сл С
Использование: в качестве препарата, обладающего мочегонной, противовоспалительной и гипотонической активностью. Сущность изобретения; продукт общей формулы О ОН R, Н,М-С1 & Н 1 N Н где RI - водород или С1 С4-алкил. Выход 70%, Реагент I: соответствующий 2-окси-З- 1-(1Н-имидазол-4-ил-алкил -бензонитрил. Гидролиз в кислой среде. Выделение в свободном виде или в виде нетоксичных фармацевтически приемлемых солей кислот. 2 пр. 9 табл.
Изобретение относится к способу получения новых замещенных 2-окси-3- 1Н- имидазол-4-ил)алкил -бензамидов, а также их нетоксичных, фармацевтически приемлемых солей кислот, которые могут использоваться в терапии, общей формулы I
ОН R,
где RI - водород или Ci-C/j-алкил.
Известен способ получения амидов гидролизом нитрилов.
Цель изобретения - синтез новых бен- замидов с использованием известной реакции получения амидов гидролизом нитрилов, обладающих мочегонной, противовоспалительной и гипотонической активностью и значительно превосходящих по своей активности препарат пропранолол.
Ц ель достигается предлагаемым способом получения соединении общей формулы I гидролизом в кислой среде 2-окси-3- 1-(1 Н- имидазол-4-ил)алкил -бензонитрила общей формулы II
ОН R,
ЫнС
Н
N
Ъ
N Н
где RI имеет указанные значения.
Пример. Получение исходных 2-ок- си-3- 1-(1Н-имидазол-4-ил)алкйл -бенэонит рилов формулы.
1а. Этил-4-бензилокси-2-(1Н-имидазол- 4-ил)метил -3-оксо-бутаноат.
00 OJ
о
CJ
сл
А
со
При 10°С добавляют за один раз 182 г (0,77 моль)4-бензилокси-3-оксо-бутаноата в раствор 16,9 г (0,735 моль) натрия в 590 мл абсолютного этанола. Смесь перемешивают в течение 45 мин при температуре окружающей среды, затем охлаждают до -45°С и добавляют в нее за один раз раствор 53,6 г (0,35 моль) хлоргидрата 4-хлорметил-1Н- имидазола в 300 мл абсолютного этанола. Смесь доводят до температуры окружающей среды и перемешивают в течение 1 ч. Затем выпаривают суспензию досуха, Осадок поглощают раствором 35 мл концентрированной хлористоводородной кислоты в 900 мл воды и экстрагируют несколько раз диэтилоеым эфиром. Водную фазу нейтрализуют раствором 18 г гидроокиси натрия в 200 мл воды и экстрагируют несколько раз этилацетатом. Органические фазы промывают водой и насыщенным водным раствором хлорида натрия. Высушивают на сульфате натрия и выпаривают при пониженном давлении. Получают 107 г практически чистого этил-4-бензилокси-2-(1Н-имидазол-4-ил)ме- тил -3-оксо-бутаноата,
Выход 97%.
ЯМР-спектр (DMSO): 1, 11 (ЗН, t). 2,98 (2Н. т), 4,05(2H,q), 4,08(1Н,т), 4.25(2Н, dd). 4,47 (2Н . S), 6,75 (1Н. S), 7,25-7,39 (5Н, т), 7,47 (1H,d).
1 б. Этил-4-бензилокси-3-окси-2-(1 Н- имидазол-4-ил)метил -бутаноат.
В раствор 101,2 г (0,32 моль)этил-4-бен- зилокси-2-(1Н-имидазол-4-ил)метил -3-ок- со-бутаноата в 600 мл этанола, охлаждение-. го до -20°С, добавляют за один раз ледяной раствор 6,03 г(0,16.моль)боргидрида натрия в 25 мл воды. Доводят раствор до температуры окружающей среды и перемешивают в течение 1 ч. Затем добавляют25 мл ацетона. Выпаривают раствор досуха и поглощают осадок посредством 500 мл воды. Экстрагируют несколько раз этилацетатом. Органические фазы промывают водой и насыщенным водным раствором хлорида натрия. Высушивают на сульфате натрия и выпаривают растворитель при пониженном давлении. Осадок очищают хроматографией на силикагеле (элюант: смесь дихло(5метан:метанол:аммиак в объемном соотношении 93,5:6:0,5. Получают 95,8 г этил-4-бензилокси-3-окси-2-(1 Н-имидазол -4-ил)метил -бутаноала (смесь диастереои- зомеров). Выход 94%.
