Средство для снижения агрегации тромбоцитов Советский патент 1993 года по МПК A61K31/195 

Изобретение относится к медицине, в частности к лекарственным веществам, воздействующим на систему крови, а именно к веществам, снижающим агрегацию тромбоцитов.

Цель изобретения - изыскание отечественного лекарственного вещества, по эффективности не уступающего тренталу.

Эта цел ь достигается тем, что для ослабления процесса агрегации тромбоцитов и стимуляции дезагрегации агрегированых тромбоцитов используется соединение, относящееся к N-хлорпроизводным природных ймино- и иминокислот:

N-хлораминокислоты общей формулы

н о

R-C-C-OH , ЧМ H-N-C1

где R обозначает Н(1.1), СНз(1.2),

СН-СН3(1.3Л, СНГСН-СНЪЦ.

сн3снъ

CH-CH7-CH3 0-5), СН2-СН2-СН2-СН3(1.6), СН-5 t .

СН2-ОН(1.7), сн-сн(1.8), .он.

о СНа-СООН (1.9), снгс-кнгиио,

СН2-СН2-СООН (1.11), СЙгСНгС Нг(1.12

.-, ° х CH2-CH2-CH2-NH2 (1.1.3),

CH2-CHrCHl-C-NHlt1., NH

СН сн-сн-СН(1И5) ; (,1В);

(Л

с

00 СлЭ

4

ел

с

N-хлориминокислоты общей формулы

RrCHсн.

(2)

сн2 сн-соон,

L2 / N

С

где Rt обозначает Н(2.1) или ОН (2.2).

На фиг.1 представлены типичные кинетические кривые агрегации тромбоцитов кролика в контроле и при дезагрегирующем действии хлораланина; на фиг.2 - типичные кинетические кривые АДФ инду- цированной агрегации тромбоцитов человека при действии хлораланина.

Изобретение поясняется следующими конкретными примерами.

П р им е р 1. N -Хлор- а -аланин (М-хло- раминопропионовая кислота) был приготовлен следующим образом:

(1)готовили раствор аланина в физиологическом растворе в концентрации 200 мМ путем растворения 0,178 г в 10 мл 0,9% раствора хлористого натрия;

(2)при интенсивном перемешивании к 18 мл гипохлорита натрия в концентрации 200 мМ добавляли 2,2 мл полученного раствора (1). При этом молярная концентрация аминокислоты превышает концентрацию гипохлорита примерно на 10%.

Выход N-хлор ее -аланина контролировали спектрофотометрически.

В опытах исследовалась обогащенная тромбоцитами плазма (ОТП) крови кролика. Для получения ОТП кровь, взятая из краевой вены уха кролика, смешивалась с 3,8% раствором цитрата натрия, приготовленном на физиологическом растворе, в соотношении 9:1 по объему, затем центрифугировалась при 100-200д в течении 20 минут при комнатной температуре. Супернатант, представляющий собой ОТП, использовался в дальнейшей работе после 1 часовой- инкубации при комнатной температуре. Время работы с ОТП данного выделения не превышало 4 часов с момента забора крови.

Агрегация тромбоцитов вызывалась добавлением аденозиндифосфата (АДФ) и регистрировалась турбид«метрическим методом Борна, После введения индуктора агрегации светопропускание образцов ОТП возрастает за счет их агрегации. Количественным показателем способности тромбоцитов к агрегации служила разница светотпропускания (А Т) образца до и после достижения максимальной агрегации; в дальнейшем будем называть эту величину степенью агрегации:

N-Хлораланин добавляли в объеме 0,1 мл на 1 мл ОТП при ее интенсивном перемешивании. При введении N-хлоранилина в ОТП (примерно за 1 мин до АДФ) агрегация тромбоцитов ослабляется.Противоагрегаци- онное действие N-хлораланина усиливается при возрастании его концентрации: степень агрегации тромбоцитов снижалась соответственно примерно с 80 до 20% при повышении

конечной концентрации хлораланина от

0,25 до 1 мМ (табл.1).

