Способ получения замещенных 1-(1Н-имидазол-4-ил)-алкилбензамидов или их солей присоединения с кислотами нетоксичными и фармацевтически приемлемыми Советский патент 1993 года по МПК C07D233/56 A61K31/415 

Нз - водород, алкильный радикал, содержащий 1-4 атомов углерода, гидрокси- алкильный радикал, содержащий 1-4 атомов углерода, аминогруппа или гидроксильная группа;

R4 - водород или алкильный радикал, содержащий 1-4 атомов углерода;

Rg- водород, гидроксильная группа или алкоксирадикал, содержащий 1-4 атомов углерода;

Re- водород, гидроксильная группа или алкильный радикал, содержащий 1-4 атомов углерода, причем по меньшей мере один из RS и Re имеет значение, отличное от водорода.

а также их солей присоединения с кислотами, являющимися нетоксичными и фармацевтически приемлемыми, заключающимся в том, что проводят реакцию 1-(1Н-имида- зол-4-ил)-алкилбензоата алкила формулы

JL5 I l N R70

6 1

н

-о

(II)

N

И

в которой Ri, R2, Rs и Re имеют указанные значение;

R - алкильный радикал, содержащий 1-4 атомов углерода, с азотсодержащим соединением формулы

HN

-R- РЧ.

(Ill)

в которой R3 и R4 имеют указанные значения,

и полученные 1-(1Н-имидазол-4-ил)-алкил- бензамиды выделяют в свободном виде или в виде их солей присоединения с кислотами, являющимися нетоксичными и фармацевтически приемлемыми.

Пример 1. Получение исходных 1-(1 Н-имидазол-4-ил)-алкилбензоатов алкила с формулой II.

А. Путем этерификации соответствующих кислот.

1. Хлоргидрат 2-гидрокси-5-(1 Н-имида- зол-4-ил)-метил -бензоата этила.

Насыщают при 0°С потоком газообразной хлороводородной кислоты суспензию, содержащую 3,1 г (12,2 ммоль) хлоргидрата 2-гидрокси-5-(1Н-имидазол-4-ил)-метил - бензойной кислоты (полученной, как описано ниже, по примеру 2.В.) в 150 мл абсолютного этанола. Затем медленно нагревают до температуры образования флегмы, которую поддерживают в течение 10 ч. Испаряют растворитель до осаждения сложного эфира. Последний фильтруется, промывается диэтиловым эфиром, затем сушится. По

лучают 2,3 г хлоргидрата 2-гидрокси-5-(1 Н- имидазол-4-ил)-метил -бензоата этила.

Выход 68%. Температура плавления (ТПл)195-198°С.

5ЯМР-спектр(ДМСО): дельта 1,34 (ЗН, т),

4,03 (2Н, с), 4,37 (2Н, к), 6,95(1 Н, д), 7,40 (1 Н, с), 7,49 (1 Н, дд), 8,70 (1 Н, д), 9,12 (1 Н, с), 10,6 (1Н,с).

2.2Тидрокси-3- 1-(1 Н-имидазол-4-ил)- 10 н зоат этила.

Это соединение получено по примеру 1, но исходя из 2-гидрокси-3- 1-(1Н-имидазол- 4-ил)-этил -бензойной кислоты (полученной, как описано ниже, по примеру 2.А.2). По

15 окончании реакции нейтрализуют реакционную среду прибавлением концентрированногорастворааммиака, отфильтровывают неорганические соли и выпаривают фильтрат при пониженном дав20 лении. Полученный остаток очищают методом хроматографии на кремнеземе(элюент: смесь дихлорметан-метанол 8:2 об./об.). Получают 2-гидрокси-3- 1-(1Н-имидазол 4- ил)-этил -бензоат этила с выходом 35%. Со25 ответствующий хлоргидрат плавится при 168°С (этанол-эфир).

Элементный анализ для С14Н1б№Озх xHCI,%:

Рассчитано, %; С 56,66; Н 5,40; N 9,44

30 Найдено, %; С 56,58; Н 5,50; N 9,21.

3.2-Гидрокси-3- 1-(1 Н-имидазол-4-ил) пентил -бензоат этила.

Нагревают при орошении флегмой в течение 9 ч 1,18 г (3,8 ммоль) хлоргидрата

35 2-гидрокси-3- 1-(1 Н-имидазол-4-ил)-пен- тил -бензойной кислоты (полученной, как описано ниже, по примеру 2.А.З.), растворенных в 15 мл триэтилортоформиата, е присутствии 1,2 г безводного монтморило40 нита К10, Затем фильтруют и выпаривают при пониженном давлении, Полученный остаток очищается методом хроматографии НЕ 150 г кремнезема (элюент: смесь дихлорме- тан-метанол-аммиак 95:5:0,5 по объему).

45Получают 0,213 г 2-гидрокси-3- 1-(1Нимидазол-4-ил)-пентил -бензоата этила.

ЯМР-спектр (ДМСО): дельта 0,81 (ЗН, т). 1,0-1,29 (2Н,м), 1,34(ЗН,т), 1,77-2,0 (2Н, м). 4,31-4,41 (ЗН, т+к), 6,77 (1Н, с), 6,86 (1Н, т).

50 7,46-7,50 (2Н, д+с), 7,63 (1 Н, д).

Полученный таким образом продукт применялся в таком виде без дополнительной очистки для получения соответствующего бензамида (пример 3.13).

55 4, 2Тидрокси-3-(1 Н-имидазол-4-ил)-ме- тил -бензоат метила.

Это соединение получено по п. .2, но исходя из хлоргидрата 2-гидрокси-3-(1Н- имидазол-4-ил)-метил -бензойной кислоты

(полученного, как описано ниже, по примеру 2.А.1) и метанола.

Тпл. 153-154°С.

ЯМР-спектр(ДМСО): дельта3,87(2Н, м), 3,91 (ЗН, с), 6,77 (1Н, с), 6,87 (1Н, т), 7,45 (1Н, дд), 7,58 (1 Н, с), 7,69 (1 Н, дд). 10 (1 Н. с).

В. По реакции Клайзена:

1. 3-(1 Н-Имидазол-4-ил)-метил -2-ме- токсибензоат метила.

1а. 2- 2-Хлор-2-пропенилокси -бензоат метила,

Нагревают при орошении флегмой в течение 10 ч суспензию, содержащую 304 г (2 моль) 2-гидроксибензоата метила, 25 г иодида калия, 69 г (0,5 моль) карбоната калия и 69 г (0,625 моль) 2,3-дихлорпропрена в 3 л сухого ацетона. Через 2,5 ч, 5 ч и 7,5 ч протекания реакции каждый раз добавляют 69 г карбоната калия и 69 г 2,3-дихлорпрена, Затем фильтруют суспензию и выпаривают фильтрат при пониженном давлении. Остаток извлекается этилацетатом, и раствор последовательно промывается насыщенным водным раствором тиосульфата натрия, водой и в конце насыщенным водным раствором хлорида натрия. Органическую фазу сушат на сульфате натрия и дистиллируют ее при пониженном давлении, Таким образом получают 394 г 2-(2-хлор-2-пропенилок- си)-бензоата метила.

Выход 87%. Температура кипения (ТКип) 119°С/1,Змбар.

1Ь. 3-(2-Хлор-2-пропенил)-2-гидрокси- бензоат метила.

Проводят тщательную дегазацию аргоном 274,1 г (1,21 моль) 2-(2-хлор-2-пропени- локси)-бензоата метила, помещенного в колбу объемом 2 л. Затем как можно быстрее нагревают до 260°С. При этой температуре бурно начинается экзотермическая реакция: температура самостоятельно поднимается до 293°С, образуется флегма и происходит почернение реакционной среды. После охлаждения до комнатной температуры перегоняют продукт при пониженном давлении. Получают 241,1 г 3- (2-хлор-2-пропенил)-2-гидроксибензоата метила.

Выход 88%.ТКип. 109-110°С/1,Змбар.

ЯМР-спектр (СООз): дельта 3,71 (2Н, с), 3,95(ЗН, с), 5,17(1 Н,м), 5,28(1 Н,м), 6,90(1 Н, т), 7,48 (1 Н, дд), 7,85 (1 Н, дд), 11,22 (1 Н, с).

1 с. 3-(2-Хлор-2-пропенил)-2-метокси- бензоат метила.