ЯМР-спектр (CDCIa): дельта 1.15 и 1,16 (ЗН, 2t); 2,90-3,05 (ЗН, т); 3,51-3,58 (2Н. т); 3,96-4,11 (ЗН, 2q + 1т): 4,51 и4.53(2Н. 2S): 6,73-6,75 (1Н, 2S); 7,25-7,36 (5Н, т).
1в. Хлоргидрат 4 -окси-3-(1 Н-имидазол- 4-ил)метил -дигидро-2(3)-фу района.
Гидрогенизируют 93,9 г (0,295 моль), этил-4-бензилокси-3-окси-2-(1Н-имидазол- -4-ил -бутаноата в растворе в 500 мл абсолютного этанола и 65 мл раствора хлористоводородной кислоты 6,8 н. в этаноле в присутствии 5 г 10%-ного палладия на угле и при давлении 3,5 бар. Затем фильтруют катализатор и удаляют растворитель при 65°С при пониженном давлении. Получают
67,1 г хлоргидрата 4-окси-3-(1 Н-имидазол- 4-ил)метил -дигидро-2(ЗН)-фуранона (смесь диастереоизомеров). Практически количественный выход.
Соединение используют в чистом виде
5 на следующем этапе.
1г. Н-Имидазол-4-ил)метил -2(5Н)- фуранон.
Нагревают в течение 75 мин при 160°С, при давлении 0,0013 мбар 67,1 г (0,295 моль)
0 хлоргидрата 4-окси-3-(1 Н-имидазол-4- ил)метил -дигидро-2(ЗН)-фуранона. Охлаждают и поглощают посредством 125 мл абсолютного этанола. Нейтрализуют путем добавления 70 мл раствора аммиака 5 н. в
5 этаноле. Фильтруют суспензию и удаляют растворитель при пониженном давлении. Осадок очищают хроматографией на силикагеле (элюант: смесь дихлорметан:мета- нол:аммиак в объемном соотношении
0 91,5:8:0,5), После рекристаллизации в аце- тонитриле получают 27,5 г ЗН(1 Н-имидазол- 4-ил)метил -2(5Н)-фуранона. Выход 53% (рассчитанный вместе по этапам 1в и 1г). Точка плавления 123°С.
5
ЯМР-спектр (CDCIa): дельта 3,63 (2Н, q); 4,79 (2Н, q); 6,90 (1Н, d); 7,25 (1Н, квинтуп- лет):7.52(1Н, d).
1д. 2-окси-3-(1 Н-имидазол-4-ил)-ме0 тил -бензонитрил,
В суспензию 24,6 г(0,15моль)3-(Н-ими- дазол-4-ил)метил -2(5)-фуранона в 225 мл безводного акрилонитрила последовательно добавляют 63 мл (0,45 моль) безводного
5 триэтиламина и 57 мл (0,45 моль) триметил- хлорсилана. Смесь нагревают в рефлюксе (72-74°С) в течение 4 ч. Затем выпаривают при пониженном давлении. Осадок обрабатывают за один раз посредством 75 мл кон0 центрированного бромистого водорода и выдерживают при 80°С в течение 2 мин. Затем раствор выливают на лед, разбавляют путем добавления 300 мл этилацетата и 300 мл воды и нейтрализуют твердым бикар5 бонатом натрия. Фильтруют на цеолите, а фильтрат экстрагируют несколько раз этилацетатом. Органические фазы промывают водой и насыщенным водным раствором хлорида натрия, затем высушивают на сульфате натрия и выпаривают при пониженном
давлении. Полученный осадок истирают в порошок в диэтиловом эфире. Получают 22,8 г 2-окси-3-(1Н-имидазол-4-ил)метил - бензонитрила. Выход 76%.
ЯМР-спектр (DMSO): дельта 3,90 (2Н, S); 6,88 (1Н, t); 7,06 (1Н, S); 7,41 (1Н, dd): 7.47 (1Н, dd); 7,99(1 H.d).
