Способ определения диеновых конъюгатов Советский патент 1985 года по МПК G01N33/48 

00 СП to 4iak 1C 111852Д2 . Изобретение относится к биологии, гд преимущественно биохимии, и может быть использовано при определении продуктов перекисного окисленкя липидов - диеновых конъюгатов в тка- $ нях человека и животных в норме и при различных патологических состояниях. Цель изобретения - повьпиение точности и чувствительности опреде- 10 ления. Пример. Определение диеновых конъюгатов в микросомах печени. Контрольные микросомы крыс и 15 микросомы., подвергнутые ферментативному перекисному окислению, гомогенизировали в 10 мл смеси изопропанол/гептан (1:1). Полученная суспензия центрифугировалась 20 при 1000 10 мин, к насадочной жидкости добавляли 1,5 мл воды для разделения фаз. Гептановый слой аккуратно отбирался и спектрофотометрировался против аналогич- 25 ного слоя из холостой пробы, не содержащей биологического материала. К нижнему водно-спиртовому слою добавляли избыток NaCl (1,5 г) и интенсивно встряхивали. После зо отделения воды, содержащей различные водорастворимые соединения, отбирали верхний спиртовой слой и спектрофотометрировали против холостой пробы. Для расчета количества диеновых конъюгантов (ДК), образующихся при перекисном окислении липидов микросом печени использовали следующее уравнение:;40 в ся то со ха эк в ве чт со в в количество ДК, нм на мг липидов; разность между оптической плотностью липидов из опытных и контрольных МИКРОСОМ при 233 НМ; коэффициент молярной экстинкции ДК при 233 нм. равный 28000 М см , 2 - толщина кюветы, CMJ Кд - количество липидов в пробе, взятой для зкстракции, Mri 200 - коэффициент, учитывающий объем экстрагирующей системы. К, имеющие максимум поглощения, ласти 233-234 нм, регистрируютак в гептановой, так и в спирй фазе, однако в последней их ржание значительно выше. оличественные результаты, ктериззпощие распределение ДК, рагируемых из микросом печени, стеме гептан/изопропанол, прины в таблице и свидетельствуют, при экстракции-этой системой ржание ДК в спиртовой фазе раз превьштает их содержание птане.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДИЕНОВЫХ КОНЪЮГАТОВ путем обработки биологического материала системой гептан - изопропиловый спирт с последующим определением оптической плотности экстрагированных липидов, отличающийся тем, что, с целью повьапения точности и чувствительности определения, оптическую плотность определяют в изопропиловой среде, предварительно обработанной хлористым натрием в концентрации 0,15-0,40 г/мл.

200ЕеКл