Не превышая температуру 10°С, прибавляют порциями 8,81 г (306 ммоль) гидра- да натрия к раствору, содержащему 57,7 г (255 ммоль ) 3-(2-хлор-2-пропенил)-2-гидро- ксибензоата метила в 500 мл безводного диметилформамида. Нагревают смесь при

40°С в течение 15 мин. Затем прибавляют 43,45 г(306 ммоль) метилиодида, растворенного в 50 мл толуола, далее поддерживают температуру смеси при 40°С в течение 3 ч.

Приливают осторожно реакционную смесь к 5 л воды и экстрагируют несколько раз этилацетатом. Органическую фазу концентрируют до объема 500 мл, затем ее промы- вают последовательно водой и

насыщенным водным раствором хлорида натрия. Сушат раствор на сульфате натрия и выпаривают растворитель при пониженном давлении. Остаток очищается методом хроматографии на силикагеле

(элюент:дихлорметан-гексан 50/50 об./об.). Таким образом получают 49,2 г 3-(2-хлор-2- пропенил)-2-метоксибензоата метила.

Выход 60%. Ткип. 107-110°С/0,5 мбар (маслянистая жидкость).

ЯМР-спектр (): дельта 3,73 (2Н, с), 3,82 (ЗН, с), 3,92 (ЗН, с), 5,14 (1 Н, м), 5,32 (1 Н, м), 7,15 (1Н, т), 7,47 (1Н, дд), 7,81 (1Н, дд).

1d. 3-(1 Н-Имидазол-4-ил)-метил -2-ме- токсибензоат метила.

Нагревают при орошении флегмой в течение 150 мин 45,5 г (189 ммоль) 3-(2-хлор-2- пропенил)-2-метоксибензоата метила и 81,5 г (378 ммоль) м-хлорпербензойной кислоты, растворенных в 300 мл безводного хлороформа. Охлаждают до 0°С и удаляют фильт- рованием образовавшийся осадок. Промывают фильтрат последовательно насыщенным водным раствором тиосульфата натрия и насыщенным водным раствором

бикарбоната натрия. Сушат раствор на сульфате натрия и выпаривают растворитель при пониженном давлении, не превышая температуру 30°С,

Полученный остаток переводится в суспензию прибавлением 300 мл безводного метанола и смешивается с 111,3 г(1,32 моль) тонкоизмельченного бикарбоната натрия. Нагревают смесь до образования флегмы. Прибавляют к ней порциями час за часом

137,6 г (1,32 моль) ацетата формамидина, После нагревания в течение 5,5 ч при орошении флегмой, удаляют метанол при пониженном давлении. Извлекают остаток посредством 500 мл воды и проводят

экстракцию этилацетатом. Органическую фазу сушат на сульфате натрия и выпаривают ее под вакуумом. Остаток очищается методом хроматографии на силикагеле (элюент: смесь дихлорметан-этанол-аммиак

92,3:7:0,7 об./об,/об.). Получают 13,8 г 3- (1 Н-имидазол-4-ил)-метил -2-метоксибенз - оата метила.

Вы ход 30%.

ЯМР-спектр (DMCO): дельта 3,73 (ЗН, с), 3,83 (ЗН, с), 3,89 (2Н. с), 6,78 (1Н. с), 7,11 (1Н, т), 7,24-7,73 (ЗН, м).

Полученный указанным образом продукт применялся в таком виде без дополни- тельной очистки для приготовления соответствующего бензамида (пример 3.16).

Следующие соединения получены при помощи метода, описанного в пункте В.1.

2.2-Гидрокси-3-(1 Н-имидазол-4-ил)-ме- тил -бензоат метила.

Это соединение получено исходя из 3- (2-хлор-2-пропенил)-2-гидроксибензоата метила, с выходом 35,4%, опуская, разумеется, мети ирование метилиодидом, описанное в пункте 1с. Т.пл. 153-154°С.

Полученный продукт идентичен продукту, приготовленному в примере 1.А.4.

3.3-(1 Н-Имидазол-4-ил)-метил -2-н- пропоксибензоат метила.

Выход 20% (маслянистая жидкость).

Продукт, полученный в сыром виде, применялся в таком виде для получения соответствующего бензамида (пример 3.17).

С. По реакции Фриделя-Крафтса.

1.Хлоргидрат 5-трет-бутил-2-гидрокси- 3-(1 Н-имидазол-4-ил)-метил -бензоата метила.

Проводят реакцию 50 г хлоргидрата 1Н- имидазол-4-метанола с 60 г 5-трет-бутил-2- гидроксибензоата метила в 150 мл концентрированной серной кислоты при 20°С в течение 21 ч, Осторожно разлагают реакционную смесь на льду. Полученный твердый продукт фильтруется и очищается методом хроматографии, затем превращается в свой хлоргидрат.

Получают указанным образом 1,1 г хлоргидрата 5-трет-бутил-2-гидрокси-3- (1 Н-имидазол-4-ил)-метил -бензоата метила.

Выход 2,8%. Т.пл. 185-18б°С.

ЯМР-спектр (DMCO): дельта 1,3 (9Н, с), 3,45 (ЗН, с), 4,1 (2Н, с), 7,3 (1Н, с), 7,75 (2Н, м), 9,0(1 Н, с), 10,5-13,0 (ЗН).

2.2,6-Дигидрокси-3-(1 Н-имидазол-4- ил)-метил -бензоат метила.

Смешивают 95,84 г (0,57 моль) 2,6-ди- гидроксибензоата метила, 190 мл муравьиной кислоты и 51,14 г (0,38 моль) хлоргидрата 1Н-имидазол-4-метанола. Нагревают смесь до образования флегмы и в течение 15 мин перегоняют азеотроп муравьиная кислота-вода. Затем поддерживают нагревание при орошении флегмой в течение 17 ч. Реакционная смесь приливается к воде. Проводят экстракцию избытка 2,6-дигидроксибензоата метила толуолом, затем нейтрализуют водную фазу до рН 7-8 путем прибавления насыщенного водного

раствора гидроксида натрия. Экстрагируют дихлорметаном, сушат органические фазы на сульфате натрия и выпаривают растворитель при пониженном давлении. Остаток

5 очищается методом хроматографии на сили- кагеле (элюент: смесь дихлорметан-мета- нол-аммиак 94:6:0,6 по объему). Получают 14,8 г2,6-дигидрокси-3-(1Н-имидазол-4-ил)- метил -бензоата метила, загрязненного сле0 дами остаточных растворителей. Выход 13%.

ЯМР-спектр (DMCO): дельта 3,72 (2Н, с), 3,81 (ЗН, с), 6,33 (1 Н, д), 6,86 (1 Н, с), 7,06 (1 Н, д), 7,73(1 Н, с), 9,5-10,2 (ЗН).

5 По причине своей нестабильности полученный указанным образом продукт применялся в таком виде без дополнительной очистки для приготовления соответствующего бензамида (пример 3, 8).

0 Следующие соединения получены при помощи метода, описанного в пункте С.2.

3. 2,6-Дигидрокси-3- 1-{1 Н-имидазол-4- ил)-этил -бензоат метила.

Это соединение было получено исходя

5 из хлоргидрата альфа-метил-1Н-имидазол- 4-метанола. Нагревание поддерживают в течение 19 ч при орошении флегмой. Полученный в конце остаток очищается методом хроматографии на силикагеле (элюент:

0 смесь дихлорметан-метанол-аммиак 95:5:0,5 об./об./об.). Выход 43%.

ЯМР-спектр (CDCI.3): дельта 1,52 (ЗН, д), 4,0 (ЗН, с), 4,48 (1 Н, к), 6,40 (1 Н, д), 6,79 (1 Н,

5 с), 7,14(1 Н,д), 7,47(1 Н, с), 10,0 (ЗН).

Полученный продукт применялся в таком виде без дополнительной очистки для приготовления соответствующего бензамида (пример 3.9).

0 4. 6Тидрокси-3-(1 Н-имидазол-4-ил)-ме- тил -2-метилб.ензоат этила и 2-гидрокси-З- (1Н-имидазол-4-ил)-метил -6-метилбензоат этила.