Его хлоргидрат плавится при 245°С.
2а. Этил-4-бензилокси-2-{1-(1 Н-имида- зол-4-ил)этил -3-оксо-бутаноат,
Это соединение получают, как в примере 1а из этил-4-бензилокси-3-окср-бутзноа- та и 4-(1-хлррэтил)-1Н-имидазола.
Выход 68% (смесь диастереоизомеров).
ЯМР-спектр (CDCb): дельта 1,10 и 1,22 (ЗН, 2t); 1,33 и 1,36 (ЗН, 2d): 3,60-3,72 (1Н, т); 3.93-4,20 (ЗН, т); 4.47 и 4,55 (1Н, 2S); 6,70 и 6,74 (1 Н, 2S); 7,26-7,35 (5Н, т); 7,41 и 7.45 (1H.S + d).
Это соединение получают, как в примере 16, путем восстановления этил-4-бензи- локси-2- 1-(1Н-имидазол-4-ил)этил -3-оксо- этилбутаноата. Выход 91% (смесь диастеро- изомеров).
Масс-спектр:
332 (М+). 314. 287, 211.181. 135. 95. 91.
2в. Хлоргидрат 4-окси-3- 1-(1Н-имида- зол-4-ил)этил)-дигидро-2(ЗН)-фуранон.
Это соединение получают, как в примере 1в, путем гидрогенолиза этил-4-бензи- локси-3-окси-2- 1-(1Н-имидазол-4-ил) бутаноата. Практически количественный выход. Получают смесь диастереоизомеров, которую используют в чистом виде на следующем этапе.
2г. (1Н-имидазол-4-ил)(5Н)- фуранон.
Нагревают в течение 1 ч при 170°С, при давлении 13.3 мбар 75,1 т (0.32 моль) хлор- гидрата 4-окси-3- 1-(1 Н-имидазол-4- ил) дигидро-2(ЗН)-фуранона в 30 мл этиленгликоля. Затем удаляют растворитель при давлении 0,0013 мбар. Осадок поглощают в 300 мл абсолютного этанола и нейтрализуют путем добавления 63,2 мл раствора аммиака 5 н.. в этаноле. Фильтру- ют суспензию и выпаривают растворитель при пониженном давлении. Осадок очищают путем хроматографии на силикагеле (элюант: смесь дихлорметан:метанол:амми- ак в объемном соотношении 91,5:8:0,5). После рекристаллизации в ацетонитриле получают 41,9 г Зт.1-(1 Н-имидазол-4- ил)(5Н)-фуранона. Выход 74% (рассчитанный совместно по этапам 2в и 2г). Точка плавления 127-129°С.
ЯМР-спектр (DMSO): дельта 1,40(3H.d); 3,72 (1Н, q); 4.84 (2Н, t); 6,80(1Н. t); 7,35 (Ж, q);7,51 (1H. S).
2д, 2-Окси-3- 1-(1Н-имидазол-4ил)этил -бензонитрил. .
В суспензию 17,8 г (0,1 моль) 3-{1-(1Н- имидазол-4-ил)(5Н)-фуранона Ф 150 мл безводного акрилонитрила последовательно добавляют 56 мл (0,4 моль) безводно0 го тризтиламина и 50,7 мл (0,4 моль) триметилхлорсилана. Смесь нагревают в ре- флюксе в течение 3,5 ч. Затем выпаривают реакционную смесь при пониженном давлении. Осадок обрабатывают за один раз по5 средством 50 мл концентрированной хлористоводородной кислоты и выдерживают при 80°С в течение 2 мин. Затем раствор выливают на лед, нейтрализуют насыщенным водным раствором бикарбоната на0 трия и экстрагируют несколько раз этилацетатом. Органические фазы промывают водой и насыщенным водным раствором хлорида натрия, затем высушивают на сульфате натрия и выпарива5 ют при пониженном давлении. Осадок очищают путем хроматографии на силикагеле (элюант: смесь дихлорметан:мета- нол:аммиак в объемном соотношении 93,5:6:0,5 . Получают 17,6 г 2-ркси-3- Ч1Н0 имидазол-4-ил)этил -бензонитрила практически в чистом виде. Выход 83%, Точка плавления 172°С.