Аналогичным действием обладает N- хлор- /3 -аланин.

На фиг.1 представлены типичные кинетические кривые агрегации тромбоцитов, индуцируемой 50 мкМ АДФ (стрелка 3 указывает момент введения индуктора), а обогащенной тромбоцитами плазме кролика, По оси ординат - изменение светопропускания (Т, в относительных единицах). По оси абсцисс - время (t, мин)..

Хлораланин в конечной концентрации 1 мМ, введенный в ОТП кролика после полной агрегации клеток (этот момент указан стрелкой 5), оказывает сильное дезагрегирующее действие (кривая 2). В контрольный образец ОТП (кривая 1) в момент полной агрегации тромбоцитов (стрелка 4) добавлялся 0,1 мл физиологического раствора.

П р и м е р 2. По способу, описанному в

примере 1, получали N-хлорглицин. Это соединение испытывалось на обогащенной тромбоцитами плазме крови кролика, методом, описанным в примере 1.

Введение N-хлорглицина в концентрации 1 мМ за 1 мин до введения АДФ в ОТП вызывает ингибирование-агрегации тромбоцитов. Степень агрегации составляет

3 ± 0,6% по отношению к контролю (в контрольные образцы ОТП вводился глицин в конечной концентрации 1 мМ), В используемой концентраци.и сам глицин не вызывает изменения агрегации тромбоцитов.

П р и м е р 3. По способу, описанному в

примере Т, получали N-хлорвалин.. Его вводили в обогащенную тромбоцитами плазму крови кролика за 1 мин до добавления 10 мкМ АДФ. Агрегация регистрировалась способом, . описанным в примере 1. В конечной концентрации.1 мМ хлорвалин ингибировал агрегацию тромбоцитов примерно на 50%,

П р им е р 4. По способу, описанному в примере 1, получали N-хлорлизин. Изучение агрегации тромбоцитов методом, описанным в примере 1, показало, что N-хлорлизин вызывает сильное подавление АДФ-инду- цированной агрегации тромбоцитов в составе ОТП кролика. Так, при введении в ОТП 1

мМ хлорлизина степень агрегации составляла 9% по отношению к контрольному образцу ОТП, куда добавлялся лизин в конечной концентрации 1 мМ.

П р и м е р 5. Получали N-хлорпролин по способу, описанному в примере 1. Агрегация тромбоцитов регистрировалась описанным в примере 1 методом. Иминокислота пролин, добавленная в ОТП кролика в конечной концентрации 1 мМ, не влияет на АДФ-ин- дуцированную агрегацию тромбоцитов. При введении N-хлорпролина в конечной концентрации 1 мМ степень агрегации тромбоцитов составляла 22 ±2% по отношению к контролю.

П р и м е р 6. В опытах исследовалось влияние N-хлор- а -аланина на агрегацию тромбоцитов человека. Хлораланин добавляли в ОТП человека до введения АДФ. Агрегация тромбоцитов регистрировалась по описанному выше способу. Получено, что хлораланин значительно снижает максимальную степень агрегации тромбоцитов человека (табл.2). На фиг,2 представлены типичные кинетические кривые агрегации тромбоцитов человека, индуцированной 2 мкМ АДФ (стрелка 5 - момент введения индуктора). Обозначения по осям те же. что и нафиг.1. При действии хлораланина (стрелки 8 и 9 - момент введения соответственно 1 и 1,5 мМ хлораланина). Через 1-3 мин после добавления АДФ наблюдается значительная дезагрегация (кривая 3 и 4). При введении хлораланина после полной агрегации тромбоцитов человека (стрелка 7 - момент введения 2 мМ хлораланина) наступает частичная дезагрегация (кривая 2). В контрольном образце (кривая 1) стрелка 6 указывает момент введения 0,1 мл физиологического раствора,

Пример. Кролику № 1 в краевую вену ха медленно вводился N-хлораланин в объеме 6 мл на 1 кг массы. Концентрация М-хло- раланина в вводимом растворе составляла 10 мМ. Исследовали агрегацию тромбоцитов по описанному выше методу. Через 5 мин, 1 и 24 часа после окончания введения хлораланина степень агрегации составляла около 90, 40, 70% от степени агрегации до введения препарата.