Эти два соединения получены одновре5 менно, исходя из смеси, содержащей 80,8 г (0,448 моль) 2-гидрокси-6-метилбензоата этила, 225 мл муравьиной кислоты и 51,5 г (0,382 моль) хлоргидрата 1 Н-имидазол-4-ме- танола, выдерживаемой при орошении

0 флегмой в течение 53 ч. Полученные продукты разделяют и очищают методом хроматографии на силикагеле (элюент: смесь дихлорметан-метанол-аммиак 94:6:0,5 об/об/об).

5 Получают указанным образом 7,2 г 6- гидрокси-3-(1 Н-имидазол-4-ил)-метил -2- метилбензоата этила.

Выход 7,2%. Тпл. 42-45°С. ЯМР-спектр (): дельта 1,36 (ЗН, т),

2,34 (ЗН, с), 3,83 (2Н, с), 4,37 (2Н, к), 6,52 (1 Н,

с), 6,70 (1Н, д), 7,08(1 Н, д), 7,45(1 Н, с), 10,0 (2Н).

Одновременно получают 2,8 г 2-гидро- кси-3-(1Н-имидазол-4-ил)-метил -6-метил- бензоата этила.

Выход 2,8%. Тпл. 101-103°С.

ЯМР-спектр (CDCIs): дельта 1,40 (ЗН, т), 2,47 (ЗН, с), 3,88 (2Н, с), 4,39 (2Н, к), 6,62 (1 Н, д), 6,76 (1Н, с), 7,12(1 Н, д), 7,43(1 Н, с), 10,0 (2Н).

5. Бромгидрат 2-гидрокси-3-(1 Н-имида- зол-4-ил)-метил -4-метилбензоата метила.

5а. 5-Бром-2-гидрокси-3-(1 Н-имидазол- 4-ил)-метил -4-метилбензоат метила.

При комнатной температуре прибавляют порциями 95,6 г (0,71 моль) хлоргидрата 1 Н-имидазрл-4-метанола к раствору, содержащему 87 г (0,355 моль)5-бром-2-гидрокси- 4-метилбензоата метила в 900 мл концентрированной серной кислоты. Перемешивают в течение 234 ч. Затем реакционную смесь осторожно выливают на лед и доводят рН до 8 прибавлением насыщенного водного раствора гидроксида натрия. Проводят экстракцию этилацетатом. Органическая фаза выпаривается при пониженном давлении, и остаток очищается методом хроматографии на1,4 кг кремнезема (элю- ент:дихлорметан-метанол 9:1 об./об.). Полученный указанным образом продукт хроматографируется второй раз на 400 г кремнезема (элюент: смесь дихлорметан- метанол-аммиак95:5:0,5 об./об./об.).

Получают 2,4 г 5-бром-2-гидрокси-3-(1Н- имидазол-4-ил)-метил -4-метилбензоата метила, достаточно чистого для использования в таком виде на следующей стадии.

ЯМР-спектр (DMCO): дельта 2,43 (ЗН, с),

3.90(ЗН, с), 3,96 (2Н, с), 6,62 (1 Н, с), 7,51 (1 Н, с), 7,87(1 Н, с).

5Ь. Бромгидрат 2-гидрокси-3-(1 Н-ими- дазол-4-ил)-метил -4-метилбензоата метила.

Подвергают гидрогенолизу 2,38 г (7,2 ммоль) 5-бром-2-гидрокси-3-(1 Н-имидазол- 4-ил)-метил -4-метилбензоата метила, растворенного в 70 мл метанола, под давлением водорода 4,2 бар, при комнатной температуре и в присутствии 0,7 г угля с 10%-ным содержанием палладия. Отфильтровывают катализатор и выпаривают растворитель при пониженном давлении. Получают 1,83 г бромгидрата 2-гидрокси-З- (1 Н-имидазол-4-ил)-метил -4-метилбензоа - та метила.

Выход 76%.

ЯМР-спектр (DMCO): дельта 2,34 (ЗН, с),

3.91(ЗН, с), 4,02 (2Н, с), 6,87 (1Н, с), 7,13 (1Н, с), 7,68(1 Н, д), 8,86(1 Н, с).

Полученный указанным способом продукт применялся в таком виде без дополни- тельной очистки для приготовления соответствующего бензамида (пример 3.12).

Приме р 2. Получение исходных 1-(1 Н-имидазол-4-ил)-алкилбензойных кислот.

А. Путем окисления 1-(1Н-имидазол-4- 0 ил)-алкилбензолметанолов соответствующего строения.

1.2-Гидрокси-3-(1 Н-имидазол-4-ил)-ме- тил -бензойная кислота (хлоргидрат).

Нагревают при 180°С в течение 2,5 ч при

5 хорошем перемешивании 1 г 2-гидрокси-З- (1 Н-имидазол-4-ил)-метил -бензолметано - ла (полученного в соответствии с методом, описанным в примере 5.1 заявки на патент СССР № 4613197/23-04 на имя фирмы-зая0 вителя в присутствии 7,5 г гидроксида калия. Затем охлаждают реакционную среду и растворяют ее в 10 мл воды. Подкисляют водный раствор до рН от3 до 4 прибавлением концентрированной хлороводородной

5 кислоты. Отфильтровывают осадок, который при этом образуется, сушат его и экстрагируют его изопропиловым спиртом при кипении. Затем изопропиловый спирт удаляется при пониженном давлении, а полученный

0 кристаллический осадок перекристаллизо- вывают в 5 мл 1 н.водного раствора хлороводородной кислоты. Получают 0,74 г хлоргидрата 2-гидрокси-3-(1 Н-имидазол-4- ил)-метил -бензойной кислоты,

5 Выход 58%. Т.пл. 257°С (разлагается).

ЯМР-спектр (DMCO): дельта 4,08 (2Н, с), 6,09 (1Н, т), 7,37 (1Н, д), 7,52 (1Н, дд), 7,79 (1Н,дд),9,05(1Н,д).

Рассчитано, %: С 51,87 Н 4,32 N 11,0

0 Элементный анализ для СцНю№Озх хНС

Найдено, %: С 51,68; Н 4,03; N 10,61. Это соединение применяется в качестве исходного реагента в примере 1.А.4.

5 Аналогичным образом получили следующее соединение:

2.2Тидрокси-3- 1-(1Н-имидазол-4-ил)- этил -бензойная кислота.

Это соединение, используемое в каче- 0 стве исходного реагента в примере 1.А.2, получено исходя из 2-гидрокси-3- 1-(1Н- имидазол-4-ил)-этил -бензолметанола, с выходом 50%.

Свободная кислота получается путем 5 нейтрализации хлоргидрата и перекристаллизации в воде. Тпл. 278-280°С.

Рассчитано, %: С 62,06; Н 5,17; N 12,07 Элементный анализ для Ci2Hi2N203 Найдено, %: С 62,05; Н 5,37; N 11,72

Используемый в качестве исходного реагента 2-гидрокси-3- 1-(1 Н-имидазол-4-ил)- этил -бензолметанол получен в соответствии с методом, описанным в примере 5.5 заявки на патент СССР № 4613197/23-04 на имя фирмы-заявителя.

3. 2Тидрокси-3- 1-(1 Н-имидазол-4-ил)- пентил -бензойная кислота (хлоргидрат).

Нагревают при 170°С в течение 5 ч 3,86 г (14,8 ммоль) 2-гидрокси-3- 1-(1 Н-имидазол- 4-ил)-пентил -бензолметанола (полученного в соответствии с известным методом) в присутствии 22 г гидроксида калия. Затем охлаждают реакционную среду и растворяют ее в 100 мг воды. Отфильтровывают нерастворимую часть и подкисляют фильтрат до рН 10 путем прибавления концентрированной хлороводородной кислоты, Удаляют соли, которые образуются при этом, путем фильтрования и подкисляют в конце фильтрат до рН 1. Осаждается хлоргидрат 2-гид- рокси-3- 1 -(1 Н-имидазол-4-ил)-пентил -бен- зойной кислоты. Перекристаллизовывают его в 100 мл изопропилового спирта. Получают 1,44 г продукта.

Тпл. 239-251°С.

ЯМР-спектр (DMСО): дельта 0,83 (ЗН, т), 1,17-1,32 (4Н,м), 1,94-2,07 (2Н, м), 4,43(1 Н, т), 6,79 (1Н, т), 7,33(1 Н, д), 7,47(1 Н, с), 7,69 (1Н,д), 8,84(1 Н, с).