ЯМР-спектр (DMSO): дельта 1,52 (ЗН, d); 4,21 (1 H.q); 6.86 (1Н, t); 7,02(1 Н, S); 7.41(1Н,
5 dd); 7,44 (1H,dd); 7,85 (1H.S).
Это соединение получают как в примере 2 из этил-4-бензилокси-З-оксо-бутаноата и
0 4-(1-хлорпентил)-1Н-имидазола. Полученное соединение используют в чистом виде на следующем этапе.
; П р и м е р 2. Получение 2-окси-3- 1-(1 Н- имидазол-:4-ил)алкил -бензамидов формулы
5 I путем гидролиза 2-окси-3- 1 -(1 Н-имидазол- 4-ил)алкил -бензонитрилов формулы II.
Перемешивают до полного растворения
0 13,1 г (66 ммоль) 2-окси-3-(1 Н-имидазол-4- ил)метил -бензонитрила (полученного по примеру 1.1) в 50 мл водного раствора 80%- ной серной кислоты (об,). Затем нагревают до 65°С в течение 3 ч. Реакционную смесь
5 выливают на лед и нейтрализуют бикарбонатом натрия, фильтруют и многократно экстрагируют фильтрат этилацетатом.
Органические фазы промывают насыщенным водным раствором хлорида натрия, высушивают на сульфате натрия и выпаривают при пониженном давлении. Осадок очищают путем хроматографии на силикагале (элюант: смесь дихлорметан:метанол:аммиак в объемном соотношении 84:15:1. Получают 9,8 г 2-окси-3-{(1Н-имидазол-4-ия)метил}-бензами- да. Выход 68%. Точка плавления 197,6°С,. .. Анализ для СпНпМзОз, %: расчетный: С 60,83; Н 5,07; N 19,35. фактический: С 60,91; Н 5,06; N 19,32.
2,Хлоргидрат 2 окси-3-(1 Н-имидазол- 4-ил)метил -бензамид.
Добавляют 2г2-окси-3-(1 Н-имидазол-4- ил)метил -бензонитрила (полученного по примеру 1.1) и 4 мл воды в 40 мл метанола, предварительно насыщенного при-10°С газообразным потоком хлористоводородной кислоты. Смесь перемешивают в течение 24 ч при температуре окружающей среды. Затем концентрируют раствор при пониженном давлении и нагревают осадок при 75°-С в течение 3 ч. Затем осадо к- дважды рекристалли- |уют в воду. Получают 1,5 г хлоргидрата 2-оксй-3-(1Н-имидазол-4-ил)метил -бензами- да. Выход 59%. Точка плавления 287,8°С.
Анализ для CiiCnN302 -HCI, %:
расчетный: С 52,07; Н 4,73; N 16,57; С 14,0.
фактический: С 52,04; Н 4,76; N 16,54; СГ 13,94.
Перемешивают при 65°С в течение 3 ч суспензию 1,07,г (5 ммоль) 2-окси-3- 1-(1Н- имидазол-4-ил)этил -бензонитрила (полученного по примеру 1.2) в 4 мл водного раствора 80%-ной серной кислоты (об). Затем реакционную смесь выливают на лед и нейтрализуют бикарбонатом натрия. Экстрагируют несколько раз этилацетатом. Органические фазы высушивают на сульфате натрия, а растворитель выпаривают при пониженном давлении. Осадок поглощают посредством 50 мл водного раствора хлористоводородной кислоты 6 н. и затем нейтрализуют посредством водного раствора гидроокиси натрия 1 н. Образовавшийся осадок фильтруют, промывают водой и диэтиловым эфиром и высушивают в вакууме. Получают 0,7 г 2-окси-3- 1-(1Н-ими- дазол-4-ил)этил -бензамида (В) в практически чистом виде. Выход 70%.
Полученное соединение преобразуют в хлоргидрат в этаноловом растворе хлористоводородной кислоты в присутствии диэти- лового эфира. Точка плавления 240-243°С,
Анализ для Ci2Hi3N302-HCI, %:
расчетный: С 53.83: Н 4.86; N 15.70: СГ 13,27.
фактический: С 54,0; Н 4,88; N 15,73; СГ 13,17.
