0. Добавляют 71,2 мг рацемического 2-(4-хлорфенил)-3-метилбутира- мида-337 ft моль/. После 117 часов перемешивания при 25°С реакционную смесь разбавляют путем добавления 45 см3 смеси ацетонитрил-хлористоводородная

кислота N(90-10 обьемн). Бактерии удаляют центрифугированием. Состав смеси определяют посредством высокоразрешающей жидкой хроматографии (ВРЖХ).

Всплывшая часть содержит 258 i моль 2-(4-хлорфенил)-3-метилбутирамида7 73 ft моль 2-{4-хлорфенил)-3-метилбутано- вой кислоты.

Добавляют хлорид натрия для улучшения разделения водных и органических фаз. К отделенной путем декантации органической фазе добавляют смесь эфир - едкий натр 0,1N (3-1 объем). После разделения водных и органических фаз путем декантации и подкисления водной фазы экстрагируют хлороформом 2-(4-хлорфе- нил)-3-метилбутановую кислоту.

Измерение вращательной способности показывает, что анантиомерный избыток

.изомера S(+) составляет 97,5%.

После отделения кислоты с R(+) а-метил- бензиламином, анализ посредством хроматографии ВРЖХ показывает, что анантиомерный избыток превышает 90%.

Формула изобретения

Способ получения. S(+) анантиомера 2- арилалкановой кислоты формулы

R

Ar-CH-COOH (D

где Аг- фенил, возможно замещенный атом галогена;

R - этил, пропил или изопропил, путем анантиоселективного гидролиза функционального производного 2-арилалкановой кислоты в присутствии ферментпродуцирующего микроорганизма, отличающийся тем, что, с целью повышения оптической чистоты целевого

продукта и выхода анантиомера, в качестве функционального производного 2-арилалкановой кислоты берут рацемический 2-(4- хлорфенил)-3-метилбутирамид, а в качестве ферментпродуцирующего микроорганизма

используют Brevlbacterium P312 (CBS 713.73).

Использование: биотехнология, область синтеза биологически активных соединений. Сущность изобретения: рацемический 2-(4-хлорфенил)-3-метилбутирамид подвергают стереоспецифическому гидролизу ами- даэой, продуцируемой Brevlbacterlum P 312 (CBS 713.73) в 2-(4-хлорфенил)-3-метилбута- новую кислоту. Способ предусматривает получение смеси указанных веществ. После разделения водных и органических фаз путем декантации и подкисления водной фазы, 2-(4-хлорфенил)-3-метилбутановую кислоту экстрагируют хлороформом. Анан- тиомерный избыток изомера S () составляет 97,5%.После отделения кислоты с Р(+) а - метиябензиламином анантиомерный избыток превышает 90%.