Это соединение используется в качестве исходного реагента в примере 1.А.З.

В. Путем гидролиза соответствующих сложных эфиров, полученных по реакции Фриделя-Крафтса.

2-Гид рокси-3-(1Н-имидазол-4-ил)-мет- ил -бензойная кислота и 2-гидрокси-5-(1 Н- имидазол-4-ил)-метил -бензойная кислота (хлоргидрат).

Прибавляют порциями 181 г (1,35 моль) хлоргидрата 1 Н-имидазол-4-метанола к смеси, содержащей 156 мл (1,2 моль) 2-гид- роксибензоата метила и 675 г полифосфорной кислоты, нагретой до 80°С.

Выдерживают реакционную среду при хорошем перемешивании при этой температуре в течение 288 ч. Затем разлагают смесь на льду и экстрагируют 2 раза толуолом.

Водная фаза подщелачивается до рН 9,5 путем прибавления 790 мл насыщенного водного раствора гидроксида натрия. Неорганические соли, которые выпадают в осадок, удаляются фильтрованием и промываются метанолом. Этот метаноль- ный раствор после промывания объединяется с водной фазой и смесь концентрируется путем частичного удаления метанола. Затем подщелачивают раствор до рН 10,3 путем прибавления 10 н.водного раствора гидроксида натрия и нагревают при 100°С в тече

ние 1,5 ч для омыления сложных эфиров. Водный раствор нейтрализуют до рН 7,5 путем прибавления 10 н.хлористоводородной кислоты, фильтруют на норите и выпаривают фильтрат при пониженном давлении. Остаток извлекается три раза подряд смесью толуол-этанол и сушится путем азеотропной перегонки. Затем он частично растворяется в горячем метаноле и

0 освобождается от нерастворимых неорганических солей путем фильтрования. Выпа- ривают фильтрат при пониженном давлении, снова растворяют остаток в минимальном объеме воды и очищают пропуска5 нием через колонку с амберлитом 1R93 (высота колонки 60 см; диаметр 8 см; эквивалент: 2,64 моль). Избыток 1 Н-имидазол-4- метанола, а также его полимеры удаляются водой (рН элюата варьируется от 11,2 до

0 7,3). Затем элюирование продолжается посредством 4% водного раствора хлороводородной кислоты. Доводят кислотный элюат (9 л) до рН 7,7 путем прибавления насыщенного водного раствора гидроксида натрия,

5 затем выпаривают его при пониженном давлении. Снова сушат полученный остаток путем азеотропной перегонки со смесью толуол-этанол и извлекают его посредством 1,6 л цетонитрила. Потом фильтруют. Оста0 ток на фильтре (129 г) хроматографируется на кремнеземе (800 г, 15 мкм) после предварительного.нанесения на 300 г кремнезема 0,2-0,5 мм) (элюент: смесь этилацетат-эта- нол 75:25 об./об.).

5 Получают указанным образом 5,99 г 2- гидрокси-3-(1Н-имидазол-4-ил)-метил -бен- зойной кислоты.

Тпл. 245-252°С (вода).

Рассчитано, %: С 60,56; Н 4,59; N 12,04

0 Элементный анализ для СцНю№Оз Найдено, %: С 60,32; Н 4,69; N 12,41 Одновременно получают 31 г 2-гидро- кси-5-(1Н-имидазол-4-ил)-метил -бензойн ой кислоты. Ее хлоргидрат, используемый в

5 качестве исходного реагента в примере 1 .А. 1, плавится при 254-258°С(метанол-этиловый эфир).

Рассчитано, %: С 51,87; Н 4,32; N 11,0 СГ 13,40

0 Элементный анализ для СцНю№Озх хНС

Найдено, %: С 51,65; Н 4,24; N 10,45; СГ 13,73

Пример 3. Получение 1-(1Н-имида5 зол-4-ил)-алкилбензамидов с формулой I по реакции сложных эфиров с формулой II с азотсодержащими соединениями с формулой III.

1. Хлоргидрат 2-гидрокси-3-(1Н-имида- зол-4-ил)-метил -бензамида.

Пропускают поток газообразного аммиака, высушенного на гидроксиде калия, в раствор, содержащий 18,1 г (78 ммоль) 2- гидрокси-3-(1Н-имидазол-4-ил)-метил1-бен- зоата метила (полученного в примере 1.В.2 и в примере 1.А.4) в 400 мл безводного метанола, в течение ночи. Затем нагревают при орошении флегмой в течение 2 ч. Выпаривают реакционную смесь при пониженном давлении и очищают остаток методом хроматографии на силикагеле (элюент: смесь дихлорметан-метанол-аммиак

89,5:10:0,5 об./об./об.).

Получают 16,6 г 2-гидрокси-3-(1 Н-ими- дазол-4-ил)-метил -бензамида.

Выход 98%. Т.пл. 197,6°С. Рассчитано, %: С 60,83; Н 5,07; N 19,35 Элементный анализ для СцНцМз02 Найдено, %: С 60,91; Н 5,06; N 19,32 Амид, обработанный в этаноле 1,2 экви- валентами хлороводородной кислоты, образует хлоргидрат с выходом 73%. Тпл. 287,8°С.

Рассчитано, %: С 52,07; Н 4,73; N 16,57; СГ 14,00

Элементный анализ для СпНпМзОа- HCI Найдено, %; С 52,04; Н 4,76; N 16,54; СГ 13,94

2.2Тидрокси-5-(1 Н-имидазол-4-ил)-ме- тил -бензамид.

Это соединение получено, как указано выше в пункте 1, исходя из хлоргидрата 2- гидрокси-5-(1Н-имидазол-4-ил)-метил -бен- зоата этила (полученного в примере 1.А.1). Реакционная смесь перемешивается в тече- ние 3 дней при комнатной температуре. Продукт реакции очищается методом хроматографии на силикагеле (элюент: дихлорметан-метанол 85:15 об./об.).

Тпл. 180-185°С (изопропиловый спирт). Рассчитано, %: С 60,83; Н 5,07; N 19,35 Элементный анализ для СцНц№02 Найдено, %: С 60,71; Н 5,25; N 19,01

3.Хлоргидрат 2-гидрокси-3-(1 Н-имида- зол-4-ил)-метил -М-метилбензамида.

Нагревают в автоклаве при 75°С в течение 3 ч 6,96 г (30 ммоль) 2-гидрокси-3-(1 Н- имидазол-4-ил)-метил -бензоата метила (полученного в примере 1.В.2) и 60 мл метиламина, растворенного в 350 мл этанола; выпаривают смесь при пониженном давлении. Извлекают остаток водой и экстрагируют 3 раза этилацетатом.

Сушат органическую фазу на сульфате натрия и выпаривают растворитель при по- ниженном давлении. Остаток очищается методом хроматографии на кремнеземе (элюент: смесь дихлорметан-метанол-амми- ак 91,5:8,0:0,5 об./об./об.).

После выпаривания растворителей полученный продукт кристаллизуется в этила- цетате.Получают4,95г

2-гидрокси-3-(1Н-имидазол-4-ил)-метил -Ы -метилбензамида.

Выход 71%.

Амид, обработанный в смеси этанол- эфир 1,2 эквивалентами хлороводородной кислоты, образует 4,7 г хлоргидрата.

Выход 59%. Тпл. 233,9°С.

Рассчитано, %: С 53,83; Н 5,23; N 15,70

Элементный анализ для С НчзМзОах хНС

Найдено, %: С 53,74; Н 5,17; N 15,55

4.2-Гидрокси-3-(1 Н-имидазол-4-ил)-ме- тил -бензогидразид.

Нагревают при орошении флегмой в течение 13 ч смесь, содержащую 10 г (43,1 ммоль) 2-гидрокси-3-(1 Н-имидазол-4-ил)- метил -бензоата метила (полученного в примере 1.В.2) и 4,31 г (86,2 ммоль) гидрата гидразина, растворенного в 100 мл метанола. Снова прибавляют еще 2,15 г (43,1 ммоль) гидрата гидразина и поддерживают нагревание при орошении флегмой еще в течение 24 ч. Затем выпаривают смесь при пониженном давлении. Извлекают остаток посредством 100 мл воды (рН 8). Насыщают раствор хлоридом натрия и проводят экстракцию этилацетатом. Сушат органическую фазу на сульфате натрия и выпаривают растворитель при пониженном давлении, Остаток кристаллизуется в этаноле. Получают 6,1 г 2-гидрокси-3-(1 Н-имидазол-4-ил)-метил -бензоги дразида, перекристаллизуемого в метаноле. Выход 61%. Тпл. 189,7°С. Рассчитано, %: С 56,88; Н 5,21; N24,13 Элементный анализ для Найдено, %: С 56,91; Н 5,24; N 24,00

5.Хлоргидрат 2-гидрокси-3- 1-(1Н-ими- дазол-4-ил)-этил -бензамида.