Рацемический 2-окси-3- 1-(1Н-имида- зол-4-ил)этил бензамид (полученный в п.З) разлагают на его два энантиомера путем хроматографии на хиральной фазе альфа- гликопротеин (элюант: изопропиловый спйрт:фосфатный буферный раствор 0,02 моль; рН 7; в объемном соотношении 1:99. Затем преобразуют каждый энантимер амида в соответствующей хлоргидрат указанным способом. Таким образом получают в почти равных количествах: а) хлоргидрат гидратированного (+)-2- окси-3- 1 -(1 Н-имидазола-4-ил)этил -бенза - мида.Точка плавления 107,8 С (вода). +82,04° (с) 1, метанол). ЯМР-спектр-(ОМЗО): дельта 1,57(ЗН, d); 3,30 (5Н (5Н, т); 4,56 (1Н, q); 6,83(1 Н, t); 7,23 (1 Н, dd); 7,40(1 Н, S); 7,82 (1Н, dd); 7,92 (1 Н, т); 8,51 (1Н, т); 8,98(1 H,d), 13,5-14.5 (2Н, т).
б) хлоргидрат гидратированного (-)-2- окси-3- 1-(1 Н-имидазол-4-ил)этил -бензами- да. Точка плавления 107,4°С(вода). ф25 -79,13° (с 1, метанол). ЯМР-спектр: идентичен предыдущему.
Это соединение получает, как в п. 1 из 2-окси-3- 1-(1 Н-ймидазол-4 Ил)пентил -бен- зонитрила (полученного по примеру 1.3),
Полученный таким образом 2-окси-3-{1- (1 Н-имидазол-4-ил)пентил -бензамид раство- ряют в растворе хлористоводородной кислоты 2,5 н. в этаноле, а хлоргидрат 2-ок- си-3-{1-(1Н-имидазол-4-ил)пентил -бенза- мида осаждают путем добавления диэтилового эфира.
ЯМР-спектр (DMSO): дельта 0,83 (ЗН, t); 1,08-1,34 (4Н, т); 3-3-3,5 (2Н, т); 4,44 (1 Н, t); 6,82 (1Н, t); 7,37-7,40 (2Н. S + d); 7,82 (1Н, d); 8,97. (1H.S):..
Фармакологическим испытаниям под- вергались следующие соединения, полученные согласно изобретению:
хлоргидрат 2-окси-3-(1 Н-имидазол-4- ил)метил -бензамид (соединение А),
хлоргидрат 2-окси-3- 1-(1 Н-имидазол-4- ил)этил -бензамид (соединение В);
хлоргидрат (+) -2-окси-3- 1-(1Н-имида- зол-4-ил)этил -бензамид (соединение С).
а). Модель острой коронарной недостаточности у живой собаки.
У живой собаки, снабженной приспособлениями (пневматическая манжетка вокруг нижней и исходящей коронарной ар
терпи и внутрисердечные электроды), на 6 мин перекрывается коронарная артерия посредством пневматической манжеты, что вызывает миокардную ишемию/которая отражается на электрокардиограмме посредством повышения линия S т. Противо- ишемическое действие соединения выражается в уменьшении повышения сегмента S г,
В табл. 1 показано, что соединения, подвергшиеся испытанию при дозе DEao, ммоль/кг, и введенные внутривенно группам из 10 животных, вызывают среднее уменьшение, по меньшей мере на 20% повышения линии Sr у всех животных. В качестве контрольного соединения используют 1-(изопропил-аминоэ-3-(1-нафти- локси)-2-пропинол (или пропанолол).
Из табл. 1 видно, что соединения, полученные согласно изобретению, обладают поразительной противоишемической активностью.
б). Испытание на бегущей дорожке. Использована группа из по меньшей мере 4 собак, снабженных приспособлениями (внутрисердечные электроды), .которые имеют на уровне коронарной артерии органический стеноз. Он вызывает нарушение равновесия между потребностью и притоком кислорода, когда от животного требуется нагрузка. Это нарушение равновесия отражается на электрокардиограмме путем повышения линии ST.