В контроле (вливание аланина в физиоогическом растворе в концентрации 10мМ, в объеме 6 мл на 1 кг массы) степень агрегаии тромбоцитов через 5 мин и 24 ч составяла около 90% степени агрегации до ливания.

П р и м е р 8. Кролику № 2 в краевую вену ха вводился N-хлораланин (в количестве, ак в примере 7). Агрегация тромбоцитов в

обогащенной тромбоцитами плазме измеряли через 15 мин, 1 и 24 часа; ее степень составляла соответственно около 65, 35 85%. П р и м е р 9. Кролику NfcNs 3 в краевую 5 вену уха вводился N-хлораланин (в количестве, как в примере 7), Способность тромбоцитов к агрегации в ОТП измеряли через 30 мин и 24 часа после окончания введения N-хлораланина. Степень агрегации состав10 ляла соответственно около 40 и 70% от степени агрегации до введения препарата. Таким образом, внутривенное вливание хлораланина вызывает быстрое и резкое ос- лабле.ние агрегации тромбоцитов.

15 П р и м е р 10. По способу, описанному в примере 1, получали N-хлорпроизводные различных классов аминокислот. Их лроти- воагрегационная активность испытывалась на обогащенной тромбоцитами плазме кро0 ви кролика методом, описанном в примере 1. Значительное подавление агрегации имеет место при действии хлор производных многих аминокислот (табл.3). Исключением являются хлорпроизводные триптофана и серосодер5 жащих аминокислот. Их слабая противоагре- гационная способность обусловлена тем, что хлораминовая группа реагируете индольным кольцом или с атомами серы. Это следует из того, что N-хлораланин в смеси с триптофа0 ном или метионином утрачивает способность подавлять агрегацию тромбоцитов (табл.3). Таким образом, в качестве средства для ослабления агрегации тромбоцитов могут быть использованы N-хлорпроизводные всех при5 родных аминокислот кроме триптофана и серосодержащих аминокислот.

Сейчас е клинике с целью ослабления агрегации тромбоцитов используется трен- тал. Трентал обладает умеренной противо0 агрегацией ной способностью. У многих пациентов он слабо подавляет агрегацию тромбоцитов. В наших опытах степень агрегации тромбоцитов после введения трента- ла в ОТП кролика в конечной концентрации

5 0,7 мМ (в такой концентрации.трентал используется в клинике) составляла 84 ± 6% от контроля.

Более сильный эффект подавления агрегации тромбоцитов получается при дейст0 вии ряда N-хлораминокислот (см. примеры 1,2.7).

Таким образом, предлагаемое средство имеет важное народно-хозяйственное значение.

5- Формула изобретение

Применение N-хлорпроизводных ами- но и иминокислот в качестве средства для снижения агрегации тромбоцитов.

Таблица

Влияние N-хлор- а -аланина в разных концентрациях на агрегацию тромбоцитов кролика в составе ОТП, Агрегация индуцировалась 10 мкМ АДФ.

Изобретение относится к медицине, в частности к лекарственным веществам, воздействующим на систему крови, а именно к веществам, снижающим агрегацию тромбоцитов. Предлагается использовать М-хлорп- роизводные амино- и мми но-кислот в качестве средства для снижения агрегации тромбоцитов, 3 табл.

-Та б л и ц.а 2

Влияние N-хлор- а -аланина на агрегацию тромбоцитов человека в составе ОТП. Агрегация индуцировалась 10 мкМ АДФ.

Т а б л и ц а 3

Влияние N-хлораминокислот на агрегацию тромбоцитов в ОТП. Агрегация индуцировалась

ЮмкМ АДФ.

J мин л . 1 --Г

Фиг. 2

Фае.1