Перемешивают в течение 90 ч при комнатной температуре и в присутствии каталитического количества 20 мг метилата натрия раствор, содержащий 2 г 2-гидрокси-3- 1- (1 Н-имидазол-4-ил)-этил -бензоата этила (полученного в примере 1.А.2) в 50 мл метанола, в который пропускают поток газообразного аммиака. Затем выпаривают метанол и остаток очищают методом хроматографии на силикагеле (элюент: дихлорме- тан-метанол-аммиак 8,5:1:0,5 об./об./об.). Полученный продукт трансформируется в хлоргидрат в этанольном растворе хлороводородной кислоты в присутствии диэтилово- го эфира. Получают 1,2 г хлоргидрата 2-гидрокси-3- 1 -(1 Н-имидазол-4-ил)-этил бензамида.

Выход 68%. Тпл. 240-243°С.

Рассчитано, %: С 53,83; Н 4,86; N 15,70; СГ 13,27

Элементный анализ для С12Н1з№02Х xHCI

Найдено, %: С 54,0; Н 4,88; N 15,73; СГ 13,17

Амид, полученный после очистки методом хроматографии на силикагеле, разделяется на два своих энантиомера путем хроматографирования на хиральной фазе альфа-гликопротеина (элюент: изопропило- вый спирт-фосфатный буферный раствор с концентрацией 0,02 М и рН 7; 1:99 об./об.). Затем превращают каждый из энантиоме- ров амида в соответствующий хлоргидрат по указанному выше способу. Получают таким образом в почти равных количествах:

а) хлс гидрат (+)-2-гидрокси-3- 1-(1Н- имидазол-4-ил)-этил -бензамида (гидрати- рованного).

Т™. 107.8°С(вода).

82,04° (с 1, метанол).

ЯМР-спектр (DMCO): дельта 1,57 (ЗН, д), 3,30 (5Н, м), 4,56 (1 Н, к), 6.83 (1 Н, т), 7,23 (1 Н, дд), 7,40(1 Н, с), 7,82 (1 Н, дд), 7,92 (1 Н, м), 8,51 (1 Н, м), 8,98 (1Н, д), 13,5-14,5 (2Н, м).

в) хлоргидрат (-)-2-гидрокси-3- 1-(1Н- имидазол-4-ил)-этил -бензамида (гидрати- рованного).

Тля. 107,4°С (вода)

-79,13° (с 1, метанол).

ЯМР-спектр: идентичен предыдущему.

6.2Тидрокси-5-(1 Н-имидазол-4-ил)-ме- тил -М-метилбензамид.

Это соединение получено в соответствии с методом, описанным в п. 3, исходя из хлоргидрата 2-гидрокси-5-(1 Н-имидазол-4- ил)-метил -бензоата этила (полученного в примере 1.А.1) и метиламина. Предварительно высвобождают основание, исходя из хлоргидрата, при помощи небольшого избытка (1,2 эквивалента) метилата натрия. Продукт, полученный после выпаривания растворителя, очищается методом хроматографии на силикагеле (элюент: смесь дих- лорметан-этанол-аммиак 97,5:12:0,5 V/V/V).

Выход 67% (после перекристаллизации в этаноле).

Тпл. 219,5°С

Рассчитано, %: С 62,32; Н 5,67; N 18,17 Элементный анализ для С ЖзМзОа Найдено, %: 62,23; Н 5,65; N 18,06 ЯМР-спектр (DMCO): дельта 2,80 (ЗН,д), 3,27 (1 Н, с), 3,76 (2Н, с), 6,67 (1 Н, с), 6,80 (1 Н, д), 7,23 (1 Н, дд), 7,49 (1 Н, с), 7,87 (1 Н, д), 8,80 (1Н,с), 11,8(1Н, с).

7.5-Трет-бутил-2-гидрокси-3(1 Н-ими- дазол-4-ил)-метил -бензамид.

Это соединение получено, как указано выше в п. 2, исходя из хлоргидрата 5-трет- бутил-2-гидрокси-3-(1Н-имидазол-4-ил)-метил -бензоата метила (полученного в примере 1.С.1).

Выход 22,7%. Т.пл. 209-211°С (тетра- гидрофуран). Вычислено, %: С 65,91; Н 7,00; N 15,37

Элементный анализ для CisHigNsOa

Найдено, %: С 65,42; Н 7,06; N 15,14

8. Хлоргидрат 2,6-дигидрокси-3-(1Н- имидазол-4-ил)-метил -бензамида. Это соединение получено, как указано выше в п. 1, исходя из 2,6-дигидрокси-З- (1 Н-имидазол-4-ил)-метил -бензоата метила (полученного в примере 1.С.2), Пропускают поток газообразного аммиака в 5 течение 3 ч в раствор, выдерживаемый при комнатной температуре, затем выпаривают Остаток перекристаллизовывается в диок- сане.

Выход 81%.

0 Амид, обработанный в этаноле 1,2 эквивалентами хлороводородной кислоты, образует хлоргидрат с выходом 73%.

Тпл. 290,3°С (разлагается).

Вычислено, %: С 48,99; Н 4,49; N 15,58; 5 СГ 13,15

Элеме нтный анализ для СцНцМз02Х xHCI

Найдено, %: С 48,79; Н4,43; N 15,44; СГ 13,16

0 9. Хлоргидрат 2,6-дигидрокси-3- 1-(1Н- имидазол-4-ил)-этил -бензамида.

Это соединение получено, как указано в

п. 8, исходя из 2,6-дигидрокси-3- 1-(1Н-имидазол-4-ил)-этил -бензоата метила (получен5 ного в примере 1.С.З). Остаток

перекристаллизовывается в толуоле.

Выход 85%.

Амид, обработанный в смеси этанол- эфир 1,1 эквивалентами хлороводородной 0 кислоты, образует хлоргидрат.

Выход 77% (после перекристаллизации Е воде)

Т.пл. 288,8°С (разлагается).

Вычислено, %: С 50,80; Н 4,97; N 14,81; 5 СГ 12,50

Элементный анализ для C HisNsOsx HCi

Найдено, %: С 50,68; Н 4,92; N 14,67; CI 12,09

10. Хлоргидрат 2-гидрокси-3-(1 Н-ими- 0 дазол-4-ил)-метил -6-метилбензамида.

Нагревают в автоклаве при 60°С в течение 24 ч смесь, содержащую 2,0 г (7,68 ммоль) 2-гидрокси-3-(1 Н-имидазол-4-ил)- метил -6-метилбензоата этила (полученного 5 в примере 1.С.4) и 12 мл жидкого аммиака. Затем выпаривают смесь при пониженном давлении, Сырой амид обрабатывается без предварительной очистки, 1,1 эквивалентами хлороводородной кислоты в смеси эта- нол-диэтиловый эфир. Хлоргидрат

перекристаллизовывается в тетрагидрофу- ране.

Выход 49%.

ТПл. 164,8°С (смесь аморфного и кристаллического продуктов).

Вычислено, %: С 53,84; Н 5,27; N 15,70; СГ 13,24

Элементный анализ для С12Н1зМз02х xHCI

Найдено, %: С 52,55; Н 5,30; N 15,65; СГ 13,92

11; Хлоргидрат-моногидрат М,2-дигид- рокси-3-(1Н-имидазол-4-ил)-метил -бенза мида.