При испытании собака бежит со скоростью 12 км/ч по бегущей дорожке с уклоном 15° в течение 1 мин. При испытании регистрируется повышение линии Зги естественное повышение частоты биения сердца. Эксперимент повторяют по меньшей мере 4 раза, а среднее из полученных значений принимается за контрольное значение (100%) для группы животных. Затем животное оставляют в покое как минимум 24 ч перед новым испытанием под действием изучаемого соединения.
Изучаемое соединение медленно вводится (за 1 мин) внутривенно за 5 мин перед новым испытанием усилия. В ходе испытания регистрируются те же самые параметры. В табл. 2 приводится для указанной дозы среднее наблюдаемое уменьшение ли- -нии Sr (в%) и снижение частоты биения сердца (биение/мин) по отношению к значениям частоты, получаемым в ходе первоначального испытания.
Из табл. 2 видно, что соединение А обладает хорошей противоишемической активностью, подтвержденной сильным уменьшением линии Sr , что также отмечается при использовании пропранолола, но
только при намного увеличенной дозе. Кроме того, в противоположность пропрано- лолу, который одновременно вызывает сильное снижение сердечного ритма в течение испытания, что нежелательно и вредно для поддержания усилия, соединение А не препятствует естественному повышению частоты биения сердца в ходе испытания. Следовательно, оно способствует правильной адаптации частоты биения сердца по отношению к усилию с одновременным пре- пятствованием ишемии.
а). Общая перманентная мозговая ишемия у крыс.
Самцы крыс (рода Вистар (масса 200- 250 г) анестезируются путем ингаляции га- лотана (1-5%), содержащегося в смеси N02-02
(70:30). Обе общие сонные артерии одновременно перевязываются вблизи перекрестка внутренней сонной артерии и наружной сонной артерии по технологии, описанной М.Лё Понсэн-Лафит и др. Фармакологический журнал (Париж). 14, (1983), 99-102.
Тестируемое соединение вводится внутрибрюшинным путем первый раз за 30 мин перед перевязыванием и затем через 30 и 270 мин после перевязывания.
На следующий день и через день определяют неврологический дефицит у выживших животных по известному методу. В ходе этой оценки принимаются во внимание следующие сенсорно-моторные функции:
самопроизвольная подвижность, рефлекс схватывания, зрительная реакция и реакция на потерю опоры, рефлекс сгибания лап, рефлекс выпрямления, тест подвешивания за хвост. Минимально возможное количест
во очков для животного, не подверженного
ишемии, составляет 17.
В табл. 3 приводится применительно к соединению А, введенному внутрибрющин- но при дозе 0,76 мг/кг (3,2 нмоль), среднее значение неврологических очков, определенных для всех выживших животных контрольной группы и обработанной группы, зарегистрированных через 2 дня после перевязываний. Статистическое значение (Р) разницы между этими средними значениями определяется по тесту Ман-Витнея.
Из табл. 3 видно, что соединение А при очень слабой дозе значительно смягчает у обработанных животных неврологический дефицит, вызванный ишемией.
б) Односторонняя многочасовая мозговая ишемия у крыс.
У .самцов крыс Спрага - Доулея (SPF), возрастом 8-9 недель вызывают постоянную Одностороннюю церебральную ишемию (или эмболизацию) путем введения в правую сонную артерию 2000 микросфер диаметром (58 ± 2) мкм после перевязывания правой артерии птеригопалатины.
Исследуемое соединение вводят в первый раз за 30 мин до и второй раз после через 30 мин после эмболизации, а контрольной группе животных вводят только физиологическую сыворотку. Затем крыс оставляют в покое, У выживших животных через 6 дней после восстановления измеряют:
1)остаточный неврологический дефиците помощью теста положения тела и походки животных (тест А, максимальное количество очков 4).
В этом тесте оцениваются анормальное положение задних лап; контралэтеральный наклон тела при передвижении; гомолате- ральное продольное сгибание тела и анормальная походка.
2)сенсорно-моторные функции (самопроизвольная подвижность, рефлекс схватывания, зрительная реакция и реакция на потерю опоры (тест В , максимальное количество очков 10), (С.Калдевиль,... см. выше).
3)латеризованная сенсорно-моторная ответная реакция (контралатеральная сторона) (тест С, максимальное количество очков 3). Она оценивается в комбинации измерений зрительной реакции, рефлекса ориентации головы к боковому сенсорному раздражителю и кожно-подошвенного рефлекса..
