Способ внутригрупповой дифференциации ЕСНО-вирусов Советский патент 1993 года по МПК C12N7/00 

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано для внутригрупповой дифференциации вирусов ECHO.

Цель изобретения - изыскание нового способа, позволяющего проводить предварительную внутригрупповую дифференциацию вирусов ECHO на отдельные серогипы.

Для реализации поставленной цели штаммы, принадлежащие к вирусам ECHO, культивируют в перевиваемой культуре клеток амниона человека FL в отсутствии и при наличии трипсина в концентрации 50,0±6,6 мкг/мл в питательной среде клеток, с последующим выявлением цитопатического эффекта.

При наличии цитопатического эффекта вирусы относят к группе ECHO 2. 3, 6, 8, 9, 11. 12, 13, 19, 20 и 25, а при отсутствии его культуру дополнительно инкубируют в присутствии трипсина в вышеуказанной концентрации и при появлении цитопатического эффекта вирусы относят к группе ECHO 1, 5.

7, 16, 21, 22, 24 и 27, а при отсутствии его- к группе ECHO 4. 14, 15. 17, 18, 23. 26, 29. 30,31, 32,

При м с р. Исследованию подвергали стандартные штаммы ЕСНО-пирусов(ЕСНО 1,2,3,4,5,6,7,8,9. 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 10, 19, 20, 21. 22.23. 24, 25. 26, 27, 29, 30, 31. 32), а также 47 штаммов энтеровирусов группы ECHO, выделенных от детей, больных серозным менингитом, а также из водных объектов (сточных вод, воды открытых водоемоп, системы питьевого водоснабжения) окружающей среды. Индикацию вирусов химическим соединением проводили в культург- клеток амниона человека (PL).

Клетки амниона человека выращивают в среде Игла (рН 7,2) с глутамином, с добавлением 7,0% телячьей сыворотки или сыворотки крупного-рогатого скота. За 3 часа до внесения вируса клетки отмывают средой 199, затем проводят смену на среду того же состава без сыворотки, но с доОаилением аморфного трипсина, в конечной концепт(Л

с

ioo

f

4 4 Јw hO

рации 50,0 мкг/мл. Вируссодержащий материал вносят на монослой после удаления среды из расчета 0,1 мл х 103ЦПД5о/мл на 250 тыс. клеток и после часового контакта культуру заливают средой, содержащей трипсин в такой же концентрации (50,0±б,6 мкг/мл}, и инкубируют при 37,0±0,1°С. Аналогичным образом инфицируют культуру FI, в питательную среду которой не добавляют трипсин. Инфицированные пробирки инкубируют при 37°С в течение 48-72 часов. Результат оценивают по ЦПДзо вируса, о случае его развития в Р1без добавления к питательной среде трипсина исследуемые штаммы относят к вирусам ECHO 2. 3, 6. 8. 9, 11, 11, 12, 13. 19, 20, 25. а при развитии цитопатического эффекта в культуре клеток, куда предварительно был внесен трипсин, штаммы относят к ECHO 1, 5, 7, 16. 21, 24 и 27.

В случае отсутствия цитопатического эффекта в культуре клеток Р1,неподвергну- тых протеолитической обработке, а также содержащих в питательной среде трипсин, их относят к серотипам ECHO 4. 14, 15, 17, 18, 23, 26, 29,30.31. 32. Аналогичным образом проводили предварительную дифференциацию 46 штаммов ЕСНО-вирусов, выделенных от больных детей серозным менингитом, а также из водных объектов окружающей среды. Это позволило выделить их в 3 подгруппы (I подгруппа: ECHO 2-1 штамм, ECHO 6-10 штаммов, ECHO 12 - 1

0

5

штамм, ECHO 13 - 1 штамм: II подгруппа: ECHO 1-6 штаммов, ECHO 7-12 штаммов, ECHO 21-1 штамм: III подгруппа: ECHO 4

-1 штамм. ECHO 17-9 штаммов. ECHO 29

-2 штамма, ECHO 32-2 штамма), что в последующем было подтверждено в реакции нейтрализации, выполненной в культуре клеток фибробластов эмбриона человека.

Таким образом, предлагаемый способ в отличие от известного позволяет провести предварительную внутригрупповую дифференциацию ЕСНО-вирусов. Технология предложенного способа несложна по выполнению, экономически выгодна, т.к. не связана с дополнительными материальными затратами, доступна для любой вирусологической лаборатории.

Формула изобретения Способ внутригрупповой дифференциа- 0 ции ЕСНО-вирусов, включающий выращивание клеток FL, их заражение с последующим определением цитопатического эффекта, и вынесением на основании этого сужения, отличающийся тем, что при наличии цитопатического эффекта вирусы относят к группе ECHO 2,3.6. 8.9, 11.12. 13,19. 20. 25. а при отсутствии его культуру дополнительно инкубируют в присутствии трипсина в концентрации 501 6.6 мкг/мл и при появлении цитопатического эффекта вирусы относят к группе ECHO 1,5.7.16,21. 22, 24, 27, а при отсутствии его к группе ECHO 4. 14, 15. 17. 18. 23, 26, 29. 30. 31, 32.

5

0

Использование: вирусология, медицина. Сущность изобретения: предложенный способ позволяет произвести предварительную пиутригрупповую дифференциацию вирусоп ECHO. Добавление трипсина в концентрации 50,0 мкг/мл о питательную среду переоиплемой культуры FL позволяет дифференцировать ЕСНО-вирусы на ECHO 2,3,6,8,9,11,12.,13.19,20,25 и ECHO 1.5,7,16,21,22,24,27. Остальные серотипы, не вызывающие цитопатический эффект в присутствии и отсутствии трипсина (при их репродукции в фибробластах эмбриона человека) относят к вирусам ECHO 4,14,15,17,18,23,20,29,30,31 и 32.