К смеси, содержащей 4,1 г (25 ммоль) сульфата гидроксиамина и 25 г колотого льда, прибавляют по капле раствор, состоящий из 5 г (125 ммоль) гидроксида натрия в 15 мл воды. Когда температура возвращается к 0°С, прибавляют 0,5 г твердого сульфита натрия, затем 6,15 г (25 ммоль) 2-гидрокси- 3-(1 Н-имидазол-4-ил)-метил -бензоата эти- ла. После полного растворения нейтрализуют реакционную среду посредством 20,8 мл 6 н.водного раствора хлорово- дородной кислоты. Отфильтровывают полученный осадок белого цвета, промывают его водой и очищают методом хроматографии на силикагеле (элюент: смесь дихлорметан-метанол-уксусная кислота-во- да 76:20:2:2 об./об./об.). Полученный после выпаривания растворителей ацетат извлекается посредством 30 мл воды, к которой прибавляют 5 мл концентрированной хлороводородной кислоты. Хлоргидрат М,2-ди- гидрокси-3-(1Н-имидазол-4-ил)-метил -бен замида осаждается в виде моногидрата. Получают 4,8 г чистого продукта.

Выход 55%. Т™. 240°С (разлагается).

Вычислено, %: С 45,92; Н 4,90; N 14,61; СГ 12,32

Элементный анализ для СцНц№Озх xHCI

Найдено, %: С 46,33; Н 4,63; N 14,69; СГ 12,57

Используемый в качестве исходного реагента 2-гидрокси-3-(1 Н-имидазол-4-ил)- метил -бензоат этила получен способом, описанным в примере 1в заявки на патент США Ns 4613108/23-04 на имя фирмы-заяви- теля.

12. 2-Гидрокси-3-(1 Н-имидазол-4-ил)- метил -4-метилбензамид.

Это соединение получено, как указано выше в п. 2, исходя из бромгидрата 2-гидро- кси-3-(1Н-имидазол-4-ил)-метил -4-метилб- ензоата метила (полученного в примере 1.С.5). Продукт реакции очищается методом хроматографии на силикагеле (элюент:

смесь дихлорметан-метанол-аммиак

95:5:0,5 об./об./об.). Выход 44%.

Тпл. 1 72-178°С (диэтиловый эфир). Вычислено, %: С 62,33; Н 5,62; N 18,18 Элементный анализ для С12НчзМз02 Найдено, %: 62,42; Н 5,61; N 18,08

13.Хлоргидрат 2-гидрокси-3- 1-{1 Н-ими- дазол-4-ил)-пентил -бензамида.

Это соединение получено, как указано выше в п. 5, исходя из 2-гидрокси-3- 1-{1Н- имидазол-4-ил)-пентил -бензоата этила (полученного в примере 1.А.З). Полученный после выпаривания растворителя остаток растворяется в 2.5 н.растворе хлороводородной кислоты в этаноле, и при добавлении диэтилового эфира выпадает в осадок хлоргидрат 2-гидрокси-3- 1 -(1 Н-имидазол-4- ил)-пентил -бензамида.

Выход 50%.

ЯМР-спектр (DMCO): дельта 0,83 (ЗН, т), 1,08-1,34 (4Н, м), 3,3-3,5 (2Н,м), 4,44(1 Н, т), 6,82 (1Н, т), 7,37-7,40 (2Н, С+д), 7,82 (1Н, д), 8,97 (1Н, с).

Следующие соединения были получены аналогичным способом.

14.2-Гидрокси-3-(1 Н-имидазол-4-ил)- метил -1 1,М-диметилбензамид.

Это соединение получено, как указано выше в п. 3, исходя из 2-гидрокси-3-(1Н- имидазол-4-ил)-метил -бензоата метила (полученного в примере 1.В.2) и диметила- мина.

Тпл. 208°С.

Найдено, %: С 63,58; Н 6,06; N 17,09 Элементный анализ для С1зНтбМз02 Вычислено, %: С 63,67; Н 6,12; N 17,14

15.Хлоргидрат 2-гидрокси-М- 2-гидро- ксиэтил /-3-/(1 Н-имидазол-4-ил)-метил -бе- нзамида.

Это соединение получено, как указано выше в п. 3, исходя из 2-гидрокси-3-(1Н- имидазол-4-ил)-метил -бензоата метила (полученного в примере 1.В.2) и 2-гидрокси- этиламина.

Тпл. 200,6°С.

Вычислено, %: С 52,44; Н 5,38; N 14,12

Элементный анализ для CisHisNsOsx xHCI

Найдено, %: С 52,49; Н 5,36; N 13,98

16.Хлоргидрат 3-(1 Н-имидазол-4-ил)- метил -2-метоксибензамида.

Это соединение получено, как указано выше в п. 10, исходя из 3-(1 Н-имидазол-4- ил)-метил -2-метоксибензоата метила (полученного в примере 1.В.1),

Сырой амид очищается методом хроматографии на силикагеле (элюент: смесь дихлорметан-метанол-аммиак 89:10:1 по объему).

Амид, обработанный 1,2 эквивалентами хлороводородной кислоты в этаноле, образует хлоргидрат.

Тпл. 160,5°С (изопропиловый спирт).

Вычислено, %: С 53,84; Н 5,27; N 15,73

Элементный анализ для С-|2Н1з№02 xHCI

Найдено, %: С 53,94; Н 5,30; N 15,81

17, 3-(1 Н-Имидазол-3-ил)-метил -2-н- пропоксибензамид.

Это соединение получено, как указано выше в п. 10, исходя из 3-(1 Н-имидазол-4- ил)-метил -2-н-пропоксибензоата метила (полученного в примере 1.В.З).

Тпл. 161°С.

Вычислено, %: С 64,86; Н 6,56; N 16,22 Элементный анализ для, Ci4Hi N302 Найдено, %: С 64,93; Н 6,60; N 16,14 1. Антиишемическая активность для

сердца.

а) Модель острой коронарной недостаточности у возбужденной собаки.

У подключенной к прибору (пневматическая манжета вокруг нисходящей нижней коронарной артерии и внутрисердечные электроды) возбужденной собаки закупоривание коронарной артерии продолжительностью 6 мин осуществляется посредством пневматической манжеты. По причине уменьшения подачи кислорода, что обусловлено вышеизложенным, это закупоривание вызывает ишемию миокарда, которая выражается на электрокардиограмме воспроизводимым и количественно оцениваемым увеличением сегмента ST. Анти- ишемическое действие соединения выражается уменьшением роста сегмента ST/P.R.

Для продуктов, подвергнутых испытанию, табл. 1 показывает дозу (ДЕ20, мкмоль/кг), которая, будучи введенной внутривенным путем группе из 10 животных, вызывает среднее уменьшение по меньшей мере на 20% роста сегмента ST для совокупности животных. В качестве ве- щества сравнения используют 1-(изопропи- ламино)-3-(1-нафтилокси)-2-пропанол (или пропанолол).

Из табл. 1 следует, что соединения, полученные в соответствии с изобретением, проявляют замечательную антиишемиче- скую активность.

в) Испытание нагрузкой на бегущей дорожке.

В этом испытании используют группу, по меньшей мере из 4 собак, подключенных к прибору (внутрисердечные электроды), которые на уровне коронарной артерии имеют стеноз органического происхождения. Последний вызывает дисбаланс между потреб5

Ю

5

0

5 0 5

0 5

0

5

ностью и подачей кислорода, когда животных заставляют произвести усилие. Этот дисбаланс выражается на электрокардиограмме ростом сегмента ST.

В испытании собака бежит со скоростью 12 км/ч по движущейся дорожке, имеющей наклон в 15°. Это максимальное усилие требуется в течение 1 мин. В ходе испытания регистрируют увеличение сегмента ST и естественное увеличение частоты ударов сердца. Эксперимент повторяется по меньшей мере 4 раза, и средняя величина из полученных значений берется в качестве величины сравнения (100%) для группы животных. Затем животному предоставляется отдых в течение как минимум 24 ч перед тем, как подвергнуть новому испытанию на усилие при действии изучаемого соединения.

Изучаемое соединение медленно вводят (за 1 мин) внутривенным путем за 5 мин до нового испытания нагрузкой. В ходе последнего регистрируют изменения тех же самых параметров.

В табл. 2 для указанной дозы (мкмоль/кг) приводится среднее уменьшение, наблюдаемое для сегмента ST и для частоты ударов сердца (удары/мин), по отношению к значениям для сравнения, полученным в первоначальном испытании.