4)осязательное отмирание с левой стороны (тест D, максимальное количество очков 300). В противоположность другим указанным тестам, для которых дефицит тем больше смягчается, тем больше счет, здесь дефицит тем больше, чем ближе счет к 300.
На седьмой день измеряют еще отек, имеющийся в различных гомолатеральных мозговых структурах.
В табл. 4 приводится для соединения А, введенного внутрибрюшинным путем при дозе 0,76 jur/кг (3,2 нмоль/кг), результаты, полученные в тестах A-D, т.е. среднее значение неврологических очков, определенных по всем выжившим животным контрольной группы и обработанной группы через 6 дней. В ней указано также среднее изменение массы тела, измеренной на седьмой день.
Статистическое значение (Р) разницы между средними значениями, рассчитанными /ля контрольных животных и обработанных животных, определяется по тесту Ман - Витнея.
Из табл. 4 видно, что соединение А значительно смягчает неврологический дефицит и поведение, вызываемое ишемией, и улучшает ход изменения массы обработанных животных.
В табл. 5 указано количество воды, удержанное в различных гомолатеральных
мозговых структурах и у контрольных животных, и у выживших обработанных животных на 7-й день после вынесения болезни. Полученные результаты показывают, что обработка соединением А значительно
уменьшает гомолатеральный отек в различных изучениях мозговых структурах.
а). Сравнительна я фиксация с радиолигандом.
Целью экспериментов по сравнительной фиксации является измерение сродства, которое имеет соединение, полученные согласно изобретению, для с -адренергических рецепторов. Эти эксперименты выявляют сравнительное фиксации на адренергических рецепторах, с одной стороны, изучаемого соединения и, с другой стороны, радиолиганда, который с этом частном случае о&-адренергических рецепторов, является Н клонидином, известным как избирательный 02-адренергический агонист.
Кривые смещения фиксации 3Н клонидина определяют при девяти концентрациях соединения А, составляющих моль/л, и с тремя различными мембрзнны.-. ми составами мозга крысы. Образцы инкубируют в течение 30 мин, затем фильтруют
в вакууме на фильтре Ватман GF/B. Фибти- пы промывают три раза посредством 5 мл буферного раствора трис-HCI (рН 7,5 - при 0°С), затем высушивают в течение 1 мин. Радиоактивность измеряют в среде эконофтор (-NENCorp.) Использующийся 3Н клонидин (25,5 Cl/ммоль) представляется фирмой Амерхэм.
Сродство соединения А для Ой-адре- нергических рецепторов рассчитывают из
кривых перемещения Н клонидина. Оно выражается концентраций (ICso в моль/л) соединения А, необходимой для получения 50%-ного торможения фиксации радиолиганда на рецепторах. Полученные результаты показывают, что соединение А имеет значительное сродство для сф-адренергиче- ских рецепторов:
СбО (8,90±0,72) х моль/л.
б). Раздражение выделенного предсердия морской свинки.
Выделение норадреналина на уровне нервных окончаний регулируется механизмом ретроконтроля пресинаптическими ОЈ-адренергическими рецепторами. Этот механизм на предсердии морской свинки.
Электрическое раздражение выделенного предсердия морской свинки приводит к выделению норадреналина, которое выражается в повышении частоты биения сердца (тахикардия), что тормозится 02-агонистом, таким, как, например, клонидин, в пропорции, которая зависит от использованной дозы агониста.
Действие %-агониста может ограничиваться в присутствии од-специфического антагониста, такого, как альфа-йохимбин. Активность In vitro соединений, полученных согласно изобретению, по отношению к пресинаптическим сг2-адренергическим рецепторам определяют на выделенном предсердии морской свинки с электрическим раздражением по известному методу. Исследуемое соединение тестируют при увеличивающихся концентрациях 10 моль/л. Определяют концентрацию (Сзо в; моль/л), которая вызывает 30%-ное снижение максимальной тахикардии , исходно полученной при электрическом раздражении предсердия при отсутствии тестируемого соединения.
В табл. 6 показаны.концентрации Сзо (в моль/л), полученные для соединений, согласно изобретению, а также для клониди- на.