Из табл. 2 следует, что соединения, полученные в соответствии с изобретением, проявляют хорошую антиишемичегкую активность, подтвержденную значительным уменьшением сегмента ST, что также установлено и для пропанола, но только при намного большей дозе. Более того, в противоположность пропанололу, который вызывает за то же самое время значительное уменьшение сердечного ритма в ходе испытания, что является нежелательным и вредным при сохранении нагрузки, соединения, полученные в соответствии с изобретением, не противодействуют естественному увеличению частоты ударов сердца в ходе испытания. Следовательно, они позволяют корректно адаптироваться сердечному ритму к нагрузке, полностью противодействуя ишемии.

2. Антиишемическая активность для мозга.

а) Глобальная и непрерывная ишемия мозга у крыс.

Крысы-самцы Wistar (200-250 г) анестезируются путем ингаляции галотана (1-5%), содержащегося в смеси N20-02 (70:30). Две общие сонные артерии одновременно перевязываются поблизости от места соединения внутренней сонной артерии и внешней

сонной артерии в соответствии с известной методикой.

Испытываемый продукт вводится внут- рибрюшинным путем в первый раз за 30 мин до перевязывания, а затем спустя 30 мин и 270 мин после перевязывания.

На следующий день или через день оценивают неврологическую недостаточность у выживших животных по известному методу.

Двигательно-чувственные функции, рассматриваемые в ходе этой оценки, следующие: спонтанная подвижность, хватательный рефлекс, визуальные реакции на перемещение и на потерю опоры, рефлекс сгибания лап, рефлекс распрямления и испытание на подвешивание за хвост. Максимально возможное число очков для животного, не подвергнутого ишемии, составляет 17.

В табл. 3 для соединения А, введенного внутрибрюшинным путем с дозой 0,76 мкг/кг (3,2 нмоль), приводится среднее значение числа неврологических очков, опреде- ленных для совокупности животных, выживших в группе свидетелей и в обработанной группе, зарегистрированных 2 дня спустя после перевязывания. Статический фактор (Р) различия, наблюдаемого между этими средними значениями, оценивается по тесту Mann-Whitney.

Из табл. 3 следует, что соединение А при очень малой дозе значительно ослабляет неврологическую недостаточность, вызванную ишемией, у обработанных животных.

в) Односторонняя многофокальная ишемия мозга у крыс.

У возбужденных крыс-самцов Sprague- Dawley SPF в возрасте 8-9 недель вызывают одностороннюю непрерывную ишемию мозга (или эмболию) путем введения в поток крови правой сонной артерии 2000 микросфер после постоянной перевязки артерии правой небной мышцы.

Изучаемое соединение вводится в первый раз за 30 мин до эмболизации, а во второй - 30 мин спустя после эмболизации, в то время как животные-свидетели получают только физиологический раствор,

Затем животным дают отдохнуть. После 6-дневного восстановления у выживших животных измеряют:

1) остаточную неврологическую недостаточность при помощи теста на положение тела и на походку животных (тест А, максимальное число очков 4). Этот тест оценивает:

а) ненормальное положение задних лап;

b)боковой наклон тела в ходе движения;

c)продольное сгибание тела с одной стороны;

d)ненормальную походку.

2) Двигательно-чувственные функции

(спонтанную подвижность, хватательный рефлекс, визуальные реакции на перемещение и на потерю опоры (тест В, максимальное число очков 10).

3) Двигательно-чувственный ответ стороны тела, обладающей функциональным превосходством (противоположной стороны) (тест С, максимальное число очков 3). Он оценивается при комбинировании визуального рефлекса перемещения, рефлекса ориентации головы в направлении бокового чувственного раздражителя и рефлекса подошвенной кожи.

4) Потеря осязания левой стороной (тест

Д, максимальное число очков 300). В отличие от других указанных выше тестов, для которых недостаточность тем меньше, чем больше число очков, в данном случае недостаточность тем более явная, чем ближе число очков к 300.

На 7-й день восстановления измеряют также отек, присутствующий в различных боковых структурах мозга.

В табл. 4 для соединения А, введенного

внутрибрюшинно дозой 0,76 мкг/кг (3,2 нмоль/кг), приводятся результаты, полученные в тестах А-Д, т.е. среднее значение числа неврологических очков, определенных для совокупности выживших животных

из группы свидетелей и из обработанной группы, после 6-дневного восстановления. Там также приводится среднее отклонение (г) от веса тела, измеренное на 7-й день восстановления.

Статистический фактор (Р) различия между средними значениями, рассчитанными для животных-свидетелей и обработанных животных, оценивается по тесту Mann-Whitney,

Табл. 4 показывает, что соединение А значительно уменьшает неврологическую недостаточность и отклонения в поведении, вызванные ишемией, и улучшает весовое развитие обработанных животных.

В табл. 5 указывается количество воды (среднее процентное содержание), удерживаемое в различных боковых структурах мозга у животных-свидетелей и у обработанных животных, выживших на 7-й день

после эмболизации.

Полученные результаты показывают, что обработка соединением А значительно уменьшает боковую опухоль в различных изученных структурах мозга.

3, Агонистическое ог-адренергическое свойство.

а) Конкурентное связывание с радиоактивным лигандом.

Эксперименты по конкурентному связыванию имеют целью измерить сродство полученных в соответствии с изобретением соединений по отношению к оа-адренерги- ческим рецепторам. Эти классические эксперименты основаны на конкурентном связывании «2-адренергическими рецепторами, с одной стороны, изучаемого соединения, а с другой стороны - радиоактивного лиганда, который в этом частном случае для 22-адренергических рецепторов является (3Н)-клонидином, известным в качестве селективного (22-адренергического агониста.

Кривые смещения связывания ( Н)-кло- нидина определены для девяти концентраций соединения А, заключенных между значениями и моль/л, и для трех различных пленочных препаратов мозга крыс. Образцы инкубировались в течение 30 мин, затем фильтровались под вакуумом на фильтре Whatman GF/B. Фильтры промываются три раза 5 мл буферного раствора Tris- HCI (рН 7,5 при 0°С), затем сушатся в течение 1 мин. Уровень радиоактивности измеряется в среде Econofluor (фирма NEN Corp.). Используемый (3Н)-клонидин (25,5 ci/ммоль) поставляется фирмой Amersham, Сродство соединения А по отношению к а.т адренергическим рецепторам рассчитано исходя из кривых замещения (3Н)-клониди- на. Оно выражается концентрацией (ICso в моль/л) соединения А, необходимой для получения 50%-ного ингибирования связывания радиоактивного лиганда рецепторами. Полученные результаты показывают, что соединение А имеет большое сродство по отношению к оа-адренергическим рецепторам:

ICso 8,90 ± 0,72 х моль/л.

в) Стимулирование изолированного предсердия морской свинки.

Выделение норадреналина на уровне нервных окончаний регулируется механизмом обратного захвата пре-синаптическими ог2-адренергическими рецепторами. Этот механизм подтвержден на предсердии морских свинок.

Электростимулирование изолированного предсердия морской свинки вызывает выделение норадреналина, что выражается в увеличении частоты ударов сердца (тахикардия). Эта тахикардия замедляется аг- агонистом, например клонидином, в пропорции, которая зависит от дозы используемого агониста. Действие «2-агониста может быть ограничено присутствием 02-специфического антагониста, такого как альфа-иогимбин.

Активность in vitro соединений, полученных в соответствии с изобретением, по отношению к пре-синаптическим «2-адре- нергическим рецепторам изучено на изолированном предсердии морских свинок, электростимулированном в соответствии с

известным методом.

Изучаемое соединение испытывается при возрастающих концентрациях, заключенных между значениями и моль/л. Определяют концентрацию (Сзо в

моль/л), которая вызывает 30%-ное уменьшение максимальной тахикардии, полученной первоначально в ходе Злектростимулирования предсердия в отсутствие испытываемого соединения.

Табл. 6 показывает концентрации Сзо (моль/л), полученные для соединений, приготовленных в соответствии с изобретением, а также для клонидина.

Из табл. 6 следует, что соединения, полученные в соответствии с изобретением, противодействуют тахикардии, вызванной электростимулированием, при очень малых концентрациях.

Вместе с тем, в присутствии альфаиогимбина с концентрацией 10е моль/л концентрация соединения А, необходимая для получения 30%-ного уменьшения тахикардии, превышает моль/л. Эти результаты хорошо показывают, что соединения,

полученные в соответствии с изобретением,

действуют по специфическому механизму

посредством «2-агонистического действия.