И-з табл. 6 следует, что соединения, полученные согласно изобретению, противодействуют тахикардии, вызванной электрическим раздражением, при очень небольших концентрациях.
Кроме того, при концентрации альфа- йохимбина моль/л концентрация соединения А, необходимая для получения 30%-ногр снижения тахикардии, превышает 10 моль/л. Эти результаты доказывают, что соединения, полученные согласно изобретению, действуют посредством специфического механизма через О2-агонистическое воздействие.
в). Раздражение подвздошной кишки морской свинки.
Фрагменты продольных мышц, связанных с индикатором изометрического усилия, погружают в раствор тирода и натягивают с усилием 1г.
Электрическое раздражение парасимпатических нервов, приводящих в фрагменты подвздошной кишки, вызывает
сокращение мцшцы. Это сокращение уменьшается в присутствии пресинаптиче- ского «2- агониста, а уменьшение зависит от концентрации использованного агониста.
Это действие антагонизируется одновременным наличием oz-антагонистического соединения, такого, как альфа-йохимбин.
Изучаемые соединения тестируются при возрастающих концентрациях от
до моль/л.
Определяют концентрацию (ICso в моль/л), которая уменьшает на 50% интенсивность сокращения мышцы.
В табл. 7 приводятся концентрации
ICso (в моль/л), полученные для соединений, полученных согласно изобретению. Эти результаты показывают, что эти соединения являются активными при очень небольших концентрациях.
В присутствии альфа-йохимбина при концентрациях моль/л концентрация соединений, например, А или Б, которая необходима для 50%-ного уменьшения интенсивности сохранения мышцы, является
более высокой и превышает ТО моль/л, что дополнительно подтверждает тот факт, что соединения, полученные согласно изобретению, действительно действуют на уровне пресинаптических о -адренергических рецепторов.
полученных согласно изобретению, определяют на гончих собаках (6 кобелей и 6 сук)
посредством изучения случайных перекрестных перестановок, рандомизированных по 6 путям.
Изучаемое соединение вводится внутривенно в увеличивающихся дозах 2; 6,5; 20;
65 и 200 fir/кг. В течение первых 3 ч после инъекции измеряют объем выделенной мочи.
В табл. 8 для соединения А приводится среднее относительное увеличение (в %) выделенной мочи по сравнению с группой животных, не получивших соединение.
Результаты показывают, что минимальная активная доза, вызывающая сравнительное статистическое увеличения (Р
0,05) мочевыделения составляет у кобелей 6,, а у сук - 2 fir/кг.
Токсичность соединений, полученных согласно изобретению, определяют на сам- цах мышей NMRI посредством теста Ирвина.
Возрастающие дозы изучаемого соединения вводят внутрибрюшинно группам из трех мышей до достижения смертельной дозы (доза, вызывающая смерть двух животных из трех в течение 48 ч).
В таблице 9 указана смертельная доза, отмеченная для соединений, полученных согласно изобретению.
Из табл. 9 следует, что соединения, полученные согласно изобретению, являются слаботоксичными.
Формула изобретения
Способ получения замещенных 2-окси- 3-{1-(1Н-имидазол-4-ил)алкил -бензамидов общей формулы ф n
Yf-tT
п.- число выживших животных.
Средние неврологические счета по истечении 6 дней после внесения
болезни
п - число выживших животных в каждой группе.
0
где Ri - водород или С1 С4-алкил или их нетоксичных фармацевтически приемлемых солей кислот, отличающийся тем. что гидролизуют в кислой среде 2-окси-3- 1-(1Н- имидазол-4-ил)алкил -бензонитрил общей формулы
ОН R,
Н
N
)
N Н
где R.i имеет указанные значения, с выделением целевого продукта в свободном виде или в виде нетоксичных фармацевтически приемлемых солей кислот.
Таблица1
Таблица 2
ТаблицаЗ
Таблица 4
Количество воды в различных, гомолатеральных мозговых структурах
(среднее, %)
Снижение тахикардии
п- число испытаний
Торможение сокращения подвздошной кишки морской
свинки
Анализ вариантности: ХР 0,05;.
хх Р 0,01
Таблица 5
Таблица 6
Таблица 7
Таблица 8