с) Стимулирование подвздошной кишки

морской свинки.

Фрагменты продольных мускулов, соединенные с указателем изометрической силы, погружены в раствор Tyrode и растягиваются с силой в 1 г.

Электростимулирование парасимпатических нервов, соответствующих фрагментам подвздошной кишки, вызывает сокращение мышцы. Это сокращение уменьшается в присутствии пре-синаптиче- ского сф-агониста, и уменьшение зависит от

применяемой концентрации агониста. Этот эффект является антагонистичным по отношению к одновременному присутствию ац- антагонистического соединения, такого как альфа-иогимбин.

Изучаемые соединения испытываются при возрастающих концентрациях, заключенных между значениями и моль/л.

Определяют концентрацию (ICso в моль/л), которая уменьшает на 50% интенсивность сокращения мышцы.

В табл. 7 приводятся концентрации ICso (в моль/л), полученные для соединений, приготовленных в соответствии с изобретением. Эти результаты показывают, что соединения проявляют хорошую активность при очень малых концентрациях.

В присутствии альфа-иогимбина с концентрацией 10 моль/л концентрация соединений А или В, например, которая необходима для уменьшения на 50% интенсивности сокращения мышцы, является более высокой и становится больше моль/л, что дает дополнительное подтверждение тому, что соединения, полученные в соответствии с изобретением, хорошо действуют на уровне пресинаптических ренергетических рецепторов.

4.Диуретическая активность. Диуретическая активность соединений,

полученных в соответствии с изобретением, определялась у собак Blagle (6 самок и 6 самцов) посредством изучения пермутация- ми, случайным образом пересекающимися шестью способами.

Изучаемое соединение вводится внутривенно с возрастающими дозами 2, 6,5,20, 65 и 200 мкг/кг. В течение 3 первых часов, которые следуют за введением, измеряют объем выделяемой мочи.

Табл. 8 для соединения А дает среднее относительное увеличение (в %) объема выделяемой мочи по отношению к группе животных, которые не получили продукт.

Результаты показывают, что минимальная активная доза, которая вызывает статистически значимое увеличение (Р 0,05) выделения мочи, составляет 6,5 мкг/кг для самцов, тогда как для самок эта доза составляет 2 мкг/кг.

5.Токсичность.

Токсичность соединений, полученных в соответствии с изобретением, определяли у мышей-самцов NMRI при помощи теста Ирвина.

Прогрессирующие дозы изучаемого продукта вводятся внутрибрюшинно группам из трех мышей до достижения смертельной дозы (дозы, вызывающей смерть двух животных из трех через 48 ч).

В табл. 9 приводится смертельная доза, наблюдаемая для соединений, полученных в соответствии с изобретением. Из табл. 9 следует, что соединения, полученные в соответствии с изобретением,являются очень малотоксичными.

Формула изобретения Способ получения замещенных 1-(1Нимидазол-4-ил)-алкилбензамидов общей

формулы

R -°syRi

R

где RI и Ra, которые могут быть идентичными или различными, представляют собой (каждый) атом водорода или алкильный радикал, содержащий 1-4 атомов углерода;

Rs-атом водорода, алкильный радикал, содержащий 1-4 атомов углерода, гидро- ксиалкильный радикал, содержащий 1-4 атомов углерода, аминогруппу или гидроксильную группу;

Рд-атом водорода или алкильный радикал, содержащий 1-4 атомов углерода;

RS - атом водорода, гидроксильная группа или алкоксирадикал, содержащий 14 атомов углерода;

Re - атом водорода, гидроксильная группа или алкильный радикал, содержащий 1-4 атомов углерода, причем по меньшей мере один из символов RS и Re имеет

значение отличное от водорода,

или их солей присоединения с кислотами нетоксичными и фармацевтически приемлемыми, отличающийся тем, что проводят реакцию 1-(1Н-имидазол-4-ил)-алкилбензоата алкила формулы

Я Ј г N

7° стО-I-if 6 , н

н

где RI, R2, RS и Re имеют указанные значения,

a RI - алкильный радикал, содержащий 1-4 атомов углерода,

с азотсодержащим соединением формулы

HN

R- RI

где Ra и R4 имеют указанные значения, и выделяют полученные таким образом 1- (1Н-имидазол-4-ил)-алкилбензамиды в свободном виде или в виде их солей присоединения с кислотами, нетоксичными и фармацевтически приемлемыми.

27

1830063

28 Таблица 1

Использование: в качестве препаратов, обладающих антиишемическими сойствами и свойствами агонистов О2-адренергиче- ских рецепторов. Сущность изобретения; продукт общей формулы нм 3 Rt Изобретение относится к способу получения новых замещенных 1-(1Н-имидазол- 4-ил)-алкилбензамидов, а также их солей присоединения с кислотами, которые могут найти применение в терапии. Цель изобретения - синтез новых соединений в ряду 1Н-имидазолов, обладающих не только характерными для данного ряда свойствами, но и свойствами агонистов од-адренергических рецепторов с помощью известного способа получения амидов. где RI и R2, одинаковые или различные, - водород или алкил Ci-4; Рз водород, алкил d-4, гидроксиалкил, содержащий 1-4 атома углерода, аминогруппу или гидроксильную группу; R4 - водород или алкил Ci-4; Rs - водород, гидроксильная группа, алкоксиг- руппа, содержащая 1-4 атома углерода; Re - водород, гидроксильная группа или алкил, содержащий 1-4 атома углерода, причем по меньшей мере один из RS и Re имеет значение, отличное от водорода. Реагент I: продукт общей формулы где RI, R2, Rs и Re имеют указанные значения; R алкил, содержащий 1-4 атома углерода. Реагент 2: продукт формулы HN -R3 R4 СП С где Ra и R4 имеют указанные значения. Возможно выделение в виде соли. 3 пр., 9 табл. Поставленная цель достигается предлагаемым способом получения соединений общей формулы R. R 0) 00 со о о о со со в которой RI и R2 одинаковые или различные, водород или алкильный радикал, содержащий 1-4 атомов углерода;

Примечание: Продукт:

А - хлоргидрат 2-гидрокси-3-(1Н-имидазол-4-ил)-метил -бенза- мида;

В - хлоргидрат 2-гидрокси-3- 1-(1 Н-имидазол-4-ил)-этил -бенза- мида;

С - хлоргидрат 2-гидрокси-3-(1 Н-имидазол-4-ил)-метил -М-ме- тилбензамида;

D - 2-гидрокси-3-(1 Н-имидазол-4-ил)-метил -бензогидразид;

Е - хлоргидрат 2-гидрокси-1 1-(2-гидроксиэтил)-3-(1 Н-имидазол- 4-ил)-бензамида;

F - хлоргидрата 3-(1Н-имидазол-4-ил)-метил -2-метоксибенза- мида;

G - 2-гидрокси-5-(1 Н-имидазол-4-ил)-метил -бензамид;

N - хлоргидрат 2,6-дигидрокси-3-(1Н-имидазол-4-ил)-метил - бензамида;

I - 5-трет-бутил-2-гидрокси-3-(1 Н-имидазол-4-ил)-метил -бенза- мид;

J - хлоргидрат 2-гидрокси-3-(1Н-имидазол-4-ил)-метил -6-ме- тилбензамида;

К - 2-гидрокси-3-(1 Н-имидазол-4-ил)-метил -4-метилбензамид;

L - хлоргидрат Ы,2-дигидрокси-3-(1Н-имидазол-4-ил)-метил - бензамида;

М - хлоргидрат (+)-2-гидрокси-3- 1-(1Н-имидазол-4-ил)-этил - бензамида.

Таблица 2 Максимальная нагрузка при 12 км/ч в течение 1 мин

29

n - число выживших животных.

Среднее число неврологических очков 6 дней спустя после эмболизации

п указывает число выживших животных в каждой группе.

Таблица 5

О

Количество воды в различных боковых структурах мозга (среднее %-ное содержание)

п указывает число выживших животных в каждой группе.

Уменьшение тахикардии

п n - число опытов.

1830063

30 Таблица 3

Таблица 4

Таблицаб

Таблица

Замедление сокращения подвздошной кишки морской

свинки

п - число опытов.

Таблицаб Среднее относительное увеличение выделения мочи, %

Анализ отклонений: - Р 0,05

-Р 0,01 п число животных.

Таблица 9

Токсичность